萎胃宁颗粒剂的质量控制及稳定性考察

张明，倪颖，金伟华，呼永河 （．成都军区总医院药剂科，四川 成都60083；．成都医学院第一附属医院，四川 成都6053）

萎胃宁颗粒是由白花蛇舌草、半枝莲、香附、白术、高良姜、广木香、延胡索组成的临床经验方。有清热解毒，活血化淤，增强免疫力，防治癌变的药效。用于治疗慢性萎缩性胃炎、慢性浅表性胃炎。经过多年的临床应用，已成为疗效确切的经验方。通过提取、浓缩、制粒等工艺设计，将原汤剂改为颗粒剂，为控制制剂质量、确保临床疗效本实验采用TLC法对方中延胡索、白术进行定性鉴别；用HPLC法测定方中主药半枝莲中野黄芩苷的含量，并初步考察了制剂的稳定性。

1 材料

1．1 仪器 高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1200 series）；分析天平（AL－204，梅特勒－托利多仪器上海市有限公司）；超声波清洗器（HU－3120B型，功率120 W，频率40 kHZ，天津市恒奥科技发展有限公司）；电热鼓风干燥箱 （101－2B型 ，上海市实验仪器总厂 ）；三用紫外灯（ZF－2型，上海市安亭电子仪器厂）；薄层色谱硅胶预制板（青岛海浪硅胶干燥剂厂制造）。

1．2 药物及试剂 萎胃宁颗粒由成都军区总医院药剂科制剂中心提供（批号：110104、110105、110106）；延胡索对照药材（批号：101215）、白术对照药材（批号101109）；野黄芩苷对照品（批号：101201），对照药品均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2．1 定性鉴别

2．1．1 延胡索的 TLC鉴别［1］取供试品1g，研细，加甲醇60mL，超声提取30min，滤过，滤液挥干，残渣加水10mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。取除延胡索的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照TLC法试验［1］，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯－丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3min后，取出，挥干，置365nm紫外灯下。供试品色谱中，在于对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照无干扰。

2．1．2 白术的TLC鉴别 取供试品1 g，研细，加正己烷60 mL，超声提取30 min，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材0．4 g，同法制成对照品溶液，作为对照药材溶液。照TLC法试验［1］，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－醋酸乙酯（50∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热，置254 nm紫外灯下。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的斑点。

2．2 野黄芩苷测定

2．2．1 对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷4．0 mg加流动相超声定容于25 mL棕色量瓶中，制成浓度为0．16 mg·mL－1的野黄芩苷对照品溶液。

2．2．2 供试品溶液的制备 取样品约0．2 g，精密称重，置索式提取器中，加石油醚（60～90℃）提取至无色，过滤，置蒸发皿挥干，残渣用甲醇溶解并精密定容至100 mL量瓶中，摇匀，精密量取50 mL，挥干，残渣用20%甲醇溶解并精密定容至10 mL量瓶中。

2．2．3 阴性样品溶液的制备 按处方量取除半枝莲外的其余药材，按制剂工艺及“2．2．2”项下方法制成阴性样品溶液。

2．2．4 色谱条件 色谱柱：Agilent C18（150 mm×4．6 mm，5μm）；流动相为甲醇－水－醋酸（31∶61∶4）；检测波长：335 nm；体积流量：1．0mL·min－1；柱温：30℃；进样量：20μL，理论塔板数不低于2 000，分离度不低于1．5。此色谱条件下野黄芩苷保留时间约为9．9 min左右，色谱图见图1。

2．2．5 标准曲线的制备 分别精密吸取0．16 mg·mL－1的野黄芩苷对照品溶液1，2，3，4，5，10 mL于10 mL量瓶中，再用流动相分别定容后摇匀密封。依次进样分析，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线［2］，回归方程为Y＝154．46X＋130．16，r＝0．999。结果表明，野黄芩苷在0．016～0．16 mg·mL－1范围内有良好的线性关系。

2．2．6 精密度试验［3］分别精密吸取0．16 mg·mL－1的野黄芩苷对照品溶液20μL，重复进样6次，测得峰面积，RSD为0．54% （n＝6）。

2．2．7 重复性试验［4］取同一批号样品适量，共6份，分别按“2．2．2”项下方法平行制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量。结果，野黄芩苷的RSD为1．20%（n＝6）。

2．2．8 稳定性试验 取同一批号供试品溶液适量，分别在0，2，4，8，12，24 h进样20μL，测定峰面积，RSD为1．15%（n＝6），表明供试品溶液（避光）至少在24 h内稳定。

2．2．9 加样回收率 取已知含量样品（含量：1．73 mg·g－1，批号110104）适量，共9份，每份0．2 g，再分别加入一定量野黄芩苷对照品溶液1，1，1，2，2，2，3，3，3 mL，按“2．2．2”项下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，并计算加样回收率，结果见表1。

2．2．10 样品测定 取供试品3批，精密称取样品适量，按照按“2．2．2”项下方法，按上述色谱条件测定，结果见表2。

2．3 稳定性考察［5］

2．3．1 样品包装及考察条件 取样品（批号110104）以临床试验用包装（包装材料——铝塑的质地与结构相当于上市药品包装）于室温下放置，连续考察12个月。

表2 萎胃宁颗粒中野黄芩苷的含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of scutellarin（n＝3）

2．3．2 考察项目及方法依据 按2010年版中国药典中颗粒剂稳定性重点考察项目［1］操作，包括性状、鉴别、含量、粒度、溶化性、微生物限度（细菌数、霉菌、酵母菌数、大肠埃希菌）、装量项目。

2．3．3 影响因素试验

2．3．3．1 高温试验 取样品（批号110104）适量，除去外包装，置适宜的开口容器中，于60℃放置10 d，分别于0，5，10 d时取样，按“2．3．2”项下要求检测。结果见表3。

2．3．3．2 高湿试验 取样品适量，置恒湿密闭容器中，在25℃相对湿度（90±2．5）%条件下放置10 d，分别于0，5，10 d时取样，按“2．3．2”项下要求检测。结果见表3。

2．3．3．3 强光照试验 取样品（批号110104）开口，于照度为（4 500±500）lx的条件下放置10 d，分别于0，5，10 d时取样，按“2．3．2”项下要求检测。结果见表3。

2．3．4 加速试验［6］取样品（批号110104）适量，按上市包装，于温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下放置6个月，分别于第0，1，2，3，6个月末取样1次，按“2．3．2”项下要求检测。结果见表4。

2．3．5 长期试验 取样品（批号：110104）适量，按上市包装，于温度（25±2）℃、相对湿度（60±10）%的条件下放置24个月，分别于第0，3，6，9，12，18，24个月末取样1次，按“2．3．2”项下要求检测。结果见表5。

2．3．6 考察结论 萎胃宁颗粒样品为期24个月的质量考察结果表明，萎胃宁颗粒在24个月内质量稳定，所以本品有效期定为2年。

表3 萎胃宁颗粒高温、高湿、光照试验结果（批号：110104）Tab 3 Results of temperature，high humidity and illumination test（lot number：110104）

表4 萎胃宁颗粒加速试验结果（批号：110104）Tab 4 Results of accelerated test（lot number：110104）

表5 萎胃宁颗粒长期试验结果（批号：110104）Tab 5 Results of long－term test（lot number：110104）

3 讨论

本研究拟定TLC条件，对方中臣药延胡索、白术两味药材进行定性鉴别，展开效果良好，色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。所建立的HPLC法，测定方中君药半枝莲中野黄芩苷含量时，方法灵敏，准确、可行，重复性好，专属性强，能准确地控制产品中野黄芩苷的含量，可用于其质量控制。

稳定性考察结果显示，24个月内萎胃宁颗粒的质量符合规定，在高温、高湿、强光环境中均稳定，表明萎胃宁颗粒在2年内质量稳定。

［1］中国药典．一部［S］．2010：130，附录34，附录201．

［2］郭美华，史文秀，王金华，等．高效液相色谱法测定安神益心液中异嗪皮啶的含量［J］．中国医院药学杂志，2011，31（2）：172．

［3］欧琴，钱一鑫，康翼川，等．高效液相色谱法测定银杏叶充液胶囊黄酮和内酯的含量［J］．中国医院药学杂志，2010，30（23）：1974．

［4］张锦文，唐菲，张小琼，等．高效液相色谱法测定金线莲中金线莲苷的含量［J］．2011，31（4）：261．

［5］谢秀琼主编．中药新药制剂开发与应用［M］．2版．北京：人民卫生出版社，2000：315－316．

［6］鲁汉兰，徐雅敏，张亚金，等．疏肝舒乳颗粒稳定性考察［J］．中药材，2003，26（5）：367．