钩藤散对痴呆大鼠组织内乙酰胆碱酯酶含量及学习能力的影响

吴成举 陈 靖 杨 光

辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032

钩藤散对痴呆大鼠组织内乙酰胆碱酯酶含量及学习能力的影响

吴成举 陈 靖 杨 光

辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032

目的：研究钩藤散治疗血管性痴呆的作用机制。方法：采用大鼠双侧颈总动脉结扎（2－VO法）制作VaD模型，将造模后的VD大鼠随机分为A组B组和C组并加以相应治疗，另设D组采用水迷宫检测大鼠学习记忆能力，同时检测血清和大脑海马组织含量。结果：C组、B组与A组给药后相比较存在明显差异（P＜0.05），差别有统计学意义；钩藤散组血清和海马含量较模型对照组降低（P＜0.05）。结论：钩藤散能改善血管性痴呆大鼠血和海马内含量，钩藤散可以治疗VD大鼠。

VD大鼠；钩藤散；乙酰胆碱酯酶

血管性痴呆（vascular dementia，VD）是老年痴呆的主要类型之一，钩藤散在老年痴呆的防治上，有一定疗效。钩藤散出自《本事方》，由钩藤、石膏、半夏、茯苓、人参、防风等11味药组成。该方原为治疗肝厥头晕之症，本研究通过钩藤散对血管性痴呆大鼠行为学及组织内乙酰胆碱酯酶含量的影响，为老年痴呆症的治疗提供理论依据和实践材料。

1 材料与方法

1.1 动物 健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，体质量250g±50g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：（辽）20114562。

1.2 药品试剂与仪器 钩藤散组成：用钩藤、茯苓、菊花各15g，半夏、麦冬、党参、防风、川芎各10g，陈皮12g，石膏20g，甘草5g，生姜3片。以上药物均购于辽宁中医药大学附属医院中药局，用水提法提得提取物，配成浓度为0.2g/m l；盐酸噻氯匹定片（抵克立得），由赛诺菲安万特（杭州）制药有限公司生产，用时配成浓度为0.2g/ml；大鼠乙酰胆碱酯酶（AChE）酶联免疫试剂盒，上海邦奕商贸有限公司；Morris（包括电脑自动摄象装备系统）水迷宫系统；DG5033A酶标仪。

1.3 动物模型制备 结扎大鼠双侧颈总动脉（2－VO法）制作 VaD模型。方法如下：腹腔麻醉用戊巴比妥钠（40mg/kg），仰卧位，将大鼠固定于兔台上。颈部脱毛，消毒用碘伏，颈部中央切开2cm左右的切口，将双侧颈总动脉分离后，用手术线永久结扎。局部消毒后缝合。A组和B组C组行上述手术处理。假手术组血管不结扎。

1.4 分组与给药 将造模后的大鼠随机分为模型对照组（A）、钩藤散组（B）和盐酸噻氯匹定片组（C），每组各12只。B组灌胃，每只2g/（kg·d）；C组灌胃，每只2mg/（kg·d）；A组给以纯净水2g/（kg·d）灌胃。假手术组（D）12只，给以纯净水2g/（kgd）灌胃。各组均连续灌胃30d。

1.5 检测指标

1.5.1 大鼠水迷宫实验 实验前训练大鼠学会水迷宫。在相同入水点将每只大鼠放进2次。将大鼠的逃避潜伏期、游泳轨迹、游泳总路程等记录下来。要求大鼠在120s内找到平台，在其上面保持40s以加强记忆。如果在120s找不到平台，也要把大鼠引导到平台上，同样保持40s，再进行下一次训练。造模前、后各记录1次，实验至第30天进行药后测试。

1.5.2 AChE检测 测试学习能力后，大鼠禁食过夜，次日尾静脉取血，分离血清；另取大脑海马组织，制成组织匀浆检测AChE。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件包作统计学处理，数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结果

2.1 AD模型大鼠水迷宫学习记忆能力的测定见表1。

表1 各组大鼠逃避潜伏期的比较（±s）

表1 各组大鼠逃避潜伏期的比较（±s）

注：与假手术组比较*P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05。

组别 n 手术前 给药前 给药后A组12 20.795±2.693 82.673±11.354*88.675±7.643 B组12 21.354±3.356 58.326±4.568*22.682±5.342△C组12 19.362±2.564 92.124±6.145*14.134±3.527△D组12 16.659±2.958 16.356±5.163 22.325±7.658

结果显示各组比较在手术前均无差异；A组、B组、C组各组给药前与手术前比较均有显著性差异（P＜0.05），说明造模成功；B组、C组与模型组给药后相比较存在明显差异（P＜0.05），提示噻氯匹定组、钩藤散组的大鼠逃避潜伏期明显缩短，说明两药均能改善AD模型大鼠的学习记忆功能；与假手术组相比较B组和C组没有差异，说明两者均有疗效。

2.2 钩藤散对血管性痴呆大鼠血清和海马AChE含量的影响见表2。

表2 治疗后各组大鼠血清和海马AChE含量对比（±s）

表2 治疗后各组大鼠血清和海马AChE含量对比（±s）

与模型组比较*P＜0.05；与假手术组比较，#P＜0.05

组别 n 血清AChE 海马AChE # A组 12 1.0149±0.1832# 0.8997±0.2103 B组 12 0.8302±0.1016* 0.5619±0.0267*C组 12 0.8198±0.1148* 0.6011±0.0521*D组12 0.5768±0.1265 0.5578±0.0769

3 讨论

血管性痴呆属中医的“痴呆”范畴，认为痴呆为一种全身性疾病，本病多由肾精不足、髓海亏损，痰浊瘀阻，瘀血阻脑，神机失用。病位在脑，与心、肝、脾、肾皆有关系，其中与肾、肝关系尤为密切。治疗时应标本兼顾，补其虚而泻其实。发生VD的重要原因是脑缺血，造成海马损伤引起学习记忆能力下降。而海马对缺血非常敏感，其CA1区在学习记忆中起重要作用［1］。

海马CA1区锥体细胞的迟发性死亡可能是缺血性脑血管病导致痴呆的主要原因［2］，即使短暂的脑缺血也可造成锥体细胞延迟性神经元死亡［3］。尤其脑海马组织是学习、记忆的高级神经活动中枢［4］，而脑内海马乙酰胆碱（acetyl－choline，Ach）的含量与记忆功能是密切相关的［5］。ChAT和AchE共同维持着Ach的动态平衡，也是维持哺乳动物正常进行学习记忆的必要条件。本研究结果表明，方中钩藤、菊花平肝清热；石膏辛寒清热；陈皮、半夏健脾燥湿化痰；人参、茯苓补气健脾。诸药合用，共奏平肝清热安神之功。钩藤散组水迷宫大鼠逃避潜伏期较模型对照组缩短，血清及海马中AChE活性较模型对照组降低，差别均有统计学意义（P＜0.05）。提示此方能改善VD大鼠的学习和记忆能力，且能改善胆碱能系统的功能，调节ACh生理代谢，从而达到改善任知功能，治疗VD的目的。

［1］杨春壮，马英，张春军，等.补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠学习能力及组织内乙酰胆碱酯酶含量的影响［J］.中医研究，2011，12（24）：10－12.［2］赵建新，田元祥，李国明，等.脑缺血再灌注拟血管性痴呆小鼠皮层及海马细胞病理形态学动态观察［J］.中风与神经疾病杂志，2000，17（4）：200－202.

［3］Abe K，AokiM，Kawagoe J，et al.Ischemic delayed neuro－nal death：A mitochondrial hypothesis［J］.Stroke，1995，26（8）：1478－1489.

［4］Melis F，Stancampiano R，Imperato，et al.Chronic ethanol consumptionin rats：correlation between memory performance and hippocampal ace－tylcholine release in vivo［J］.Neuroscience，1996，74（1）：155－159.

［5］Fang M，Li J，Tiu SC，et al.N－methy－D－aspartate receptor and apoptosis in Slzheimer＇s disease and multiinfarct dementia［J］.J Neuros－ci Res，2005，81（2）：269－274.

Hook rattan scattered within the organization for dementia rats acetylcholinesterase content and the influence of learning ability

WU Cheng－ju，CHEN Jing，YANG Guang
（Liaoning university of Chinese medicine，Shen Yang 110032）

objective：Research uncaria scattered treatment of vascular dementia mechanism of actionMethods：Using rat bilateral common carotid artery ligation（2－VO method）making VaD model，Making die after VD rats were randomly divided into group A and group B and C group to the corresponding treatment，establish A group D with water maze test rats learning and memory ability，At the same time measure serum and brain hippocampus tissue contentResults：C group，group B and A group after the treatment phase is obvious difference（P＜0.05）.The difference was statistically significance；Hook rattan scattered group serum and hippocampal content is reduced model control group（P＜0.05）Conclusion：uncaria scattered improve vascular dementia rats blood and hippocampus in content，Hook rattan powder can be treated VD rats.

VD rats；Hook rattan scattered；Acetyl cholinesterase

RR33

A

1007－8517（2013）03－0026－02

2013.01.08）