茯苓多糖的提取技术

周琳

[中图分类号] S-1 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2013）11-0182-01

一、引言

茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分，具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等领域，具有广阔的开发应用前景。

二、材料与方法

1.茯苓多糖的提取方法

2.均匀设计实验对超声波提取茯苓多糖提取工艺

2.1器材及药品

茯苓，数控超声波清洗器，紫外分光光度计，电子分析天平。葡萄糖标准品，苯酚，浓硫酸和铝片等。

2.2.方法

2.2.1药材粉碎度的选择 参照文献条件，取不同粒度茯苓药材，在乙醇浓度50%，提取温度45℃条件下超声提取20 min，。实验结果表明，药材粒度为20～60目时，提取时提取率较好。

2.2.2提取次数的选择 取20～60目粒度茯苓药材，在2.2.2.1条件下分别提取1，2，3次，结果表明，超声波提取1次后，茯苓多糖即已提取完全。

2.2.3 茯苓提取物中多糖含量的测定方法

2.2.3.1 4%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g，蒸馏并收集182 ℃馏分，称取4 g，在100 ml容量瓶加水溶解至刻度线，然后放冰箱内冷藏备用。

2.2.3.2制备标准曲线 精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的无水葡萄糖标准品15 mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀置室温下（约24℃）备用（浓度为0.6 mg/ml）。精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置于100 ml容量瓶中，并加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2 ml，置具塞试管中，分别加入4%的苯酚溶液1 ml，混匀后迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，并于45℃水浴中保温30 min后取出，置冰水浴中5 min后取出。然后以第1份为空白对照组，用分光光度计在490 nm的波长处测定其吸收度A，以吸光度（A）为纵坐标，溶液浓度C为横坐标。统计，进行线性回归。

2.2.3.3苯酚-硫酸法测茯苓多糖含量 将各提取方法所得样品制成1 g/ml的溶液，精密量取2 ml，照标准曲线的制备项下的方法，用紫外分光光度法测定其吸光度，从标准曲线的回归方程中计算 出待测溶液浓度，并进一步计算出其多糖含量（以葡萄糖量计）。

2.2.4 均匀实验设计及结果分析实验结果用多元回归处理，将实验结果输入均匀设计分析软件2.10。验证实验按上述优化的超声提取条件，进行3次茯苓多糖的超声提取，结果得到优化条件下的茯苓多糖提取率为5.58%，与回归方程的预测值5.60%很接近，且重复实验相对偏差不超过2.5%，说明超声优化条件重复性良好。

3.茯苓多糖纯化方法

3.1蛋白质的去除方法

Severge法 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，从而去除蛋白。按多糖水溶液体积的1/4～1/3加入氯仿：戊醇（正丁醇）=5∶1，剧烈振摇20～30 min，除去含有蛋白质的氯仿和正丁醇混合液。

3.2 茯苓多糖的脱色 通常用活性炭吸附，但此法易造成多糖的损失，所以一般用弱碱性树脂、DEAE纤维素吸附色素。通过离子交换柱不仅能达到脱色的目的，而且可以进行分离[3]。

3.3透析除小分子杂质透析在逆相流水中进行，pH值保持在6.0～6.5。操作时将需要处理的茯苓多糖于双蒸水中过夜溶胀后，置于半透膜透析袋中，双蒸水透析，透析液浓缩后用乙醇沉淀多糖[4]。

3.4 大孔吸附树脂纯化茯苓多糖[5]应用大孔树脂纯化茯苓多糖，取得了较好的效果。该法具有吸附量大、选择性好、吸附速度快、易于解吸附、机械强度高、再生处理简便等优点。

三、结果与讨论

以上实验考察了影响药材有效成分提取的4个主要因素：药材粒度、固液比、提取时间，提取次数来研究茯苓多糖的提取，并对用传统加热回流和超声提取茯苓多糖的实验均进行了最佳工艺的验证，并对其因素的显着性影响进行了分析，得到了加热回流和超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件，并对它们进行了处理，从而得到了从茯苓中提取茯苓多糖的较为理想的方法——超声波提取法。茯苓多糖的超声提取方法简便，提取率高达5.58%左右，比常规提取方法的操作时间缩短10～20倍，而且多糖得率高。超声提取天然药物有效成分具有周期短、成本低、不破坏活性成分等显著优点，具有很好的应用前景。

参考 文献

[1]聂金媛，吴成岩，吴世容，等.微波辅助提取茯苓中茯苓多糖的研究[J].中草药，2004，35（12）：1346.

[2]赵声兰，赵荣华，陈 东，等.茯苓皮中茯苓多糖的提取工艺优化[J].时珍国医国药， 2006 ，17（9）：2730.

[3]王艺峰.茯苓菌核多糖及其衍生物的结构及生物活性[DB/OL]. 武汉大学硕士论文，2004：1.

[4]陈 莉.茯苓多糖提取工艺的优化及开发利用研究[DB/OL].贵州大学硕士论文，2007.

[5]李玲. 多糖的分离、纯化与分析[J]. 新疆工学院学报， 1996，17（2）：129.