HPLC法测定麻黄药材中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

王连芝

HPLC法测定麻黄药材中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

王连芝

目的建立麻黄药材中麻黄碱和伪麻黄碱的HPLC含量测定方法。方法麻黄药材提取液采用高效液相色谱法分析，色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相: 乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调PH2.7)(2:98)(含0.2%三乙胺)，流速1.0 ml/min，检测波长210 nm。结果盐酸麻黄碱的回归方程为Y=1.894×105X +8.127×105，r=0.9999，线性范围为0.240～0.640 μg，平均回收率为99.58%；盐酸伪麻黄碱的回归方程为Y=5.368×105X +8.015×105，r=0.9999，线性范围为0.234～0.624 μg，平均回收率为103.06%。结论本方法操作简单，重现性好，是检测麻黄药材中麻黄碱与伪麻黄碱的较理想方法。

麻黄；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；高效液相色谱法

麻黄(Herba Ephedrae)为常用药材，是麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf、中麻黄E. intermedia Schrenk et C. A. Mey. 或木贼麻黄E. equisetina Bge. 的干燥草质茎，具有发汗散寒，宣肺平喘，利水消肿的功效，用于风寒感冒，胸闷喘咳，风水浮肿，支气管哮喘等[1]。麻黄中有效成分为一系列结构相似的生物碱，主要为麻黄碱和伪麻黄碱，它们为结构相同的手性异构体，分离较为困难。关于HPLC法同时测定麻黄中麻黄碱与伪麻黄碱含量的方法[1-3]，但都存在着样品处理方法复杂，流动相配制繁琐，需选择特殊填料的色谱柱等问题。本试验采用HPLC法测定了麻黄药材中的麻黄碱和伪麻黄碱两种成分的含量。实验表明，本方法具有操作条件简便，专属性强，重复性好等特点，可用于麻黄药材中麻黄碱和伪麻黄碱的含量测定。

1 仪器与试药

1.1仪器 Waters2695-2998型高效液相色谱仪，KQ-300VD型双频数控超声清洗器，FA1104型电子分析天平。

1.2试药 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品购自中国药品生物制品检定所(批号分别为171241-201007和171237-200806)，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，麻黄药材购于北京同仁堂哈尔滨药店，经笔者鉴定为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎。

2 方法与结果

2.1色谱条件 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，柱温为40℃; 流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调PH2.7)(2 ∶ 98)(含0.2%三乙胺)，流速：1.0 ml/min；检测波长为210nm；进样量为10 μl。

2.2供试品溶液的制备 取本品细粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率50 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用44%磷酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件进行测定，色谱图见图1，2，3。

2.3线性关系考察 取盐酸麻黄碱对照品和盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 ml各含40 μg的混合溶液。分别精密吸取上述对照品溶液6 μl、8 μl、10 μl、12 μl、14 μl、16 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的回归方程和相关系数(n=6)分别为:Y=1.894×105X +8.127×105，r=0.9999；Y=5.368×105X +8.015×105，r=0.9999，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的线性范围分别为0.240～0.640 μg之间和0.234～0.624 μg之间。

2.4精密度实验 取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品混合溶液(浓度分别为40 μg/ml和39 μg/ml)，进样体积10 μl，连续进样6次，测定其峰面积积分值，计算其RSD分别为1.99%和0.89%，表明仪器的精密度良好。

2.5重现性试验 精密称取麻黄药材粉末6份，依2.2项下方法制备供试品溶液，并测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，RSD分别为0.32%和0.69%，表明该实验方法重现性良好。

2.6稳定性试验 精密称取麻黄药材细粉0.5 g，依2.2项下方法制备供试品溶液，每隔2小时进样1次，共进样5次，测定，RSD分别为0.95%和1.72%，表明该样品溶液在8 h内稳定。

2.7加样回收率试验 精密称取麻黄药材细粉6份，每份0.2 g，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品4 mg和盐酸伪麻黄碱对照品2 mg，按2.2项下方法进行样品处理，计算回收率，盐酸麻黄碱的平均回收率为99.58%，RSD为2.21%，盐酸伪麻黄碱的平均回收率为103.06%，RSD为1.29%，表明该实验方法的回收率较高。

2.8样品测定 精密称取麻黄药材细粉0.5 g，按2.2项下方法处理，进行高效液相分析，计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量分别为15 mg/g和7.2 mg/g。

3 讨论

麻黄碱与伪麻黄碱互为手性异构体，分离较为困难，《2010年版药典》麻黄含量测定项下选择极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱。本实验在参考文献的基础上选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，并对流动相系统进行考察，分别比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水、磷酸二氢钾水、乙腈-磷酸二氢钾水系统，加入三乙胺作改性剂，最终确定流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调PH2.7)(2:98)(含0.2%三乙胺)。在此流动相条件下，麻黄碱和伪麻黄碱能够达到很好的分离，保留时间合适，操作简便易行。

[1] 中国药典. 一部,2010:3000.

[2] 董自波，李超. HPLC法测定三拗片中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量.西北药学杂志，2011，26(5)：329-330.

[3] 葛斌，罗燕梅，许爱霞，等. HPLC测定麻黄药材中麻黄碱与伪麻黄碱的含量.中国药学杂志，2008，43(3):173-175.

150040 哈尔滨,黑龙江中医药大学中医药研究院