HPLC法测定珍杞降糖胶囊中绿原酸的含量
2013-03-05陈艳梅刘传辉
陈艳梅 刘传辉
[摘要]目的建立珍杞降糖胶囊中绿原酸的HPLC含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为AgilengtEclipsePlusC18柱(4.6mm×100mm);流动相:乙腈-0.4%磷酸(17︰83);流速:0.6mL/min;检测波长:327nm。结果绿原酸在0.0433~0.6938μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为98.39%,RSD=0.58%(n=6)。结论本方法简便快速、结果准确,可较好地控制该制剂的质量。
[关键词]珍杞降糖胶囊;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2012)12(a)-0061-03
珍杞降糖胶囊为医院制剂,经过多年临床经验证明,其质量稳定,疗效可靠;由黄芪、玉竹、女贞子、金银花、珍珠母、赤芍、生地、郁金等9味中药材加工制成,具有益气养阴、生津止渴、凉血润燥之功效,主治阳虚燥热型消渴病。绿原酸为金银花的主要有效成分,绿原酸具有抗菌、消炎、止血的功效,对珍杞降糖胶囊疗效的发挥起重要作用。现行质量标准中只有定性检查项目,而没有定量检测指标,本文采用HPLC测定了金银花中绿原酸的含量,方法简便、快捷、准确,回收率高,可较好地控制该制剂的质量。现报道如下:
1仪器与试药
1.1仪器
Agilengt1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),AUW-220D电子分析天平(日本岛津公司),DSQ10260超声仪(上海特惠电子仪器有限公司)。
1.2试药
绿原酸对照品(来源:中国药品生物制品检定所;批号:110753-200212);水为杭州娃哈哈饮用纯净水,乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯。珍杞降糖胶囊(生产单位:市中医院;批号:110328、110507、110713)。
2方法与结果
2.1色谱条件及系统适应性试验
色谱柱:AgilengtEclipsePlus-C18色谱柱(4.6mm×100mm);0.4%磷酸-乙腈(83︰17)为流动相;检测波长为327nm;柱温:30℃;流速为0.6mL/min;进样量为10μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000[1]。
2.2对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品约10mg,置50mL容量瓶中,加50%甲醇30mL,超声5min使溶解,并定量稀释制成每1毫升中含绿原酸0.2mg的溶液,作为对照品储备液(10℃以下保存)。精密量取上述储备液5mL置25mL棕色容量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
精密称取本品内容物约6.0g,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,、称定重量,超声处理(功率250W,频率35kHz)30min,放冷,称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5mL,置25mL棕色容量瓶中加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
2.4阴性样品溶液的制备
精密称取不含金银花的其他各味中药材约6.0g,研碎,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率35kHz)30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL,置50mL棕色容量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得阴性对照溶液。
2.5标准曲线的制备
取绿原酸对照品溶液(浓度为40μg/mL),按“2.1”项下色谱条件分别精密进样1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00μL,记录绿原酸色谱峰的面积值,以色谱峰峰面积为Y,以对照品进样量为X,计算回归方程:Y=5442.12716X-33.94086,r=0.9999。结果显示,在0.0433~0.6938μg范围内绿原酸进样量与峰面积值呈良好的线性关系。
2.6阴性干扰试验
按“2.1”项下色谱条件分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,结果绿原酸在4.054nm波长处有最大吸收,理论板数在4000以上,绿原酸峰与其他组分峰基线分离(R>1.5),阴性样品溶液在绿原酸峰相应位置上对测定无干扰,见图1。
2.7稳定性试验
按“2.1”项下色谱条件下,取绿原酸对照品溶液(浓度为40μg/mL),每隔1小时进样1次,考察6次,每次10μL,记录绿原酸峰面积,绿原酸峰面积分别为927.03147、925.09186、923.42196、916.20473、909.15197、910.77866,RSD=0.83%,实验证明,对照品溶液稳定性良好,能够满足测试要求。
2.8加样回收率试验
精密称取已知含量的供试品(批号110328,含绿原酸0.5353mg/g)6份,每份约2.0g,分别置1~6号锥形瓶中,分别精密加入精密配制的绿原酸对照品储备液(浓度为0.2mg/mL)5mL,精密加入50%甲醇50mL,照供试品溶液制备方法制备样品溶液,按“2.1”项下色谱条件,进样量10μL,分别测定,结果见表1。
2.9精密度试验
按“2.1”项下色谱条件下,取绿原酸对照品溶液(浓度为40μg/mL),每隔1小时进样1次,考察6次,每次10μL,记录绿原酸峰面积,结果6个峰面积分别为920.46643、924.25976、926.05989、919.98966、916.45137、915.25475;RSD=0.46%(n=6),实验证明,对照品溶液稳定性良好,能够满足测试要求。
2.10含量测定
取3批样品(批号分别为110328、110507、110713),置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,照供试品溶液制备方法制备样品溶液,按“2.1”项下色谱条件下,进样量10μL,分别测定,按外标法计算绿原酸的含量,结果测得三批样品中绿原酸的含量分别为0.5329、0.5336、0.5335mg/粒。
3讨论
医疗机构制剂是指医疗机构根据本单位临床需要而常规配制、自用的固定处方制剂。是对现代制药工业制剂不足的有效补充,是医院临床用药的组成部分,尤其是一些传统的中药古方、秘方、验方,更是民族的瑰宝;其质优价廉深受欢迎,然而其质量标准与国家药品标准相差甚远,为了保证临床用药的需要、保障患者用药安全有效,提高医院制剂质量标准、保证患者用药安全是一项紧迫任务。珍杞降糖胶囊由9味药材加工制成,处方工艺复杂,为了较好地控制该制剂的质量,经参考有关文献[2-4]及《中华人民共和国药典》(简称《药典》)2010年版一部方法,本文运用高效液相色谱法,考察了3批样品,实验证明本法操作简便、专属性强、回收率好,可用于该制剂的含量测定。
3.1流动相选择
本试验曾用乙腈-0.4%磷酸溶液(10∶90)[5],乙腈-0.4%磷酸(8∶92)[6],甲醇-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至3.2)(25∶75)[7]等几种流动相作比较,结果显示主成分峰出峰效果均不理想,而采用乙腈-0.4%磷酸(17∶83)为流动相,色谱峰显示,绿原酸与相邻的组分分离度大于1.5,具有较好的分离效果,且理论板数较高。
3.2提取方法的选择
由于绿原酸极不稳定且极性较大,笔者参考《药典》并结合指标成份的理化性质,比较了加热回流提取和超声提取两种方法,发现超声提取较为完全且不影响指标成份的分解,利于控制该制剂的质量。
3.3提取溶剂的选择
笔者发现以50%甲醇为溶剂测定含量,比用甲醇为溶剂所得的含量高,稳定性好。
[参考文献]
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(收稿日期:2012-08-20 本文编辑:袁 成)