570例肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的分析研究

邢应如 孟阿娜 阮建华

安徽省淮南市东方医院集团肿瘤医院检验科，安徽淮南 232035

570例肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的分析研究

邢应如 孟阿娜 阮建华

安徽省淮南市东方医院集团肿瘤医院检验科，安徽淮南 232035

目的 探讨不同年龄段肺癌患者T淋巴细胞亚群和NK细胞变化及临床意义。方法 回顾分析570例肺癌患者淋巴细胞亚群的流式细胞术检测结果。结果 肺癌在51～80年龄段内发病率占78.6%；肺癌患者CD4+T细胞相对减低、CD8+T细胞相对增高、CD4+/CD8+比值明显降低，与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；随着肺癌患者年龄降低，NK细胞有明显降低趋势（P＜0.01），CD3+T细胞有明显增加趋势（P＜0.01）。结论 肺癌患者CD4+T淋巴细胞亚群及NK细胞活性受到抑制，CD4+/CD8+比值显著降低，细胞免疫功能下降，年龄越年轻其细胞免疫功能越紊乱；流式细胞术检测外周血T淋巴亚群对评价疗效、判断预后具有重要价值。

肺癌；T淋巴细胞；NK细胞；流式细胞术

肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤。肺癌的5年生存率只有10%～20%[1]，预后极差。近50年来，我国肺癌发病率明显增高，在大中城市肺癌已居男性肿瘤之首。T淋巴细胞在抗肿瘤中具有极其重要的作用；T细胞应答是控制肿瘤生长发育的最重要的宿主应答；参与抗肿瘤免疫的两类T细胞亚群为CD4+辅助/诱导T细胞、CD8+抑制/细胞毒T细胞；T淋巴细胞及亚群可作为临床判断患者状态的一个敏感指标，对临床治疗具有重要意义。NK细胞在抗肿瘤的天然免疫和特异性免疫中发挥效应作用，能够直接杀伤各种肿瘤细胞和病毒感染细胞，是机体抗肿瘤的第一道防线。本文旨在探讨肺癌患者淋巴亚群变化和不同年龄组细胞免疫状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

570例肺癌患者均为2009年1月～2012年10月淮南东方医院集团肿瘤医院初次住院的临床确诊患者，其中，男性 481例，女性 89例，男女比例为 5.4∶1；最大年龄92岁，最小27岁，中位年龄66岁。正常对照组20例，其中，男性13例，女性7例，年龄35～57岁，均为体检未发现肿瘤及免疫性疾患的人员。

1.2 样本采集

肝素真空采血管采集静脉血2 mL，室温放置，样本24 h内做染色处理。

1.3 试剂仪器

使用BD MultitestTM IMK kit四色荧光抗体试剂盒（Cat No:340503），CaliBRITETM 3 COLOR KIT（Cat No:340 486）和 CaliBRITETM APC（Cat No:340487）定标荧光微球，FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司），调用四色免洗条件MultiSET软件自动分析淋巴细胞亚群；报告NK细胞（CD16+56+）、T 淋巴细胞（CD3+）、辅助/诱导 T 细胞（CD3+CD4+CD8-）和抑制/细胞毒 T 细胞（CD3+CD4-CD8+）占淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+细胞比值。

1.4 统计学处理

表1 肺癌患者和对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果（±s）

表1 肺癌患者和对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与71～80岁组比较，bP＜0.05

年龄（岁）例数（n）百分比（%）NK（%）CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+≤40（1）41～50（2）51～60（3）61～70（4）71～80（5）≥81（6）总计对照组（7）20 59 146 136 164 45 570 20 3.5 10.4 25.6 23.9 28.8 7.9 100.0-16.15±6.08b 15.56±8.93b 16.97±8.93b 17.22±10.13b 20.48±9.75 18.98±11.64 18.02±9.74 18.25±6.11 71.55±8.68b 70.81±11.37b 69.01±10.9b 68.01±12.05 66.31±11.73 68.51±13.32 68.23±11.67 68.80±5.23 35.8±7.74a 38.86±9.45a 37.29±10.43a 36.36±11.01a 36.02±11.29a 35.53±9.24a 36.68±10.56a 44.60±3.72 33.25±9.29a 29.81±8.88a 29.64±10.81a 30.12±11.87a 29.20±10.80a 31.62±13.31a 29.93±11.05a 23.70±3.80 1.20±0.50a 1.45±0.66a 1.49±0.73a 1.48±0.93a 1.51±1.22 1.53±1.45 1.48±0.99a 1.94±0.39

2 结果

2.1 肺癌不同年龄组构成比

本组结果在51～80岁年龄段内发病人数占肺癌总人数的78.3%，是肺癌高发年龄段。肺癌在71～80岁组发病率最高（28.8%），可能是人的衰老，免疫系统功能衰弱，特别是细胞免疫功能下降，导致肿瘤发病率增加。由于80岁以上人群数量明显减少，其发病率明显减低并不能说明其发生肺癌的概率会降低。各组比例如图1。

2.2 肺癌患者不同年龄组与对照组淋巴细胞亚群结果

肺癌患者CD4+T细胞相对减低、CD8+T细胞相对增高、CD4+/CD8+比值明显降低，与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；NK和CD3+T细胞与对照组比较，差异无统计学意义。肺癌患者不同年龄组与对照组淋巴细胞亚群结果见表1。

2.3 肺癌患者淋巴亚群结果的年龄趋势分析

以年龄组（1）～（5）组为自变量，以淋巴亚群结果为因变量作线性回归分析，SPSS 17.0软件统计结果见表2。

表2 肺癌患者淋巴亚群结果的年龄趋势分析

随着肺癌患者年龄降低NK细胞有明显降低趋势（P＜0.01），CD3+T 细胞有明显增加趋势（P ＜0.01），如图2。

3 讨论

CD4+T细胞可直接杀伤肿瘤细胞，可识别肿瘤细胞分泌的可溶性抗原，参与B细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和细胞毒T细胞的激活，进而发挥抗瘤作用；CD4+T细胞的减少可以解释肿瘤的免疫逃避机制。肿瘤细胞具有分泌多种免疫抑制因子功能，可抑制T细胞和NK细胞[2]，使T细胞和NK细胞数量减少，T细胞和NK细胞减少可削弱机体的免疫监视作用。本组结果显示T细胞和NK细胞明显降低，说明肿瘤患者存在免疫逃避；随着年龄的增大CD4+T细胞降低明显，免疫功能随年龄增加而不断下降[3]，肿瘤的免疫逃避增加。

NK细胞具有抗肿瘤，抗病毒感染，抗器官移植，参与T淋巴细胞、B淋巴细胞的调节及其免疫调节的功能。NK细胞通过受体作用维持平衡、发挥杀伤效应[6-7]。Cooper MA等[8]研究证明人外周血NK细胞可分为二群，80%～90%的NK细胞低表达CD56高水平表达CD16（CD56dimCD16brigh），此类细胞可有效地发挥细胞毒作用；10%～20%的NK细胞表型为CD56brighCD16dim或CD56brighCD16-，其功能主要是分泌细胞因子，参与机体的免疫调节。陈文宽等[9]研究78例喉咽鳞癌患者发现癌症组较非肿瘤对照组NK细胞活性低；局部晚期患者及有区域淋巴结转移患者的NK细胞活性同样降低。康培良等[10]报道胰腺癌根治手术治疗后可明显提高T细胞亚群和NK细胞的免疫功能。本研究肺癌患者NK细胞降低与文献一致[9-11]，患者越年轻NK细胞免疫活性越低。

在21～40岁组NK细胞明显降低，CD3+细胞、CD8+T细胞明显增高，CD4+/CD8+比值显著降低（P ＜0.01），在71～80 岁组NK细胞比前四组明显增高（P＜0.01）、稍高于对照组，说明年轻患者细胞免疫功能活跃，老年患者机体代谢慢、肿瘤生长也相对缓慢，老年机体本身免疫低下，细胞免疫反应降低。不同年龄的肺癌患者细胞免疫功能不同，其治疗策略、方法也应不同。肺癌患者越年轻细胞免疫功能紊乱越明显，提示年轻患者的治疗更要注重细胞免疫的调节和平衡。而老年患者机体本身免疫功能低下，细胞免疫对肿瘤的抑制能力有限，应注意机体的整体性治疗，防止并发症。

总之，肺癌患者的CD4+T细胞降低、CD8+T细胞升高、CD4+/CD8+比值显著降低，NK细胞降低，说明患者免疫功能处于抑制状态，T细胞亚群及NK细胞活性检测可作为肺癌免疫功能及预后的监测指标。肺癌年轻患者细胞免疫功能紊乱明显，提示年轻患者的治疗更要注重细胞免疫的调节和平衡。

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Analysis on T cell subset and NK cell of peripheral blood of 570 cases of lung cancer patients

XING Yingru MENG A'naRUAN Jianhua
Clinical Laboratory,Huainan Cancer Hospital of East Hospital Group,Anhui Province,Huainan 232035,China

ObjectiveTo explore the different age patients with T lymphocyte subsets and NK cell changes and its clinical significance.MethodsA retrospective analysis of 570 cases of patients with lung cancer detection results of lymphocyte subsets by flow cytometry.ResultsThe incidence rate of lung cancer was 78.6%in 51 to 80 age group;CD4+T cells were relatively lower,CD8+T cells were relatively increased,CD4+/CD8+ratio was significantly lower in lung cancer patients,compared with the normal control group,there were obvious meaningful differences(P<0.05);With lowering the age of patients with lung cancer,NK cells tended to decrease significantly(P<0.01),CD3+T cells tended to increase significantly(P<0.01).ConclusionCD4+T cells subsets and NK activity are inhibited,CD4+/CD8+ratio is significantly lower,and cell immune function is decreased in the patients with lung cancer,the younger the age,the more disordered cellular immune function;Detection of peripheral blood T-cell subsets by flow cytometry has important value to evaluate the therapeutic effect and prognosis.

Lung cancer;T lymphocyte;Natural killer cell;Flow cytometry

R734

A

1674-4721（2013）04（b）-0093-03

2013-01-29 本文编辑：郭静娟）