RP－HPLC法同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷的含量

黄 婧马健雄

1.广西壮族自治区桂林市第二人民医院药剂科，广西 桂林 541001；2.广西金海堂药业有限责任公司新药研发中心，广西 南宁 530313

RP－HPLC法同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷的含量

黄 婧1马健雄2*

1.广西壮族自治区桂林市第二人民医院药剂科，广西 桂林 541001；2.广西金海堂药业有限责任公司新药研发中心，广西 南宁 530313

目的：建立同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷含量的方法，为该制剂质量标准的修订提供依据。方法：采用RPHPLC法，色谱柱为Diamonsil－ODSC18（250mm×4.6mm，5μ）；流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液；流速为0.8ml/min；检测波长为327nm（0～25min）和280nm（25～50min），柱温：25℃。结果：绿原酸在0.516～4.128μg范围内、牛蒡苷在1.980～15.840μg范围内线性良好；绿原酸平均加样回收率为99.02%，RSD为0.83%，牛蒡苷平均加样回收率为99.56%，RSD为0.69%；结论：本方法精密度高，分离度好，可用于同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷的含量。

维C银翘片；绿原酸；牛蒡苷；RP－HPLC

维C银翘片是由金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗等14种原料制成的中西药复方制剂，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于治疗风热感冒、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。方中金银花和牛蒡子清热解表是本方的重要组成部分，其绿原酸和牛蒡苷为该制剂药典［1］含测指标成分，但药典方法分步测定，较为繁琐且实验成本高，目前尚未有同时测定该制剂中绿原酸和牛蒡苷含量的文献报道。本文拟用RP－HPLC法对该制剂中绿原酸和牛蒡苷的含量进行同时测定，为保证药品质量，提高、修订药品标准提供参考依据。

1 实验材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（SHIMADZU，SPD－10A VP Plus）；电子天平（SHIMADZU，AUW120D型）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，KQ2200型）

1.2 试剂 乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；绿原酸对照品（批号：110753－200413，中国药品生物制品检定所）；牛蒡苷对照品（批号：110819－200505，中国药品生物制品检定所）

1.3 试药 维C银翘片各批次样品（广西金海堂药业有限责任公司生产）

2 方法与结果

2.1 色谱条件与溶液的制备

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil－ODS C18（250mm ×4.6mm，5μ）；流动相为乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B）按表1进行梯度洗脱；流速为0.8m l/min；检测波长为327nm（0～25min）用于检测绿原酸；280nm（25～50min）用于检测牛蒡苷；柱温：25℃。

表1 梯度洗脱条件

2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取绿原酸、牛蒡苷对照品适量，置25m l容量瓶中，加甲醇溶解，制成每毫升含绿原酸0.516mg，牛蒡苷1.98mg的对照品混合溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理 （功率250W，频率40kHz）20分钟，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜 （0.45μm）滤过，即得。

2.1.4 阴性对照溶液的制备 取维C银翘片处方中各味药材 （除去金银花和牛蒡子），按药典［1］方法制备空白样品，再按“2.1.3”项方法制备阴性样品溶液。

2.2 波长的选择及色谱行为 分别取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液按 “2.1.1”项条件进样，两种成分有较好的分离度 （图1、图2）。但两种成分最大吸收波长相差甚远，在327nm处绿原酸有最大吸收，牛蒡苷无吸收，而在280nm处牛蒡苷有最大吸收，故选择绿原酸检测波长为327nm，牛蒡苷检测波长为280nm。

2.3 线性关系考察 分别精密称取“2.1.2”项下对照品溶液1.0m l、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，置10m l容量瓶中，加甲醇稀释定容。分别进样 （各进3针，每针10μl），以平均峰面积积分值为纵坐标 （y），以进样量（μg）为横坐标 （x），绘制标准曲线。绿原酸标准曲线：y＝2789.19x－10.0923，r＝0.9999；牛蒡苷标准曲线：y＝503.06x＋5.3217，r＝0.9998。线性范围：绿原酸为0.516～4.128μg；牛蒡苷为1.980～15.840μg。

2.4 精密度试验 精密吸取上述“2.1.2”项下对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，重复测定5次，每次进样量为10μl，记录绿原酸、牛蒡苷的峰面积，RSD（绿原酸）＝1.27%，RSD（牛蒡苷）＝0.77%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 取同批号（20120901）样品6份，按“2.1.3”项方法制备供试品，按“2.1.1”项下色谱条件测定，重复测定6次，每次进样量为10μl，外标两点法计算含量，RSD（绿原酸）＝0.95%，RSD（牛蒡苷）＝1.15%，说明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一样品（20120901）溶液，分别于0、2、4、6、8、10h各进样10μl，记录峰面积，RSD（绿原酸）＝1.56%，RSD（牛蒡苷）＝1.05%，表明该样品溶液在10h内稳定。

2.7 加样回收率试验 取同一批号已知含量的样品细粉（批号：20120901，绿原酸的含量2.45 mg/片，牛蒡苷含量3.62mg/片）6份，每份约0.1g，精密称定。分别加入绿原酸和牛蒡苷对照品适量，按照供试品溶液制备方法，制备供试品溶液并测定绿原酸和牛蒡苷的含量。绿原酸平均回收率为99.02%，牛蒡苷平均回收率为99.56%，RSD（绿原酸）＝0.83%，RSD（牛蒡苷）＝0.69%，表明该法回收率良好。

2.8 样品测定 取维C银翘片各批次样品，按“2.1.1”项下色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 维C银翘片含量测定结果

3 讨论

维C银翘片药味较多，制定科学合理且具实用性的质量控制方法较为困难。现有标准［1］操作繁琐，实验成本较高，故还存在较大的提升空间。用现代科学仪器同时测定各指标成分的含量可节约时间和检测成本，缩短企业生产周期，提高生产效率，有较大的推广空间。本研究将为维C银翘片质量标准的进一步完善提供科学依据。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010版一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：1139.

Simultaneous Determination of Chlorogenic acid and Arctiin in VitaminC Yinqiao Tablet by RP－HPLC

HUANG Jing1，MA Jian－xiong2
1.The Second People＇s Hospital of Guilin，Guilin，541001；2.New Drug R＆d Center of Guangxi Jinhaitang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanning，530313

Objective：To establish the method for determining the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet；Methods：Diamonsil－ODSC18（5μ250×4.6mm）columu was adopted，the mobile phase consisted of acetonitrile－0.1%phosphoric acid solution eluted at the flow rate of0.8ml/min，the detection wave length were 327nm（0～25min）and 280nm（25～50min）；the column temperature was 25℃；Results：The chlorogenic acid in 0.516～4.128μg and arctiin in 1.980～15.840μg had good linearity.The average recoveries of chlorogenic acid and arctiin were 99.02%（RSD 0.83%）and 99.56%（RSD 0.69%），respectively；Conclusion：This method can be use to determine the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet.

VitaminC Yinqiao tablet；chlorogenic acid；arctiin；RP－HPLC

R286.0

A

1007－8517（2013）14－0017－02

2013.05.21）

黄婧 （1977－），女，主管药师，从事药品质量研究。

马健雄，E－mail：majianxiong66＠163.com