HPLC 法测定黄菊消银丸中绿原酸的含量

朱德杰

（河南省周口市食品药品检验所，周口466000）

HPLC 法测定黄菊消银丸中绿原酸的含量

朱德杰

（河南省周口市食品药品检验所，周口466000）

目的建立黄菊消银丸中绿原酸的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱条件为：色谱柱：Eclipse XDB-C18；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速：1.0ml～min-1；检测波长：327nm。结果绿原酸在0.2556～0.7668mg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.87%，RSD=1.16%（n=6）。结论本方法操作简便，专属性强，结果准确，可用于黄菊消银丸的质量控制。

绿原酸；高效液相色谱法；黄菊消银丸

黄菊消银丸（豫药制字Z05140114），是由金银花、黄连、野菊花、蒲公英、紫花地丁、连翘、土茯苓、生石膏、茵陈、生地黄、玄参、三棱等药材加工制成的复方制剂，具有清热利胆，凉血解毒之功效，用于治疗肝胆湿热及血瘀等引起的皮肤瘙痒、起屑等。没有定量指标，本文以方中君药金银花的有效成分绿原酸为指标，建立了黄菊消银丸中绿原酸的高效液相测定方法，操作简便，省时，准确，可作为黄菊消银丸的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，AUW-220D电子分析天平，5210DT超声处理器；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-200413）；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。黄菊消银丸（柘城县中医院）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5um）。流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；流速1.0ml～min-1；检测波长327nm；进样量10μl。

2.2 线性关系考察取绿原酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。按照“2.1”项色谱条件，分别进样6、8、10、12、14、16、18μl，记录绿原酸峰面积值，以峰面积积分值（Y）对对照品进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=221.29X+450.26 r=0.9999。结果表明，绿原酸对照品进样量在0.2556～ 0.7668mg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3 对照品溶液的制备取绿原酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液及阴性对照溶液的制备取本品约6.0g，研细，精密称定，置50ml量瓶中，加入50%甲醇适量，超声处理30分钟（功率250W，频率35KHZ），放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取缺金银花的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。

2.5 干扰试验取上述3种溶液，按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，进样测定，记录色谱图，结果表明供试品溶液在与对照品溶液色谱相应的位置上，有相应的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.6 精密度试验取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10μl，记录峰面积，RSD=0.96%（n=5），表明精密度良好。

2.7 稳定性试验取同一对照品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h进样测定，RSD=1.12%，供试品溶液在10小时内峰面积基本稳定。

2.8 加样回收率试验称取6份已测得绿原酸含量的供试品（含量为0.8475mg／g），每份约3.0g，精密称定，置50ml量瓶中，另分别精密加入对照品溶液（浓度为0.5005mg／ml）5.00ml，制备成供试品溶液，分别测定绿原酸的含量，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.8 样品测定取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试液，各进样10μl，按外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。

表2 3批样品中绿原酸的含量

3 讨论

绿原酸是金银花的有效成分，故采用高效液相色谱法对绿原酸进行含量测定，绿原酸的紫外吸收图谱显示，其在327nm波长处有最大吸收，故选择327nm为测定波长。

本文参考有关文献［1-2］，供试品的制备分别采用回流0.5h、1h、2h提取，超声10min、30min、1h提取，试验结果表明超声处理30min提取较为完全，且操作简便快捷，故采用超声提取30min。

［1］袁欣．HPLC法测定不同厂家银黄胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量［J］．中国药师，2007，10（07）：679-680．

［2］余卫兵，毕雪艳，张钢平，等．HPLC法测定臁疮丸中绿原酸的含量［J］．中国药师，2007，10（12）：1270-1271．

Determination of Chlorogenic Acid in Huangjuxiaoyin Pill by HPLC

Zhu Dejie（Zhoukou Institute for Food and D rug Control，Zhoukou 466000，China）

ObjectiveTo set up amethod to determination of chlorogenic acid in huangjuxiaoyin pill．MethodsThe content of chlorogenic acid determined by HPLC．The chromatographic system consisted of C18column，using acetonitrile-0.4%phosphate solution（17∶83）asmobile phase.The content was detected at a waveleng of 327 nm，the flow rate was 1.0ml～min-1.ResultsThe chlorogenic acid have agood tincar rolatim in the range of 0.2556～0.7668mg（r=0.9999），the average recovery was 98.87%and RSD=1.16%（n=6）.ConclusionThe establishedmethod is simple，sensitive and accuracy．It can be used for quality control of huangjuxiaoyin pill．

Chlorogenic acid；HPLC；Huangjuxiaoyin Pill

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.099

1672-2779（2013）-11-0151-02

��张文娟

2013-05-06）