虎杖中白藜芦醇提取分离研究

刘轶华 朱红丽 任亮

·实验研究·

虎杖中白藜芦醇提取分离研究

刘轶华 朱红丽 任亮

目的考察虎杖中白藜芦醇苷的最佳提取分离工艺。方法研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件，从酶的种类、温度、pH值、酶解时间等方面分析。结果最佳提取工艺为：采用植物水解酶，提取温度40℃，酶解pH值3.0，酶解时间7 h，为最佳提取条件。结论酶处理后，可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率，且该提取工艺稳定性好且简便易行。

虎杖；白藜芦醇；提取分离；研究

虎杖为蓼科植物虎杖的根茎，主要含有[1]蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份。白藜芦醇和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分。白藜芦醇作为一类亲脂性多酚物质，具有抗血小板凝聚，保护肝脏，抗肿瘤活性等药理作用，特别是对心脑血管系统具有较强的药理活性。本实验采用酶法实验，对虎杖中的白藜芦醇进行提取分离，本研究旨在为虎杖开发利用提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 Ag ilent 1100 高效液相色谱仪；AG285分析天平；KS-600 d超声清洗器；Delta 320 pH 计；H HW420 型三用恒温水箱。

1.2试药 虎杖粉末，批号：20060829；纤维素酶，批号：F20071116；植物水解酶、植物提取酶；白藜芦醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号：1535-200001，纯度：99.5%；甲醇、乙醇、磷酸、磷酸二氢钾(分析纯)；乙腈(色谱纯)；蒸馏水。

2 方法与结果

2.1白藜芦醇的测定方法 色谱条件色谱柱ODSC18；流动相乙腈 ∶ 水(0.02%磷酸)30 ∶ 70；流速1 ml/min；柱温30℃；检测波长303 nm；20 μl进样环。理论塔板数不低于3000；分离度大于1.5。精密称取干燥白藜芦醇对照品330 μg，置10 ml容量瓶中加甲醇制成浓度33 μg/ml的溶液作为对照品溶液[2]。

2.2单因素考察 ①试样的制取:精密称取虎杖粉末若干份，每份约0.1 g，再每份加入pH = 5.0 缓冲盐溶液5 ml。摇匀，在45℃酶解18 h 后，加入20 ml 95%乙醇超声提取30 min，取出放冷，定容至25 ml，摇匀，过滤，取续滤液。②酶种类的筛选:取试样3份，1 份不加酶，其他2份分别加入10 mg 纤维素酶和植物水解酶，并按色谱条件进行测定，对于没有加入任何酶的试样，虎杖中白藜芦醇含量为1.8/ mg/g-1，加入纤维素酶试样中白藜芦醇含量为4.6/ mg/g-1，加入植物水解酶的试样中白藜芦醇含量为9.1/ mg/g-1。由测定结果可知，

3 讨论

近年来，随着科技及研究的不断进展，人们对虎杖白藜芦醇提取分离已取得了一定的进展，一些新的技术和手段不断应用于这一领域，为白藜芦醇提取提供了更科学的方法[4]。本试验采用的白藜芦醇测定方法，条件比较稳定，分离效果好，可用于虎杖及其制剂的含量测定。

[1] 江曙，朱蓉蓉，张芳,等.虎杖中白藜芦醇提取方法及工艺的优化.南京中医药大学学报, 2006,22(3):197-199.

[2] 黄志芳，易进海，刘倩伶，等. 酶解法提取纯化虎杖提取物中白藜芦醇的工艺研究.天然产物研究与开发，2009，21(6)： 1061-1064.

[3] 赵鸿宾, 陈华国, 龚小见, 等. 酶解法提取虎杖中的白藜芦醇.贵州师范大学学报: 自然科学版, 2010, 28 (2)： 104-106.

[4] 康连香, 王瑛, 贾彦超. 虎杖的药理研究和临床应用.中国中医药现代远程教育, 2010, 8 (10)： 86.

462300 漯河医学高等专科学校第二附属医院(刘轶华 朱红丽)；漯河医学高等专科学校(任亮)

植物水解酶处理效果最好，白藜芦醇含量最高，与不加入任何酶的试样相比较，白藜芦醇含量提高了4倍。③温度的选择:酶的活性与温度有关，各种酶的温度需求不同。一般来说[3]，温度越高，酶的反应速度越快，但当温度过高时，部分酶可能会失去活性，一般酶的酶解温度是在30℃～60℃左右，故在实验中分别选取30℃、40℃、50℃和60℃四个温度段。取试样4份试样，分别置于不同的温度段中，30℃时，白藜芦醇回收率为0.82%；40℃时，白藜芦醇回收率为1.57%；50℃时，白藜芦醇回收率为1.49%；当是60℃时，白藜芦醇回收率为1.31%，由此可见，酶解的最适宜温度为40℃左右。④酶解时间的选择:根据酶的活性及温度需求，还要找出酶解的时间。取4份试样，分别进行3 h，5 h，7 h，9 h时间的酶解，经过不同的时间段后，3 h后的白藜芦醇回收率为0.52%，5 h后的白藜芦醇回收率为1.32%；7 h后的白藜芦醇回收率为1.79%；9 h后的白藜芦醇回收率为1.38%，由以上数据可知，酶解最适宜的时间为7 h。⑤酶解pH值及酶量的选择:采用以上的方法步骤，实验后通过数据分析可知，虎杖专用酶最适酶解pH=3.0，酶含量为原药材的30.0%。