UFLC测定护肝胶囊中五味子甲素的含量

马福家 司晓莉 曾晓娟

（中国人民解放军第四五五医院药剂科 上海 200052）

护肝胶囊由药典收载品种护肝片改造工艺而来，制剂处方由柴胡、五味子等组成，具有疏肝理气，健脾消食，降低转氨酶的作用，用于慢性肝炎、迁延性肝炎及早期肝硬化等[1]。五味子，俗称山花椒、秤砣子、药五味子、面藤、五梅子等，《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。《中国药典》2010版采用高效液相色谱法测定五味子甲素的含量来控制五味子的质量，中成药中五味子甲素的含量测定方法已有报道[2-3]，但对护肝胶囊中五味子甲素的含量测定鲜有报道。现对制剂中五味子甲素含量进行测定以控制护肝胶囊的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UFLC-20AD超快速液相色谱仪、PAD检测器MB20A、LCsolution色谱工作站（日本岛津公司）；BP211D型1/10万电子天平（德国Sartorius公司）；电热恒温水浴锅(南通通海电器厂)。

1.2 试药

五味子甲素对照品（购自中国药品生物制品检定所）；水为娃哈哈纯净水；实验中所用化学试剂除高效液相用甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；护肝胶囊由吉林修正药业集团股份有限公司提供，阴性对照为本实验室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性

色 谱 柱：Agilent SB C18(100 mm×4.6 mm，1.8 µm)；流动相： 水为流动相A，乙腈为流动相B；梯度洗脱：0～3 min(B ：55%)，3～15 min(B ：55%～20%)，15～15.1 min(B：20%～0)，15.1～17 min( B：0)；流速：0.4 ml/min；柱温：40 ℃ ；检测波长 ：250 nm ；进样量 2 µl。

2.2 对照品溶液的制备

取五味子甲素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含五味子甲素48.9 μg的对照品溶液， 经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取护肝胶囊内容物适量，混匀，研细，取约0.7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的乙酸乙酯25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过，精密量取续滤液15 ml，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过后，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方组成比例制备缺五味子阴性制剂，再按供试品溶液的制备方法，制备五味子阴性对照溶液。

2.5 系统适用性实验

吸取五味子甲素对照品溶液、护肝胶囊供试品溶液及缺五味子的阴性对照品溶液各10 µl，注入超高速液相色谱仪进行分析，结果表明，阴性对照溶液在与五味子甲素对照品峰相同的保留时间处无干扰峰出现，说明处方中其他味药对测定结果无影响，结果见图1。

2.6 线性关系考察

精密吸取2.2项下的对照品溶液1、5、10、15、20µl，注入超高速液相色谱仪，记录峰面积。以进样量X（µg）为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，五味子甲素的回归方程为：Y=37 960X+93 183（r=0.999 8），表明五味子甲素进样量分别在0.016～0.323 µg/µl范围内有良好的线性关系。

2.7 精密度试验

取2.2项下的对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，进样量5 µl，测定峰面积值，计算五味子甲素峰面积的RSD=0.80(n=5)。结果表明精密度良好。

2.8 稳定性试验

取本品(批号110901)10 ml，按2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、4、8、12、24 h进样1次，考察精密度(RSD=0.60，n=5)，结果供试品溶液中五味子甲素在24 h内峰面积无明显变化。

图1 护肝胶囊及对照品UFLC图

2.9 重复性试验

取护肝胶囊样品(批号：110901)5份，按2.3项下方法制备样品供试液，按上述色谱条件进行含量测定，结果五味子甲素平均含量为0.373 827 mg/g，RSD为3.20(n=5)， 表明此法重复性良好。

2.10 回收率试验

取同一批已知含量的样品(批号110901) 5份，每份5 ml，分别准确加入对照品溶液五味子甲素（16.3 μg/ml）8 ml。按2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按其项下色谱条件进行测定，计算回收率。五味子甲素平均回收率(n=5)为96.5%，RSD为2.5。试验结果表明加样回收率良好。

2.11 样品测定

取3批护肝胶囊(批号分别为091103、110802、081101)，照上述方法测定护肝胶囊中五味子甲素的含量，结果见表1。

表1 三批护肝胶囊样品的含量测定结果（mg/g）

3 讨论

护肝胶囊中五味子具有气阴双补，养肝护肝之效。其中五味子甲素为主要有效成分，因此测定护肝胶囊中五味子甲素的主要含量，对更好地控制护肝胶囊的内在质量具有重要意义。

在流动相的选择上，我们曾采用药典中的流动相即甲醇-水(63：37）。但分离效果不是很好，故选用了乙睛-水为流动相进行梯度洗脱的方法，五味子甲素与其它杂质峰分离良好。

在仪器使用上，本文所采用的超快速液相色谱。超快速液相色谱(ultra fast liquid chromatography，UFLC)是近年来出现的新技术，其色谱柱选用1.8 μm粒度的C18填料，因此可获得更高的柱效，并在更宽的线速度范围内能保持柱效恒定，有利于提高流动相流速、节省分析时间和增加峰容量。与HPLC相比，UFLC具有超高分离度、超高速度和超高灵敏度的优点，因而适于成分复杂的中药等样品的分离。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010: 760-761.

[2]沙美,史道芬,欧阳强.高效液相色谱法测定护肝胶囊中五味子醇甲的含量[J].时珍国医国药,2007,18(7): 1671-1672．

[3]杜英峰,袁志芳,王春英,等.高效液相色谱法同时测定护肝片中五味子甲素和五味子乙素的含量[J].药物分析,2004,24(4): 397-399.