柴辛鼻敏康胶囊的抗炎免疫作用

柴江平刘治中刘仁平葛海生王晓飞

（1中国中医科学院广安门医院，北京100053；2中国中医科学院中医基础理论研究所，北京100700；3中国医学科学院药物研究所／北京协和医院，北京100050；4中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京102613）

柴辛鼻敏康胶囊的抗炎免疫作用

柴江平1刘治中2刘仁平3葛海生4王晓飞4

（1中国中医科学院广安门医院，北京100053；2中国中医科学院中医基础理论研究所，北京100700；3中国医学科学院药物研究所／北京协和医院，北京100050；4中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京102613）

目的观察柴辛鼻敏康对变应性鼻炎治疗的抗炎免疫调节作用。方法采用小鼠巴豆油致耳肿胀实验观察抗急性炎症，利用腹腔肥大细胞观察药物对肥大细胞脱颗粒的抑制作用，利用DNFB致敏的小鼠观察药物抗迟发型变态反应作用，灌服饱和浓度的药物观察药物的安全性。结果柴辛鼻敏康对小鼠耳巴豆油致肿胀抑制活性为16.4%，对肥大细胞脱颗粒的抑制率为43.1%，显著降低DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应所致的耳肿胀，且在饱和浓度11.1g／kg下未见明显毒副作用。结论柴辛鼻敏康胶囊对过敏性因素引起的速发型和迟发型过敏反应均有很好的抑制作用，免疫调节活性突出。

变应性鼻炎，柴辛鼻敏康胶囊，抗炎，免疫调节

过敏性鼻炎（Allergicrhinetis，AR），是一种吸入外界变应原而导致鼻黏膜发生以超敏反应为主的非感染炎症性疾病。流行病学调查显示：该病世界范围内的平均发病率在10%～20%之间，且能够间接增加支气管哮喘、鼻窦炎、中耳炎、变应性皮炎等发病机会［1］。目前，国内外对本病尚无特效治疗药物，主要采用抗组胺药、减充血药、抗胆碱药、MC稳定剂和糖皮质激素等5类药物单独或联合交替使用。这些药物虽可在短时间内缓解症状，但不能从根本上改善患者的过敏体质及中和变应原，致使病情“反跳”，反复发作长期迁延不愈。鼻痒、喷嚏、流清涕、鼻塞是AR的主要临床症状，属中医鼻鼽、鼽喷、鼽嚏、鼽水、鼽、嚏等范畴［2］，临床中医治疗多以疏风解表通窍的方药为主，但治疗效果并不十分满意。柴辛鼻敏康胶囊是由柴胡、细辛、川芎等多味中药加工而成的中药胶囊制剂，临床用于过敏性鼻炎，疗效显著［3］。

1 资料与方法

1.1 动物实验采用KM雄性小鼠（17～20g）60只，SPF级，购自军事医学科学院实验动物中心，合格证：SCXK-（军）2007-004）；ICR雄性小鼠（17～19g）50只，SPF级，购自维通利华实验动物中心，合格证：SCXK-（京）2006-0009；SD大鼠（220g～250g）5只，SPF级，购自军事医学科学院实验动物中心，合格证：SCXK-（军）2007-004）。

1.2 药物及试剂柴辛鼻敏康（BMK）为自制药品，使用时将柴辛鼻敏康逐步加入0.25%CMC（羧甲基纤维素钠）溶液配成所需浓度。千柏鼻炎片为广州奇星药业产品，地塞米松由四川迪康科技药业股份有限公司生产。

1.3 方法

1.3.1 柴辛鼻敏康抗巴豆油致耳肿胀实验选用KM雄性小鼠（17～19g），随机分为对照组、BMK组2组、千柏鼻炎片组2组和地塞米松（DEX）组，每组10只，口服灌胃给药，BMK组剂量为7.5g／kg、10g／kg，阳性对照药千柏鼻炎片组选用5g／kg、10g／kg两个剂量，DEX组剂量为0.5mg／kg，对照组仅灌以蒸馏水，连续给药5天。末次给药1小时后，小鼠右耳两面涂抹2%巴豆油50μl，4小时后处死动物。剪下左右耳廓，用直径8mm的打孔器取下耳片，称重，以左右耳片重量之差值指示

耳肿胀程度。以对照组均数作为标准，按公式：（对照组肿胀程度-药物治疗耳肿胀程度）／对照组肿胀程度，计算各药物组对小鼠耳肿胀的抑制率（百分比计）。

1.3.2 柴辛鼻敏康抑制肥大细胞脱颗粒实验取体重220～250g的雄性大鼠，断头处死后，以冷PBS液冲洗腹腔，离心1500转10分钟，收集悬液离心后，以冷PBS液重悬，进行细胞计数，并配成2×107cell／ml的悬液。在小管中分别加入肥大细胞悬液45μl，同时加入待测药物或空白溶剂5μl，（BMK设1mg／ml，0.75mg／ml，0.5mg／ml高、中、低3个剂量，千柏鼻炎片终浓度为1mg／ml、0.75mg／ml作为阳性药），加入化合物48／80 2μl，37℃震荡温育3min，取出冰上放置。滴于载有0.25%中性红乙醇溶液的载玻片上，显微镜下观察计数100个肥大细胞中脱颗粒的细胞数，每管计数2次，取均值。按下列公式计算出脱颗粒肥大细胞百分率及药物抑制率。正常的肥大细胞边缘光滑，核不着色，胞内浅棕色颗粒均匀。脱颗粒的肥大细胞显示肿胀和形态异常，胞膜破裂，颗粒外排。

脱颗粒肥大细胞（%）=脱颗粒肥大细胞／肥大细胞总数×100%

药物抑制率（%）=（对照组脱颗粒率-药物组脱颗粒率）／对照组脱颗粒率×100%

1.3.3 柴辛鼻敏康抗迟发型变态反应实验选用ICR雄性小鼠（17～19g），小鼠随机分为对照组、致敏组、BMK组、千柏鼻炎片组和地塞米松（DEX）组，每组10只，小鼠腹部去毛，面积约3×3cm2大小，均匀涂抹1%DNFB溶液50μl致敏，次日强化一次。小鼠自致敏当同起每日口服灌胃给药一次，BMK剂量为10g／kg，阳性药选用千柏鼻炎片剂量为10g／kg，地塞米松组剂量为0.5mg／kg，对照组仅灌以蒸馏水，连续给药6天。于致敏第5天后，各组小鼠左耳（两面）均匀涂抹1% 2，4二硝基氟苯（DNFB）溶液10μ1进行攻击。24小时后处死动物，剪下双耳，用直径为8mm的不锈钢铳子取下左右耳片，分别称重，以左右耳片重量之差作为肿胀程度。同时取小鼠胸腺及脾脏称重，分别以小鼠每10g体重的脾重（mg）和胸腺重（mg）作为脾脏指数和胸腺指数［4］。

1.3.4 柴辛鼻敏康的最大耐受剂量观察柴辛鼻敏康1g，逐步加入0.25%CMC（羧甲基纤维素钠）溶液2、1、0.5、0.5、0.5ml配成最大体积CMC的饱和溶液，最终浓度为0.22g／ml。选用KM雄性小鼠（20±0.1）g，随机分组，每组10只，于检疫驯化期结束日测定体重，口服给药1次，药物浓度为0.22g／ml，给药1ml，连续观察2周内小鼠的自主活动次数。给药当天，在给药后的30分钟、60分钟、90分钟、2小时进行观察，如无明显异常症状，当天即停止观察；如发现有明显异常，应继续观察，并在异常症状消失后再继续观察30分钟，但不超过6个小时。并且在给药后第1～14天的每天同一时刻进行1次观察。主要进行临床症状观察和存活率计算。动物死亡后做尸检，观察各脏器变化。

2 结果

2.1 柴辛鼻敏康对巴豆油致耳肿胀的影响以7.5g／kg剂量，连续灌服5次给药，鼻敏康对小鼠耳巴豆油致肿胀抑制活性为16.4%（与对照组比较P=0.086），虽未达到显著差异的程度也不及地塞米松的抑制活性，但优于阳性药千柏鼻炎片的抑制活性。

表1 柴辛鼻敏康对巴豆油致耳肿胀的影响（n，%）

2.2 柴辛鼻敏康对腹腔肥大细胞脱颗粒抑制作用在体外1mg／ml柴辛鼻敏康的脱颗粒肥大细胞百分率明显减少，药物抑制率为43.1%，明显高于0.5mg／kg和0.75mg／kg，且也明显优于千柏鼻炎片，具有比较明显的脱颗粒抑制活性。

表2 柴辛鼻敏康对腹腔肥大细胞脱颗粒抑制率（n，%）

2.3 柴辛鼻敏康抗迟发型变态反应实验连续口服10g／kg柴辛鼻敏康6次，对小鼠DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应引起的肿胀程度显著降低（与致敏组比较P＜0.01），抑制活性为55.8%，且优于千柏鼻炎片和地塞米松，但柴辛鼻敏康对DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应的胸腺指数、脾脏指数的无显著影响。

表3 柴辛鼻敏康对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应的影响（n，%）

2.4 柴辛鼻敏康的最大耐受剂量柴辛鼻敏康在药物最大剂量为11.1g／kg的浓度下各组给药小鼠未见明显毒副作用。动物处死后，肉眼观察各脏器无明显异常。

3 讨论

肥大细胞脱颗粒是机体的一种防御反应，也是速发型变态反应（Ⅰ型超敏反应）和炎症等病理反应的基础。

肥大细胞受到抗原攻击、脱颗粒，通过释放组胺、白三烯、缓激肽、嗜酸性细胞趋化因子等炎性介质，导致血管通透性增强、炎性细胞浸润，引起鼻黏膜充血、炎性细胞浸润、呼吸道平滑肌收缩等过敏性免疫病理反应。肥大细胞脱颗粒产生的多种炎性介质和膜磷脂代谢过程中产生的代谢产物是过敏性鼻炎病理生理反应过程和鼻黏膜病理改变的中心环节，因此细胞脱颗粒的百分率反映了肥大细胞过敏反应的程度［5］。柴辛鼻敏康胶囊可明显抑制腹腔肥大细胞的脱颗粒反应，控制炎症的发展。小鼠巴豆油耳炎是经典的急性炎症模型，致炎小鼠耳部充血、血管通透性增加、渗出增多、前列腺素分泌增加，现已被广泛地应用于抗炎药物筛选。柴辛鼻敏康可明显抑制巴豆结合其对巴豆油所致的耳肿胀，说明该药对急性过敏性炎症有很好的抑制作用。

迟发型变态反应的组织损伤机制是由特异性致敏T细胞所介导，后者与特异性抗原结合而被激活，分裂并释放出多种淋巴因子，导致反应局部组织发生以单个核细胞浸润为主的炎症反应和组织坏死。DNFB所致迟发型变态反应是反映药物对T细胞免疫功能影响的标志之一，通过小鼠致敏反应的产生，以耳肿胀程度、脾指数、胸腺指数来反映对细胞免疫功能的影响［4］。柴辛鼻敏康胶囊对DNFB所致的小鼠DTH反应的耳肿胀抑制作用突出，使耳肿胀显著减轻，表明其具有明显抗迟发型过敏反应的作用。

以上表明，柴辛鼻敏康胶囊对过敏性因素引起的速发型和迟发型过敏反应均有很好的抑制作用，免疫调节活性突出，对于过敏性鼻炎的治疗具有一定的开发及研究意义，其作用机理值得进一步深入研究。

［1］周羽，崔英，彭顺林.变应性鼻炎的中西医结合治疗进展［J］．北方药学，2011，8（2）：59-61．

［2］杨清华，黄建军．鼻鼽的古代文献研究［J］．中医药信息，2005，22（1）：4．

［3］柴江平，王晓飞，葛海生，等．柴辛鼻敏康胶囊质量标准的研究［J］．中国中医基础医学杂志，2011，17（6）：676-677．

［4］李仪奎．中药药理实验方法上海［M］．上海：上海科学技术出版社，1994：300-304．

［5］陈吉力，赖新生，唐纯志，等．穴位敷贴对过敏性鼻炎小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒影响的实验研究［J］．针灸杂志，2007，26（12）：42-45．

Anti-inflammatory and Immune Actions of Chaixinbiminkang Capsule

Chai Jiangping Liu Zhizhong Liu Renping GE Haisheng Wang Xiaofei

（1.Institute for D rug Control of People's Armed Police Forces，Beijing 102613，China；2.Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College，Beijing，100050，China；3.Guang'anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

ObjectiveTo observe the anti-inflmmatory and immune effects of Chaixinbiminkang capsule．MethodsSwelling earflaps ofmice induced by croton oil was used to identify anti-inflammatory effect，themast cell degranulation and delayed type hypersensitivity induced by DNFB-inmice were used to observe immune regulation，fed saturated concentration of Chaixinbiminkang capsule observe the safety of the drug．ResultsChaixinbiminkang capsule had 16.4%inhibitory activity on swelling earflaps ofmice induced by croton oil，inhibition rate ofmast cell degranulation was 43.1%，significantly reduce the ear swelling by DNFB-induced delayed type hypersensitivity inmice，and no side effects was observed in the saturated concentration of 11.1g／kg.Conclusion Chaixinbiminkang capsule has significant inhibitory activity on immediate and delayed-type hypersensitivity caused by allergic factors，and prominent immunomodulatory activity．

Allergicrhinetis；Chaixinbiminkang capsule；Anti-inflammatory；Immune regulation

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.096

1672-2779（2013）-11-0145-03

��张文娟

2013-05-27）