仔榄树的化学成分

谢 乔， 王文婧， 李国强， 王 英， 张晓琦， 叶文才

(暨南大学1.药学院中药及天然药物研究所;2.中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室，广东 广州 510632)

仔榄树为夹竹桃科(apocynaceae)仔榄树属植物，别名黄羊、黄平树、洪达木，分布于印度尼西亚、缅甸、越南、印度、斯里兰卡、马来西亚以及中国大陆的广东、海南等地，常生长在低海拔至中海拔山地密林中、疏林中、山谷和水沟旁土壤肥沃湿润地方.仔榄树的根，味苦、性凉，有消炎止痛的功能，用于蛇毒咬伤、跌打肿痛诸症［1］.目前对仔榄树化学成分的研究主要集中于生物碱成分，另外也报道一些酚性物质［2］等非生物碱类成分，但对非生物碱成分的研究到目前为止比较少，为全面研究仔榄树各类成分及更好地开发利用仔榄树资源，本课题组对仔榄树叶95%乙醇(体积分数)提取物的正丁醇部位进行了系统的化学成分研究，从中分离了11个化合物，分别鉴定为(±)-赤-3-甲氧基-4羟基苯基丙三醇(1)、(±)-苏-3-甲氧基-4-羟基苯基丙三醇 (2)、(+)-syringaresinol-4，4'-O-bis-β-D-glucopyranoside(3)、1，3，5-三甲氧基苯 (4)、丁香酸葡萄糖苷 (5)、2，6-二甲氧基-4-羟基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (6)、3，5-二甲氧基-苄醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (7)、(2E，6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″fwdarw6')-β-D-glucopyranosyloxy)-2，6-dimethyloct-2-eno-1，2″-lactone(8)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (9)、2-甲胺基苯甲酸 (10)、D-1-O-methyl-myo-inositol(11).化合物1～11均为首次从该植物中分离得到.

1 实验部分

1.1 仪器、试剂和材料

Bruker AV-300/AV-400型超导核磁共振仪;Finnigan LCQ Advantage MAX质谱仪;Jasco P-1020型全自动旋光仪;Jasco FT/IR-480 Plus Fourier Transform型红外光谱仪(KBr压片);Jasco V-550型紫外/可见光谱仪;Agilent 1200分析型高效液相色谱仪;硅胶GF254薄层预制板为烟台化学工业研究所产品;柱层析硅胶(200～300目，80～100目，硅胶H)为青岛海洋化工厂产品;十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱层析材料为Merck公司产品;Sephadex LH-20为 Amersham Biosciences产品;所用试剂均为分析纯或化学纯.

实验所用仔榄树药材于2010年9月采于海南省尖峰岭，经海南大学生物工程研究中心黄世满老师鉴定为夹竹桃科仔榄树属植物仔榄树的干燥叶子.

1.2 提取分离

干燥仔榄树叶子19.1 kg，粉碎，95%乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩后至无醇味，得到总浸膏3.1 kg.向浸膏中加适量水混悬，依次用石油醚、氯仿和正丁醇萃取，回收溶剂后得到石油醚萃取物(500 g)，氯仿萃取物(1.7 kg)，正丁醇萃取物(800 g)，水层(128 g).正丁醇萃取物(730 g)以硅胶柱层析用氯仿-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脱，经 TLC检识合并得到24个馏分，从薄层点板情况看馏分2，4，8～10，12～14在薄层板上的成点性较好，对这几个馏分经反复硅胶色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、ODS以及制备型HPLC分离纯化，得到化合物1(4.3 mg)、2(4.1 mg)、3(9.6 mg)、4(3.0 mg)、5(8.2 mg)、6(6.4 mg)、7(13.3 mg)、8(20.1 mg)、9(7.3 mg)、10(3.2 mg)、11(100.7 mg).

2 结果

对分离得到的11个化合物通过光谱数据和理化性质鉴定其化学结构如下:

(1)化合物 1:无色油状物 (甲醇);UV(CH3OH):280，229，205 nm;IR(KBr):3 434，1 636 cm-1;ESI-MS m/z 237 ［M+Na］+，213［MH］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.01(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.77(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-5)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，4.53(1H，d，J=6.4 Hz，H-1')，3.86(3H，s，OCH3)，3.74(1H，m，H-2')，3.65(1H，m，H-3'β)，3.59(1H，m，H-3'α).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:148.9(C-3)，147.1(C-4)，134.9(C-1)，121.1(C-6)，115.9(C-5)，112.0(C-2)，76.8(C-2')，76.3(C-1')，64.7(C-3')，56.5(OCH3).化合物1的旋光几乎为零，故推测此化合物为外消旋体.以上数据与文献［3］报道一致，故鉴定化合物1为(±)-赤-3-甲氧基-4-羟基苯基丙三醇((±)-erythro-guaiacylglycerol).

(2)化合物 2:无色油状物 (甲醇);UV(CH3OH):280，229，205 nm;IR(KBr):3 420，1 632，1 521 cm-1;ESI-MS m/z 237 ［M+Na］+，213 ［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.99(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.76(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-5)，6.81(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，4.52(1H，d，J=6.4 Hz，H-1')，3.87(3H，s，OCH3)，3.67(1H，m，H-2')，3.47(1H，m，H-3'α)，3.35(1H，m，H-3'β).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:149.0(C-3)，147.3(C-4)，134.9(C-1)，120.8(C-6)，116.1(C-5)，111.7(C-2)，77.8(C-2)，75.6(C-1)，64.4(C-3)，56.5(OCH3).化合物2的旋光几乎为零，故推测此化合物为外消旋体.以上数据与文献［3］报道一致，故鉴定化合物2为(±)-苏-3-甲氧基-4-羟基苯基丙三醇((±)-threo-guaiacylglycerol).

(3)化合物 3:白色球状固体 (甲醇)，UV(CH3OH):274，215 nm;IR(KBr):3 389，2 930，1 597，1 507，1 127 cm-1;-33.4°(c 0.5，CH3OH);ESI-MS m/z 765［M+Na］+，741［M-H］-.1HNMR(400 MHz，C5D5N)δ:6.91(4H，s，H-2，6，2'，6')，6.12(2H，d，J=7.2 Hz，H-1″，H‴)，3.77(12H， s， OCH3).13C-NMR(100MHz，C5D5N)δ:154.2(C-3，3'，5，5')，138.6(C-4，4')，136.3(C-1，1')，105.0(C-2，2'，6，6')，103.8(C-1″，1‴)，86.4(C-7，7')，76.9(C-3″，3‴)，73.5(C-2″，2‴)，72.7(C-5″，5‴)，72.5(C-9，9')，69.2(C-4″，4‴)，63.0(C-6″，6‴)，57.0(OCH3)，55.0(C-8，8').以上数据与文献［4］报道的相符，故鉴定化合物3为(+)-syringaresinol-4，4'-O-bis-β-D-glucopyranoside.

(4)化合物4:无色颗粒(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.33(3H，s，H-2，4，6)，3.88(9H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:149.0(C-1，3，5)，108.5(C-2，4，6)，57.0(OCH3).以上核磁数据推断化合物4为1，3，5-三甲氧基苯(1，3，5-trimethoxybenzene).

(5)化合物5:白色粉末 (甲醇)，UV(CH3OH):251，214 nm;IR(KBr):3 368，1 667，1 596，1 229 cm-1;ESI-MS m/z 383［M+Na］+，359［MH］-.1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ:7.81(2H，s，H-3，7)，6.00(1H，d，J=7.2 Hz，glc 1'-H)，4.43(1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，glc 6'α-H)，4.35(4H，m，glc 2'，3'，4'，6'β-H)，3.99(1H，m，glc 5'-H)，3.78(6H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ:169.4(C-1)，153.7(C-4，6)，139.9(C-5)，128.7(C-2)，109.0(C-3，7)，104.7(C-1')，79.3(C-3')，78.8(C-2')，76.4(C-5')，71.2(C-4')，63.0(C-6')，56.9(OCH3).以上数据与文献［5］报道的数据一致，故鉴定化合物5为丁香酸葡萄糖苷(glucosyringic acid).

(6)化合物6:无色晶体 (甲醇)，ESI-MS m/z 355 ［M+Na］+，331 ［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.06(2H，s，H-3，5)，4.63(1H， d， J=7.2 Hz， H-1')，3.68(6H， s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:153.9(C-4)，153.2(C-2，6)，127.5(C-1)，103.5(C-1')，93.9(C-3，5)，77.0(C-3')，76.5(C-2')，74.2(C-5')， 70.0(C-4')， 61.0(C-6')， 56.1(OCH3).以上数据与文献［6］报道数据一致，故鉴定化合物 6为 2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D吡喃葡萄糖苷(2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside).

(7)化合物7:无色晶体 (甲醇)，UV(CH3OH):270，207 nm;IR(KBr):3 337，2 915，1 596，1 242 cm-1;ESI-MS m/z 369 ［M+Na］+.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.68(2H，s，H-2，6)，4.90(1H，d，J=7.4 Hz，H-1')，4.46(2H，s，H-7)，3.74(6H，s，OCH3)，3.62(1H，m，H-5')，3.44(1H，m，H-3')，3.25(2H，m，H-2'，6'α)，3.18(1H，t，J=7.4 Hz，H-4')，3.05(1H，dq，J=5.4，2.0 Hz，H-6'β).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:154.1(C-2，6)，139.5(C-4)，134.2(C-1)，106.0(C-3，5)，103.8(C-1')，78.3(C-3')，77.9(C-5')，75.1(C-2')，71.1(C-4')，63.8(C-7)，62.0(C-6')，56.8(OCH3).以上数据与文献［7］报道数据一致，故鉴定化合物7为3，5-二甲氧基-苄醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3，5-dimethoxy-benzyl alcohol 4-O-β-D-glucopyranoside).

(8)化合物8:白色针晶 (甲醇)，UV(CH3OH):216 nm;IR(KBr):3 377，2 868，1 698，1 279 cm-1;ESI-MS m/z 485 ［M+Na］+，461 ［MH］-.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.67(1H，t，J=8.2 Hz，H-3)，4.89(1H，m，H-16)，4.31(1H，d，J=8.0 Hz，H-15)，4.12(1H，d，J=7.6 Hz，H-14α)，3.99(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，3.74(1H，dd，J=12.0 Hz，H-19α)，3.69(1H，s，H-18)，3.59(1H，m，H-17)，3.48(1H，d，J=12.0 Hz，H-19β)，3.47(1H，t，J=6.8 Hz，H-8)，3.17(1H，m，H-14β，13)，3.09(1H，m，H-11)，2.90(1H，m，H-10)，2.81(1H，m，H-12)，2.24(1H，m，H-4α)，2.13(1H，m，H-4β)，1.75(3H，s，H-20)，1.46(1H，m，H-6)，1.35(2H，m，H-5，7)，0.91(3H，d，J=4.0 Hz，H-21).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:166.5(C-1)，141.9(C-3)，127.1(C-2)，101.9(C-9)，101.5(C-15)，76.5(C-11)，75.3(C-13)，73.4(C-10)，72.2(C-16)，70.7(C-17)，70.6(C-12)，69.7(C-14)，68.5(C-18)，67.5(C-8)，66.4(C-19)，34.8(C-5)，34.1(C-7)，29.1(C-6)，24.5(C-4)，22.0(C-21)，12.4(C-20).以上数据与文献［8］报道的一致，故鉴定化合物8为(2E，6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″fwdarw6')-β-D-glucopyranosyloxy)-2，6-dimethyloct-2-eno-1，2″-lactone.

(9)化合物9:黄色粉末(甲醇)，UV(CH3OH):350，262，215 nm;IR(KBr):3 460，3 166，1 654，1 552 cm-1;ESI-MS m/z 471［M+Na］+，447［MH］-.1H-NMR(300 MHz，CD3OD)δ:8.08(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.88(2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，6.41(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.13(1H，d，J=7.5 Hz，glc 1″-H)，3.44-3.82(6H，H of glc).13CNMR(75 MHz，CD3OD)δ:179.8(C-4)，166.3(C-7)，163.2(C-5)，161.8(C-4')，159.3(C-9)，158.7(C-2)，135.8(C-3)，132.5(C-2'，6')，122.9(C-1')，116.3(C-3'，5')，105.8(C-10)，105.2(C-1″)，100.1(C-6)，95.0(C-8)，77.3(C-3″)，75.2(C-2″)，73.2(C-5″)，70.2(C-4″)，62.2(C-6″).以上数据与文献［9］报道的数据一致，与文献［10］报道的数据相符，故鉴定化合物9为山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (kaempferol-3-O-β-D-glucoside).

(10)化合物10:淡黄色针状晶体 (甲醇)，ESI-MS m/z 152［M+H］+，150［M-H］-.1HNMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.86(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6)，7.35(1H，dt，J=8.0，1.6 Hz，H-4)，6.69(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-3)，6.55(1H，dt，J=8.0，1.6 Hz，H-5)，2.88(3H，s，NCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:168.4(C=O)，154.0(C-2)，135.7(C-4)，133.3(C-6)，115.3(C-5)，111.8(C-3)，107.4(C-1)，29.8(NCH3).以上核磁数据推断化合物10为2-甲胺基苯甲酸(2-methylamino-benzoic acid).

(11)化合物 11:白色晶体 (甲醇)，+3.4°(c 0.5，H2O);ESI-MS m/z 217［M+Na］+，193［M-H］-.1H-NMR(400 MHz，D2O)δ:3.41(3H，s，OCH3).13C-NMR(100 MHz，D2O)δ:81.1(C-1)，74.4(C-5)，71.8(C-3)，70.0(C-6)，69.1(C-4)，66.8(C-2)，56.7(OCH3).以上数据与文献［11］报道数据一致，故鉴定化合物11为D-1-O-methyl-myo-inositol.

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