解毒通络方对兔心肌缺血再灌注损伤心肌酶的影响※

杨 健

(河北省唐山市中医医院针灸科，河北 唐山 063000)

实验研究

解毒通络方对兔心肌缺血再灌注损伤心肌酶的影响※

杨 健

(河北省唐山市中医医院针灸科，河北 唐山 063000)

目的 研究解毒通络方对实验性兔心肌缺血再灌注损伤(MIRI)血清心肌酶的影响。方法将32只日本大耳白兔随机分为4组，即空白对照组、模型组、解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组，每组各8只。解毒通络方低、高剂量组分别予3.16、6.32 g/(kg·d)生药，溶液量15 mL灌胃给药;空白对照组和模型组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃给药。均连续5 d。然后模型组、解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组行左冠状动脉前降支穿线，结扎，30 min后打开结扎实现再灌注，空白对照组只穿线，不结扎。测定各组天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK－MB)水平。结果 模型组、解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与空白对照组比较均明显升高(P＜0.05)。解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与模型组比较均明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与解毒通络方低剂量组比较略低，但无统计学意义(P＞0.05)。结论 解毒通络方可降低兔MIRI心肌酶，对心肌具有保护作用。

心肌缺血;心肌再灌注损伤;解毒剂(中药);通络;模型，动物;兔;L－乳酸脱氢酶

冠心病是临床常见病，而急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是冠心病的严重事件之一，是急诊抢救中常见的危重症，早期溶栓或经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)可使梗死的相关冠状动脉再通，缩小梗死面积，从而改善心肌梗死预后。然而，近年来越来越多证据显示，在成功恢复心脏血流，即心肌得到血液再灌注后，可能使原有的心肌缺血性损伤加重，出现心律失常、梗死面积扩大等，即心肌缺血再灌注损伤(myocardial reperfusion injury，MIRI)。目前研究认为，氧自由基的产生、心肌细胞内钙超载及炎症浸润是MIRI的主要原因。针对这些原因，国内外学者进行了大量研究，以寻找有效药物。中医药治疗本病有悠久的历史，积累了丰富经验。本研究通过实验观察解毒通络方对兔MIRI心肌酶的影响，以探讨解毒通络方治疗MIRI的作用，为临床提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 健康雄性日本大耳白兔32只，由华北煤炭医学院动物中心提供［许可证号SCXK(京)2006－0005)］，体质量2.5 ～3 kg。

1.1.2 药物与试剂 解毒通络方，药物组成:瓜蒌30 g，半夏 12 g，黄连6 g，丹参15 g，海藻10 g，大黄5 g。以上药物均为广东一方制药有限公司生产的免煎颗粒制剂，相当于生药饮片剂量。

1.1.3 主要仪器 全自动生化分析仪(7170A型，日本日立)，冰箱(BCD－192E/M型，新飞电器有限公司)，光学显微镜(CX40型，日本奥林巴斯)，72－1型分光光度计(江苏无锡科达智能仪器厂)，电子天平(DT01型，常熟意欧仪器仪表有限公司)，冷光手术灯(YD01－2型，上海汇丰医疗器械有限公司)，放射免疫γ计数器(DFM－96型，合肥众成机电技术开发有限公司)，单导心电图机(ECG－6511型，上海光电医用电子仪器有限公司)。天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒，购自上海名典生物工程有限公司;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、肌酸激酶(CK)试剂盒、肌酸激酶同工酶(CK－MB)试剂盒，均购自宁波美康生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 将32只健康雄性大耳白兔随机分为空白对照组、模型组、解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组，每组各8只。

1.2.2 给药方法 将解毒通络方用0.9%氯化钠注射液混匀，解毒通络方低剂量组按3.16 g/(kg·d)生药，溶液量为15 mL灌胃给药;解毒通络方高剂量组按6.32 g/(kg·d)生药，溶液量为15 mL灌胃给药。空白对照组和模型组均予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃给药。均连续5 d。

1.2.3 造模方法 末次给药后，所有家兔以20%氨基甲酸乙酯5 mL/kg腹腔注射麻醉。家兔仰卧于操作台，四肢及头部固定，8%硫化钠四肢及胸部脱毛。四肢接标准肢体Ⅱ导联心电图。沿胸骨正中线剪开皮肤，钝性分离肌肉，沿胸骨左缘胸肋关节剪断3～5肋骨，小心剪开心包，开胸器打开切口，暴露心脏，用蘸有0.9%氯化钠注射液的棉棒旋转心脏，暴露血管，左心耳根部下方2～3 cm处用连接5/0号线的眼科小圆针穿过静脉下心肌浅层，穿线后稳定10 min，除空白对照组外，其余3组打“鞋带样”双活结结扎左冠状动脉前降支，30 min后打开结扎实现再灌注，再灌注120 min后结束实验。

1.3 检测指标及方法 灌注结束时于右心房取血5 mL，注入试管中待凝固，3 000 r/min离心，分离血清，测定AST、LDH、CK及CK－MB。国际临床化学联合会(IFCC)动力学法测定AST，IFCC推荐法测定LDH，N－乙酰半胱氨酸法测定CK，免疫抑制法测定CK－MB，操作严格按照试剂盒进行。

1.4 统计学方法 实验数据建立EXCEL数据库，数据采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，作方差分析检验，组间比较采用SNK法。

2 结果

3组AST、LDH、CK及CK－MB比较见表1。

表1 3组AST、LDH、CK及CK－MB比较U/L，±s

表1 3组AST、LDH、CK及CK－MB比较U/L，±s

与空白对照组比较，*P ＜0.05;与模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

组 别 n AST LDH CK CK－MB空白对照组 8 67.63 ±10.87 445.63 ±64.62 118 4.00 ±168.90 846.75 ±115.30模型组 8 93.28 ±10.21* 662.29 ±71.83* 196 0.57 ±277.46* 165 0.43 ±146.53*解毒通络方低剂量组 8 80.33±9.35＊△ 556.00±108.47＊△ 172 4.00±109.21＊△ 144 6.83±140.28＊△解毒通络方高剂量组 8 79.86±12.23＊△ 553.57±95.59＊△ 169 6.85±136.61＊△ 139 3.71±210.07＊△△

由表1可见，模型组、解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与空白对照组比较均明显升高(P＜0.05)，造模成功。解毒通络方低剂量组及解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与模型组比较均明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。解毒通络方高剂量组AST、LDH、CK及CK－MB与解毒通络方低剂量组比较略低，但无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

MIRI属中医学胸痹、心痛、心悸、真心痛等范畴。病位在心，病性为本虚标实。本虚为脏腑虚损，阴阳气血失调;标实有气滞、血瘀、痰阻、寒凝。临床实践中我们发现，随着人们生活水平的提高，生活方式、饮食结构的改变，工作压力的增加，生活节奏的加快，导致现代人的疾病特点也发生了变化，实证多，虚证少。尤其是部分人恣嗜膏粱厚味，吸烟饮酒，活动减少，导致阳气不得外泄，内郁生热成毒，毒热浊腐浸于血脉，心脉瘀窄，心体大损，心络闭塞，不通则痛;或心理压力过大，所欲不遂，精神紧张，家庭不和，多致肝郁气滞，气郁化火。《素问·至真要大论》载:“火热受邪，心病生焉。”《圣济总录》云:“大抵心属火而恶热，气受病则易于生热。”临床中许多西医诊断为冠心病，中医诊断为胸痹的患者，除有胸痛、胸闷及气短等症状外，还有发热，心悸，烦躁不安，大便不畅，舌质黯红，舌苔黄腻或黄燥，脉滑数、弦数等症状。这些症状均与热毒炽盛、血脉瘀阻有关。因此，提出毒瘀阻络致病的观点。解毒通络方是刘玉洁教授在继承前人经验，又结合自身临床实践的基础上拟定的治疗胸痹方剂。方中瓜蒌清热化痰，宽胸除痹，为君药;黄连泻热降火，半夏降逆化痰，半夏、黄连相配辛开苦降，化痰散结，通畅气机，共为臣药;佐以丹参活血化瘀，海藻软坚化痰;使以大黄，既清热解毒又化瘀散结，使热毒从大便出，使邪有出路，热毒清，闭结散，脉络畅而诸症除［1］。诸药合用，共奏宽胸开痹散结、清热化痰祛瘀的功效。临床上对冠心病心绞痛、PTCA及支架术后出现胸闷、胸痛、舌质黯红、舌苔黄腻、脉滑数等表现的患者有较好治疗效果。

为了进一步证实MIRI后“毒瘀”的病机，证实解毒通络方在本病中的治疗作用，我们用日本大耳白兔制作MIRI后动物模型，重点观察心肌标志物酶的变化，为心肌缺血再灌注损伤的治疗探索一条新思路、新方法。CK－MB主要存在于心肌组织中，其他组织含量很少。在心肌细胞受损伤时，CK、CK－MB释放入血液，血液中含量急剧升高，故测定 CK及 CK－MB是检测心肌损伤的敏感指标［2］。

本实验结果显示，解毒通络方高、低剂量组 AST、LDH、CK及CK－MB均较模型组明显下降，表明心肌细胞的损伤程度减轻，心肌酶漏出减少，具有保护缺血再灌注心肌的作用。说明解毒通络方疗效确切，证实毒瘀阻络是心肌梗死病机观点的正确性，证实了以清热解毒通络药为主、重在祛邪组方原则的正确性。

(指导老师:刘玉洁)

［1］ 郝幼敏，刘玉洁.中药解毒通络法对急性心肌梗死患者C反应蛋白的干预［J］.四川中医，2007，25(2):64 －65.

［2］ 李影林.中华医学检验全书［M］.北京:人民卫生出版社，1996:836.

Effect of dispelling toxins and dredging collaterals meridians and collaterals on myocardial enzyme in rabbit with myocardial ischemia/reperfusion injury

YANG Jian.Acupuncture and Moxibustion Department，Tangshan Mu- nicipal Hospital of Traditional Chinese Medicine in Hebei Province，Hebei，Tangshan 063000

Objective To investigate the effects of dispelling toxins and dredging collaterals meridians and collaterals on myocardial enzyme in rabbit with myocardial ischemia/reperfusion injury.Methods 32 Japanese white rabbits were randomly divided into four groups，sham operation group，myocardial ischemia group，dispelling toxins and dredging collaterals therapy low dosage group(group C)，dispelling toxins and dredging collaterals therapy high dosage group(group D).There were 8 rabbits in each group.Low dose group and the high dose group were 3.16，6.32 g/(kg·d)of crude drug.Liquid volume of 15 mL was administered orally.The equal volume of 0.9%sodium chloride injection was administered orally in the blank control group and model group for 5 days of continuous administration.The threading，ligation of left anterior descending branch was carried out in dredging collaterals group B，C and D.Open ligation achieved reperfusion after 30 min，the blank control group only wear line was not ligated.The levels of AST，LDH，CK and CK －MB were measured in each group.Results The levels of AST、LDH、CK、CK－MB in group B，C and D were significantly increased in comparison with those in group A(P ＜0.05).The levels of AST、LDH、CK、CK －MB in group C and D were significantly decreased in comparison with those in group B(P ＜0.05，P ＜0.01).The levels of AST、LDH、CK、CK －MB in group D were lower than those in group C，but there was no significance(P ＞0.05).Conclusion Dispelling toxins and dredging collaterals therapy may reduce injury in myocardial cell，it has protective effect on myocardial ischemia/reperfusion.

Myocardial ischemia/reperfusion injury;Dispelling toxins and dredging collaterals therapy;Aspartate aminotrans(AST);Lactate dehydrogenase(LDH);Creatine kinase;MB－Creatine kinase

R542.205.31;R285.5;R－33

A

1002－2619(2012)07－1066－03

※项目来源:河北省中医药管理局2008年度中医药、中西医结合科研计划课题(编号:2008043)

杨健(1971—)，女，副主任中医师，硕士。从事针灸临床工作。研究方向:心脑血管疾病、中医美容及针灸美容。

2012－03－06)