寄生虫病的实验室诊断技术

王光雷

（新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐830000）

寄生虫病的实验室诊断技术

王光雷

（新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐830000）

寄生虫病在我国非常普遍，危害严重。本文详细介绍了对动物寄生虫病的各种实验室诊断方法、诊断液的配制、使用方法、虫种鉴定方法，以及作者在长期寄生虫病诊断方面的经验，可为寄生虫病的诊断、治疗、虫种鉴定提供帮助。

寄生虫病；实验室诊断

动物寄生虫病在我国比较严重，寄生虫病主要呈慢性、消耗性危害动物的健康，寄生虫病是制约畜牧业发展的重要因素之一。在我国常见的寄生虫主要有肝片吸虫、双腔吸虫、绦虫、消化道线虫、肺丝虫、原虫、外寄生虫等，这些寄生虫寄生在动物的体表、肝脏、肺脏、消化道内，不断的吸取血液、夺取营养、损害组织器官，造成动物生长缓慢、消瘦、生产性能下降、母畜流产等，感染严重的动物甚至出现死亡，为了有效消灭和控制这些寄生虫病，必须对寄生虫病病原进行鉴定，以便对症下药，科学驱虫。

1 根据症状对寄生虫病的诊断

寄生虫除骨头不能寄生外，可寄生在全身的各个系统和组织中。宿主出现的临床症状和寄生部位密切相关。

虫体寄生在消化系统(胃、肠、肝、胰)中，宿主出现消化不良，肠炎，拉稀，便血，消瘦，贫血等症状。如线虫、绦虫、吸虫等。

虫体寄生在神经系统(脑、脊髓)中，宿主出现沉郁，转圈运动，倒地划泳，瘫痪等症状。如羊的脑包虫病，马脑脊髓丝虫病（牛腹腔丝虫幼虫）。

虫体寄生在呼吸系统(鼻腔、气管、肺)中，宿主出现呼吸困难，咳嗽，肺炎，体温升高等症状。如羊鼻蝇蛆病，大、小型肺丝虫病。

虫体寄生在血液中，宿主出现体温升高，黄胆，贫血，精神沉郁，厌食。如伊氏锥虫、泰勒焦虫、血吸虫等。

虫体寄生在体表，宿主出现骚痒不安，踢咬患部，皮肤发红，破损，增厚，掉毛等。如羊的疥癣病、蜱病。

虫体寄生在眼内，宿主出现羞明，流泪，眼炎，失明等症状。如丝状线虫进入非固有宿主马、牛眼前房，引起的浑睛虫病。吸吮线虫寄生在马牛结膜囊、第三眼脸和泪管内。

虫体寄生在泌尿系统（肾）中，宿主出现尿液呈白色、粘稠，有时有脓液；母畜不孕，公畜失去交配能力等。如猪的有齿冠尾线虫病。

虫体寄生在肌肉内，多数无明显症状。如猪囊虫、牛囊虫、住肉孢子虫、旋毛虫等。

少数寄生虫寄生部位与症状无明显关系，如美丽筒线虫寄生在食道粘膜下。

2 寄生虫病的活体诊断

2.1 外寄生虫的鉴定

硬蜱、软蜱、痒螨、疥螨、毛虱、血虱、羊蜱蝇、蠕形蚤等外寄生虫形态较大，采集后去除杂物，洗净后放入70%的酒精中，带回实验室，在解剖镜下进行观察鉴定。

痒螨和疥螨虫体较小，痒螨的大小在0.7 mm以下，疥螨的大小在0.5 mm以下，眼观不易发现。螨虫的诊断方法如下：用毛剪剪去皮肤病变部位与正常部位交界处的羊毛，然后用手术刀垂直刮取交界处皮肤，直到皮肤微微出血，将刮下的皮屑放在平皿内，在有黑色衬底的平台上观察，可用眼观、放大镜进行观察，必要时可放到立体显微镜下观察。

2.2 蠕虫和球虫的诊断方法

对于吸虫、线虫、肺丝虫、棘头虫、绦虫、球虫的诊断，可使用新疆畜牧科学院兽医研究所生产的国家专利产品《动物粪便虫卵诊断盒》和《肺丝虫幼虫诊断盒》进行诊断。

2.2.1 《动物粪便虫卵诊断盒》漂浮法的操作方法

漂浮法主要用于动物粪便中线虫虫卵、绦虫虫卵和球虫的诊断。操作方法如下：

a.打开《动物粪便虫卵诊断盒》，取出试管架和饱和盐水瓶。

b.用镊子将2 g粪样放入烧杯中，加饱和盐水20 mL，用搅棒充分搅拌。然后用纱网将漂浮物捞出。

c.通过滤网将充分搅拌的粪液过滤到试管内，液面略高于试管口。

d.将盖玻片轻放在试管上，静置20 min。

e.将盖玻片移至载玻片上，然后放到显微镜下进行观察鉴定。看见虫卵，与动物粪便虫卵模式图进行对照，即可做出诊断结果。

2.2.2 《动物粪便虫卵诊断盒》沉淀法的操作方法

沉淀法主要用于动物粪便中吸虫虫卵的诊断。操作方法如下：

a.用镊子将2 g粪样放入烧杯中，加入常水20 mL，用搅棒充分搅拌。

b.通过滤网将充分搅拌的粪液过滤到试管内。

c.静置20 min，弃上清液，约留2～3 mL；然后再往试管内加满常水。

d.静置20 min，弃上清液，约留2～3 mL；

e.用吸管轻轻从上往下吸出1.5～2.5 mL，试管内剩约0.5 mL。

f.充分摇动试管，并将剩余液体吸入吸管中，滴加到载玻片上。

g.将盖玻片移至载玻片上，然后放到显微镜下进行观察鉴定。看见虫卵，与动物粪便虫卵模式图进行对照，即可做出诊断结果。

用漂浮法和沉淀法诊断蠕虫病感染情况时，虫卵鉴定一般只能鉴定到属，但对驱虫药品的选择使用没有影响。

2.2.3 虫卵的保存方法

将收集的虫卵放入保存液中。

保存液配方：福尔马林10 mL、95%酒精30 mL、甘油40 mL、蒸馏水56 mL。

2.2.4 《肺丝虫幼虫诊断盒》的操作方法

a.打开《肺丝虫幼虫诊断盒》，取出漏斗架及器皿。

b.取15粒（15 g）粪样，用纱布包裹并系紧，然后放在漏斗中。

c.往漏斗内加入40℃温水，以不溢出为宜，放置30 min。

d.用止水夹夹住胶管，然后取下胶管下方的小试管。

e.用吸管轻轻从液面的上方向下吸出液体，弃之，使试管内剩余0.5～1 mL液体。

f.用吸管吸取剩余部分，滴加到载玻片上，然后盖上盖玻片。

g.放到显微镜下观察，如发现游动的虫体，便可做出诊断。

2.2.5 血液原虫的鉴定

血液原虫主要包括巴贝斯虫、泰勒焦虫、边缘边虫、伊氏锥虫等。对原虫的诊断，主要有两种方法，一种是采一滴新鲜血液滴加到，盖上盖玻片，在显微镜下直接观察；另一种是采血，制作血片，然后染色观察、高倍镜下进行鉴定。

姬姆萨尔染液（原液）的配制：称0.6 g姬姆尔萨染料，放入50 mL甘油中，60℃水浴1.5 h，之后加入甲醇50 mL，静置1 d，过滤装瓶，此液即为原液。

染色方法：在染色前，先配制染液。每100 mL蒸馏水加2 mL原液。

检查方法：制作血片、甲醇固定、干燥、放入染液中1至数小时、取出水洗、干燥后镜检。

3 寄生虫标本的采集方法

3.1 建立采集标本登记表

登记表内容包括畜主、时间、地点、畜种、年龄、性别、体重、采集的部位、数量等。

3.2 准备剖检器械用品

在进行标本采集前，必须做好准备工作，如采集标本所用的各种器械和用品。采集标本所用的器械有：生物显微镜、解剖显微镜、载玻片、盖玻片、不同直径的平皿、注射器、手术剪、手术刀、镊子、挑虫针、塘瓷盘、放大镜、量筒、标本瓶、标签、酒精、酒精灯、食盐、线绳、水桶、手套、工作服、肥皂、毛巾、消毒液等。

3.3 常规剖检采集标本的顺序

采血做血片；检查体表有无外寄生虫；常规剖检；分离各脏器，消化道要分段双结扎；然后对头部（眼、鼻腔、脑、舌）、肌肉、腹腔、后腔静脉、各脏器进行检查。

现将各系统的检查方法分述如下：

a.肌肉的检查：检查有无囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫。

b.腹腔液的检查：检查有无腹腔丝虫。

c.后腔静脉的检查：检查血管内有无血吸虫。

d.头部的检查：检查眼结膜和结膜腔，剖开眼球，将前房水收集于平皿中，在放大镜下检查有无眼虫。检查鼻腔有无羊鼻蝇蛆。检查脑内有无多头蚴（脑包虫）。检查舌内有无大型住肉孢子虫。

f.呼吸系统的检查：检查肺表面有无棘球蚴包囊；有无寄生虫性结节，有些小型肺丝虫寄生在这些结节中；之后，用剪刀将气管、支气管、小支气管剪开，检查有无虫体大小肺丝虫。

g.肝脏的检查：检查肝表面有无棘球蚴包囊；剪开肝管、胆囊，检查有无肝片吸虫、双腔吸虫。

h.胰脏的检查：检查胰管内有无阔盘吸虫。

i.心脏的检查：切开心脏，检查有无寄生在心脏内的吸虫、线虫。

j.泌尿系统的检查：检查肾脏及其周围脂肪组织中有无肾虫；切开肾脏、膀胱，检查有无肾虫。

k.消化系统的检查：将食道，胃（反刍兽应将四个胃分开）、小肠、大肠、盲肠分别双重结扎后分离。

检查食道上有无大型住肉孢子虫；之后，剪开食道，检查食道粘膜下有无美丽筒线虫。

胃和各肠段均应分别置于容器内，剖开，加水将内容物洗入水中。洗净的胃、肠粘膜应仔细检查其上是否附有虫体，并用小刀刮取胃肠粘膜，将刮下物置解剖镜下检查。洗下物应多加生理盐水，反复地多次洗涤，沉淀，待液体清净透明后，分批取少量沉渣，放入大培养皿的清水中，先后放于白色和黑色的背景上，寻找虫体。

3.4 线虫标本的采集方法

用挑虫针将器官内的虫体挑出，放在0.9%的盐水中洗干净，然后将洗净的虫体放入70℃的酒精中，虫体伸直后，将虫体挑入含5%甘油的80%的酒精中，加标签保存。

3.5 吸虫和绦虫标本的采集方法

将洗净的虫体（吸虫和绦虫头节及孕卵节片）放在两块玻璃板之间，用细线绑扎，两端要用纸层垫住，防止把虫体压裂，然后滴入75%酒精，24 h后将虫体取出，放入小瓶内，加标签保存。

3.6 蜘蛛、昆虫标本的采集方法

对采集的大型外寄生虫，可将其洗净后直接放入标本瓶内。螨虫必须先刮皮屑，检出虫体，放入75%的酒精内。

3.7 原虫的采集方法

血液原虫要采血做血片。球虫做粪便涂片检查。住肉孢子虫做肌肉压片检查。

4 虫种鉴定方法

4.1 线虫的鉴定

目前多采用对线虫进行透明处理后，在显微镜下进行观察、测量、绘图、描述等。

线虫透明液有多种。石炭酸酒精透明液配方：石炭酸4份+无水酒精1份。乳酸苯酚透明液配方：甘油2份+乳酸1份+石炭酸1份+水1份。

使用石炭酸酒精透明液时，可直接将虫体放入透明液中，短时内即可透明。然后将透明的虫体放到载玻片上数条，头朝下方，盖上盖玻片，在显微镜下进行观察鉴定。

使用乳酸苯酚透明液时，要先将鉴定的虫体移入1%的福尔马林中2 h，然后再将虫体放入透明液中，30 min后，可对透明的虫体进行鉴定。

4.2 吸虫和绦虫的鉴定

大型吸虫和绦虫要制成染色标本后进行鉴定；小型吸虫(小肠斯氏吸虫)和绦虫（禽类小型绦虫）可在现场直接进行初步鉴定。

染色液配方：

a.盐酸卡红染液：蒸馏水15 mL+盐酸2 mL，煮沸，趁热加入卡红染粉4 g，再加入85%酒精95 mL，再滴加浓氨水以中和，冷却后过滤，滤液即为盐酸卡红染液。

b.硼砂卡红染液：4 g硼砂+100 mL蒸馏水+1 g卡红染粉，加热使其溶解，再加入70%酒精100 mL，冷却后过滤，滤液即为硼砂卡红染液。

c.洋红染液：洋红5 g、盐酸5 mL、蒸馏水5 mL、混合溶解。1 h后加入90%酒精100 mL，水浴锅加热至沸腾后追加90%酒精至200 mL。

吸虫和绦虫的染色步骤：

a.染色：将保存在酒精中的标本直接放入染液中染色。保存于福尔马林液内的虫体标本，应先取出水洗1～2 h，而后循序通过30%、50%、70%的酒精各0.5～1 h，之后再投入染液中。在染液中过夜，使虫体染成深红色。

b.脱色：将染色后的虫体移入脱色液盐酸酒精(2 mL盐酸+100 mL70%酒精)中，使颜色深浅分明，呈淡红为止。

c.脱水：依次通过80%、95%、100%酒精中脱水各30 min。

d.透明：将脱水后的虫体移入二甲苯中透明。

e.封片：将透明后的虫体放到载玻片上，滴加拿大树胶，加盖玻片封固、贴标签。

4.3 蜘蛛、昆虫的鉴定

对大型虫体可直接放到解剖镜下进行观察鉴定，对小的虫体须制作封片鉴定。

蚤类标本（小标本）的制做：

a.消蚀：将标本取出，放入清水洗净，然后放入10%氢氧化钠消蚀其软组织1～3 d。

b.中和碱性：将蚤在清水中洗净，放入1%冰醋酸中1 h左右。

c.脱水：在50%、70%、80%、95%、100%酒精中各1.5 h。

d.透明软化：放入丁香油中1 h。

e.封片：用加拿大树胶或阿拉伯胶封片。

4.4 原虫的鉴定

原虫较小，需在显微镜下进行观察。血液性原虫要制作血片，染色后进行观察鉴定。旋毛虫、住肉孢子虫可用做肌肉压片的方法，直接在显微镜下观察；要进行超微结构观察时，可按照扫描电镜和透射电镜样本的制作要求，然后将标本放到电子显微镜下进行观察。球虫类可做涂片，在显微镜下做一般性诊断。

血片的制作方法：采血、抹片、甲醇固定并干燥、放入染液中1至数小时、取出水洗、干燥，之后进行镜检。

5 虫种鉴定经验

前面介绍了寄生虫标本的采集方法、鉴定方法、寄生虫病的诊断方法，要快速、准确鉴定一个虫种可按下列方法进行。

a.按照寄生虫标本的采集方法制作可观察标本。

b.对标本进行细致的观察，记述虫体的形态特点，包括虫体的数量、虫体的大小、形态、各器官的大小、形态、所处位置等，并根据观察绘制简图。

c.根据宿主的不同，大致确定寄生虫的范围，确定寄生虫属于哪一类动物的寄生虫，如：反刍动物寄生虫、马属动物寄生虫、鸟禽类寄生虫、鱼类寄生虫、野生动物寄生虫、两栖类动物寄生虫。不同类型的宿主，寄生虫种类有所不同。根据调查结果，可查找有关宿主和寄生虫资料。目前，新疆畜牧科学院兽医研究所主办的物种身份证编码信息网（http://www.wzsfz.com）可提供较为齐全的资料。

d.按照寄生虫分类学方法，将标本的特点与动物界之下的门、纲、目、科、属的定义，逐级进行比对，基本可推断到属。

e.将属里的寄生虫图谱或有关记述与标本比对，就可确定该虫种。

f.对新种的发现，应将标本与该属所有报道的虫种进行比对，确在形态上有所不同，可定新种。新种要有一定的数量，具有种群，不能发现1～2个虫体就定为新种。在很多情况下，有的虫体会出现畸形，也有标本处理不当出现标本的变形或变态。

g.根据鉴定结果，与查找的资料分析，还可判定鉴定标本是否新宿主的发现，或新地域的发现。

h.根据以上鉴定程序、鉴定内容、撰写有说服力的鉴定报告。

[1]北京农业大学.家畜寄生虫学[M].北京：农业出版社，1983.

[2]于心，叶瑞玉，龚正达.新疆蜱类志[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1997.

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[7]卫广森：兽医全攻略[M].北京：中国农业出版社，2009.

Laboratory Diagnostic Techniques of Parasites

WANG Guang-lei
(Veterinary Research Institute，Xinjiang Academy of animal science，Urumqi 830000，China)

parasitic disease is very common in our country and can cause serious harm to people.This paper introduces various laboratory diagnosis methods,the preparation of diagnostic solution,means of use,species identification method about animal parasitic diseases in detail.we also introduces our parasitic disease diagnosis experiences in long-term work.This paper would contribute to the diagnosis of parasitic diseases, treatment and species identification.

parasitic diseases;laboratory diagnosis

S853.32

A

1003－6377（2013）03－0039-05

2013-02-07

资金项目：国家绒毛用羊产业技术体系专项（CARS-40-11）；国家公益性行业（农业）科研专项（201303037-5）

王光雷（1955-），男，硕士，研究员，长期从事动物寄生虫病的防治研究。