HPLC法测定心叶紫金牛中岩白菜素的含量

刘 元宋志钊

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

HPLC法测定心叶紫金牛中岩白菜素的含量

刘 元1，2宋志钊1，2

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

目的：建立心叶紫金牛中岩白菜素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以AQ－C18色谱柱为分离柱，以甲醇－水（22：78）为流动相，285nm为检测波长，柱温为室温。结果：岩白菜素在0.05～0.80μg范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系（r＝0.9996），平均回收率为102.7%，RSD为2.37%（n＝6）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为该药材含量测定方法。

心叶紫金牛；岩白菜素；HPLC

心叶紫金牛，又名走马风、红铺地毯，为紫金牛科紫金牛属植物心叶紫金牛（Ardisia maclurei Merr.）的全株，是瑶药 “七十二风”中的走马风［1］，具有镇咳祛痰，活血调经，消肿止痛之功效，用于治疗肺结核，慢性支气管炎，咳嗽气喘，月经不调，痛经，产后恶露不尽，产后体弱，风湿疼痛，跌打损伤等。目前心叶紫金牛尚未有法定标准，对其有效成分及药理学研究更是尚未涉及，本研究采用高效液相色谱法测定心叶紫金牛中岩白菜素的含量，为心叶紫金牛的质量控制提供了检测依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC－20ATVP高效液相色谱仪，SPD－20AVP紫外检测仪；威玛龙色谱工作站；AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）；KQ－100VDB双频数控超声清洗仪。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。岩白菜素对照品（中国药品生物制品检定所，批号1532－200202）。心叶紫金牛药材6批：20110428（靖西）、20110527（平南）、20110612（上林）、20110819（金秀）、20110923（昭平），由本院严克俭同志采集；20110721，购自金秀县药材市场。以上样品均由本院中药所鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：AQ－C18色谱柱（4.6mm× 250mm，5mm）；检测波长为285nm；流动相：甲醇－水（22：78）；流速：1.0mL/min；柱温为室温。理论塔板数按岩白菜素峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品10.0mg，置50mL量瓶中用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成200μg/mL对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，即得（20.0μg/mL）。

2.3 供试品溶液的制备 取本品药材粉末（过40目筛）0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25mL，称定重量，超声提取30min（90W，45KHz），放冷，再称定重量，用流动相补足缺失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 精密称取岩白菜素对照品10.0mg，置50mL量瓶中用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成200μg/mL对照品溶液，备用。分别精密吸取200μg/mL岩白菜素对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，分别置10m l量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样10μL，测定。以岩白菜素对照品进样量μg为横坐标 （X），峰面积积分值为纵坐标 （Y）绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝990672X＋6554，r＝0.9996。结果表明：岩白菜素进样量在0.05～0.80μg之间与峰面积积分值线性关系。

2.5 精密度试验 分别吸取同一供试品溶液，进样6次，依次测定，即得。测得供试品RSD为1.15%。

2.6 重复性试验 取同一批号（20110721）样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定，即得。结果测得岩白菜素含量为1.96mg/g，RSD＝1.60%（n＝6）。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、4、8、12、16h进行测定。结果供试品中岩白菜素含量的RSD为1.70%，表明供试品溶液在16h内保持稳定。

2.8 加样回收试验 取已测知含量（1.96mg/g，批号20110721）的供试品0.25g，精密称定，精密加入岩白菜素对照品溶液（200μg/m L）2.5m L，精密加入流动相22.5m L，按供试液制备项下的方法制备。结果岩白菜素平均回收率为99.0%，RSD为2.37%（n＝6），结果见表1。

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法，测定6批心叶紫金牛药材中岩白菜素含量，结果见表2。岩白菜素含量（mg/g）在0.88～2.31之间。

表1 加样回收试验测量结果（n＝6）

表2 6批心叶紫金牛药材中岩白菜素测量结果

3 讨论

3.1 心叶紫金牛的化学成分未见报导，但同科同属植物翼茎白粉藤中含有岩白菜素［2］，对心叶紫金牛中岩白菜素的含量测定方法进行初步研究，经过预实验，多批心叶紫金牛药材中均含有岩白菜素。因此探索心叶紫金牛中指标成分岩白菜素的含量测定方法，可作为控制本品质量标准的指标之一。

3.2 对岩白菜素对照品溶液进行紫外扫描，结果其在285nm处有最大吸收，故确定检测波长为285nm。参照《中国药典》2010年版一部里有关岩白菜素含量测定方法，以甲醇－水为流动相，考察多个比例，最后确定甲醇－水（22：78）的比例较为适合。

3.3 采用超声处理30min，加热回流1h，索氏提取2h进行提取方法考察，三者结果相差不大，但超声提取更简便、快捷，故采用超声提取法。采用甲醇、水、流动相作提取溶剂进行考察，用水提取所得含量最低，甲醇、流动相提取所得含量较高，但是甲醇提取样品中岩白菜素峰形差，故采用流动相作为提取溶剂。以超声提取15、30、45min进行提取时间考察，超声提取15min，测得结果较低，超声提取30～45min，两者无明显差别，故超声提取时间定为30min。

［1］戴斌，李钊东，丘翠嫦，等. “虎牛钻风”类传统瑶药的调查研究［J］.中国民族民间医药杂志，1998，31（2）：28－34.

［2］叶君勇，徐燕云，吴晓梅.紫金牛属植物岩白菜素研究现状及开发利用［J］.安徽农学通报，2009，15（21）：160－162.

Determination of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC

LIU Yuan1，2，SONG Zhi－zhao1，2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi530022；2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinesemedicine quality standards，Nanning，Guangxi530022

Objective：To assay the content of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC.Method：The AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）column was used，the mobile phase consisted of Methanol－water（22：78），the detection wave length was 285nm and the column temperature was room temperature.Resuilts：Linearity of Quercitr was good at0.05～0.80μg（r＝0.9996）.The average recovery of buddleodide was99.0%with RSD less than 2.37%（n＝6）.Conclution：The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Bergenin in Ardisia Maclurei.

Ardisia Maclurei；Bergenin；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）14－0022－02

2013.05.08）

广西科技攻关项目（桂科攻11107010－3－4）。

刘元，女，高级实验师，从事中药药理学研究与新药开发。E－mail：liuyuan0821＠vip.163.com