扶正颗粒剂含量测定方法的研究

于秀娟

（内蒙古兴安盟妇幼保健所 内蒙古 兴安 137400）

扶正颗粒剂属于院内制剂，原处方由黄芪、当归、枸杞和陈皮四味中药组成，临床上用于提高放化疗后肿瘤患者血中的白细胞数，以提高机体免疫力，从而降低放化疗毒副作用[1－7]。原剂型为汤剂。为实现规模化生产，方便肿瘤患者用药，拟将其改为颗粒剂。以方便患者使用。为保证产品质量的可控性，采用HPLC法对扶正颗粒剂中黄芪甲苷进行含量研究，[8]方法准确、简便、快速，能有效控制扶正颗粒剂的质量。该研究为完善和提高药品质量标准提供依据。

1 实验材料和仪器

1.1 试剂与试药：正丁醇（天津市风船化学试剂科技有限公司 批号080912）；氨水（天津市风船化学试剂科技有限公司 批号090118）；甲醇（天津威晨化学试剂科贸有限公司 批号080509）；无水乙醇 （天津市化学试剂三厂 批号090512）；黄芪甲苷对照品（成都曼思特生物科技有限公司批号20070901）。芪归扶正颗粒剂三批 本实验室制备。

1.2 仪器：p230高效液相色谱仪EC2000色谱工作站（大连依利特）；蒸发光散射检测器 ELSD800（Alltech）；色谱柱（大连依利特E1720833 Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm）；KH3200E型超声波清洗机（昆山禾创超声仪器有限公司）；AB135－S电子天平 （METTLER TOLEDO）101－3型电热鼓风箱（上海市上海县实验仪器厂）；旋转蒸发仪RE－52A（上海亚荣生化仪器厂）

2 含量测定方法

精密量定芪归扶正颗粒剂约3.7g，加入40倍量70%乙醇，充分振摇，放置30min后，超声提取30min，过滤，滤渣用70%的乙醇50ml充分冲洗，滤液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次80ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇定容至2ml量瓶中，进样10μl，以乙腈－水＝36∶64为流动相，流速1.0ml/min，ELSD检测器漂移管温度为70℃，气体压力为3MP测定扶正颗粒剂中黄芪甲苷的含量。

3 方法学考察[9]

3.1 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：大连依利特E－1720833Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm；流动相：乙腈－水＝36∶64，流速1.0ml/min；ELSD检测器参数：漂移管温度为70℃，气体压力为3 MP。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品5.26mg，用甲醇定容至5ml量瓶中，超声3min，摇匀，即得，浓度为1.052mg/ml。

3.2.2 供试品溶液的制备：取芪归扶正颗粒剂约3.7g，精密称定，加入40倍量70%乙醇，充分振摇，放置30min后，超声提取30min，过滤，滤渣用70%的乙醇50ml充分冲洗，滤液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次80ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇定容至2ml量瓶中，即得。标准品溶液和供试品溶液的HPLC色谱图见图1和图2。

图1 标准品溶液HPLC色谱图

3.3 线性关系考察：精密量取对照品溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1ml置于1ml量瓶中，用甲醇定容。微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液于EP管中，进样20μl，以峰面积与对照品浓度进行线性回归，回归方程：y＝1027.1x－29.349，R2＝0.9996。结果表明，黄芪甲苷浓度在0.1052mg/ml～1.0520mg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。结果见表1、图3。

图2 供试品溶液HPLC色谱图

表1 黄芪甲苷标准曲线测定值

图3 黄芪甲苷标准曲线

3.4 精密度试验：样品液配制同“供试品溶液的制备”，用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液。连续平行进样五次，每次进样10ul，测定黄芪甲苷的峰面积，结果见表2。

表2 精密度试验数据

表3 重现性试验数据

3.5 重复性试验：样品液制备同“供试品溶液的制备”，平行提取样品5份，用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液，分别进样10ul，测定每份样品黄芪甲苷的峰面积，结果见表3。

3.6 稳定性试验：样品液配制同“供试品溶液的制备”，用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液。每隔2小时进样一次，连续测定6次，即分别于0h、2h、4h、6h、8小时、10h进样测定，每次进样10μl，测定不同时间点黄芪甲苷的峰面积，结果见表4。

表4 稳定性试验数据

表5 加样回收试验数据

表6 含量测定试验数据

3.7 加样回收试验：取芪归扶正颗粒剂5份，每份约1.8g，精密称定，每份加入1.044mg/ml的黄芪甲苷对照品1ml，以下步骤同“供试品液制备”，得到的样品液用微孔滤膜过滤，收集续滤液。每份进样10μl，测每份样品中黄芪甲苷的峰面积，结果见表5。

3.8 芪归扶正颗粒剂中黄芪甲苷的含量测定：称取平行制备的三批芪归扶正颗粒剂，按“供试品溶液的制备”项下的方法提取，提取液微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液，每份进样10ul，测黄芪甲苷的峰面积，结果见表6。

4 结果

本课题应用高效液相色谱法测定芪归扶正颗粒剂中黄芪甲苷的含量，并对标准曲线的线性范围（0.1052mg/ml－1.0520mg/ml），精密度（RSD＝1.92%），重复性（RSD＝1.01%），稳定性（RSD＝1.64%），平均加样回收率（96.60%RSD＝1.85%）进行了考察，结果均符合方法学要求，可以作为芪归扶正颗粒剂中黄芪甲苷的含量测定方法。

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