两种方法分别测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量

卢彤宇

（吉林省人民医院药剂科，吉林 长春 130021）

两种方法分别测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量

卢彤宇

（吉林省人民医院药剂科，吉林 长春 130021）

目的 比较两种不同方法测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量。方法 采用 NaNO2-Al（NO）3，和差示分光光度法，均以芦丁为对照品测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量。结果 采用 NaNO2-Al（NO）3 比色法及差示分光光度法测定的乌腺金丝桃中的总黄酮含量分别为 10.5% 及 8.4%。结论 以芦丁为对照品，NaNO2-Al（NO）3 比色法测定的乌腺金丝桃总黄酮中的含量更高，可以作为含量测定的方法。

乌腺金丝桃；总黄酮；分光光度法

乌腺金丝桃[1-2]（Hypericum attenuatum Choisy）为藤黄科金丝桃属植物，为民间常用中药。具有止血、镇痛、通乳等功效，近年来研究表明该植物含有十几种黄酮及其苷类化合物，黄酮类化合物具有较好的药理活性。为了开发利用乌腺金丝桃，了解药材中总黄酮的含量，我们采用两种不同的方法测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量。为乌腺金丝桃药材的进一步开发利用打下基础。总黄酮的测定方法有很多种，比色法是最常用的方法之一。比色法有NaNO2-Al（NO）3[3-4]、差示分光光度法和AlCl3比色法。其中以NaNO2-Al（NO）3最为常用，本实验比较了上述2种方法来测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量，为乌腺金丝桃中成分测定提供依据。

1 仪器与试药

紫外可见分光光度计752N（上海精密科学仪器有限公司）；电子天平BS124S（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；芦丁对照品购于中国食品药品检定研究院（批号：100080-200707）。乌腺金丝桃药材购于药材公司 ，由长春中医药大学鉴定教研室鉴定。其他试剂均为分析纯。

2 方 法

2.1 供试品的制备

取乌腺金丝桃药材，粉碎，取药材粉末约1 g，精密称定，置于100mL量瓶中，加80mL50%乙醇，超声提取20min，放冷，用50%乙醇补足至刻度，摇匀，即得。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在105℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量，加50%乙醇制成每毫升含1mg 的对照品溶液。

2.3 NaNO2-Al（NO）3比色法

2.3.1 标准曲线

分别取芦丁标准品溶液1、2、3、4、5mL，置于10 mL量瓶中，加入亚硝酸钠试液0.3mL，摇匀，放置6min，加入10%硝酸铝试液0.3mL，加入氢氧化钠试液 3mL，加50%乙醇定容至刻度，在505nm处测定显色后溶液的吸光度。以吸光度为纵座标，对照品溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为y=31.958x+0.393（R=0.9993）。结果表明， 芦丁溶液浓度一定范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 样品溶液中总黄酮含量的测定

取供试品溶液5mL，置于10mL量瓶中，按“2.3.1”项下操作，测定505nm处吸光度，计算乌腺金丝桃中总黄酮的含量。

2.4 差示分光光度法

2.4.1 标准曲线

分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5mL，各两份，置10 mL容量瓶中，其中一份加入50%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为参比液。另一份加入2%ZrOCl2·8H2O乙醇溶液1.5 mL，再加50%乙醇稀释至刻度。混匀，静置1 h，在波长为420nm 处测定吸光度。以吸光度为纵座标，对照品溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为 y=31.057x+0.340，（R=0.9994）。结果表明，芦丁溶液浓度一定范围内呈良好的线性关系。

2.4.2 样品溶液中总黄酮含量的测定

取供试品溶液5mL，置于10 mL量瓶中，按“2.4.1”项下操作，测定420nm处吸光度，计算乌腺金丝桃中总黄酮的含量。

3 结果与讨论

3.1 两种方法测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量

采用NaNO2-Al（NO）3比色法及差示分光光度法测定的乌腺金丝桃中的总黄酮含量分别为10.5%及8.4%。采用NaNO2-Al（NO）3比色法测定的黄酮含量更高，故对此方法在线性关系良好的基础上进一步进行方法学考察。

3.2 NaNO2-Al（NO）3比色法的方法学考察

3.2.1 精密度

精密吸取对照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”项下方法，在505nm 下连续5次测定吸光度，相对标准偏差（RSD%）为1.45%。表明仪器精密度良好。

3.2.2 稳定性

精密吸取对照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”项下方法，在10，20，30，59，60min 在505nm 下测定吸光度，考察其吸光度稳定性。结果表明，供试品溶液在60min内稳定性良好，吸光度的相对标准偏差（RSD%）为1.51%。

3.2.3 重复性

准确称取同一批次乌腺金丝桃5份，按照“2.3.2”项下操作方法制备5份供试品溶液，精密吸取每份供试品溶液各5mL，置10mL 量瓶中，在505nm下测定吸光度，测得供试品溶液中总黄酮的平均含量为10.32%，相对标准偏差（RSD%）为1.87%。

3.2.4 回收率

精密称取已知含量的乌腺金丝桃5份，每份0.5g，各加入5mL 对照品（浓度为：1.05 mg /mL），“2.3.2”项下方法制备5份加标样品溶液，分别测定吸光度，计算回收率。平均回收率为99.32%，相对标准偏差（RSD%）为1.79%。结果表明该方法准确度良好。

4 结 论

本文采用2种常用的分光光度法对乌腺金丝桃中黄酮类化合物含量进行了测定，为进一步明确乌腺金丝桃中的总黄酮类化合物提供依据。

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R927.2

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：1671-8194（2013）10-0072-02