头穴丛刺结合康复技术法对大鼠脑梗死后行为功能影响的研究

周海纯，郑迎虹，蔡国锋，马育轩

(1．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2．黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

脑梗死(Cerebral infraction，CI)又称缺血性脑卒中，是神经系统临床常见病、多发病，急性脑梗死患者由于脑部血液循环障碍，缺血、缺氧引起局灶性脑组织缺血性坏死，出现相应的神经系统症状和体征。具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点［1－3］。如何使脑卒中所致神经功能缺损症状降低到一个最小的限度这一系列问题成为国内外研究的热点［4－7］。本研究旨在从分子水平上对比研究头穴丛刺结合康复技术法对大鼠脑梗死后行为功能的影响，为临床上进一步采用头穴丛刺结合康复技术治疗脑梗死提供客观依据，对改善神经功能缺损状况、降低脑梗死的致残率和提高生活质量具有重要意义。

1 资料与方法

1．1 实验动物 Wistar大鼠，体质量250～300g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。采用大脑中动脉阻塞(MCAO)模型制备方法。

1．2 动物分组方法

造模后24h按Bederson 4级评分标准评分。0级:未见行为缺陷;1级:前肢屈曲;2级:侧推抵抗力下降(即侧向推力实验阳性)伴前肢屈曲，无转圈行为;3级:同二级行为伴自发性旋转，评分低于两分者剔除。将符合标准的大鼠随机分为4组。

1)模型组12例，48h后，行大脑中动脉梗塞术，不予任何治疗，常规饲养;2)康复组12例同上，造模后康复治疗;3)针康组12例同上，造模后头穴丛刺结合康复技术治疗;4)假手术组4例仅分离动脉，不结扎插线。各时间点分组方法相同。

1．3 治疗方法

1)假手术组大鼠仅分离动脉不插入线拴，术后置于普通笼中饲养。2)模型组术后另置普通笼中术后清洁饲养，不予任何治疗。3)康复组大鼠进行大脑中动脉阻塞术，清醒后予以转笼，网屏，杂技任务训练，转棒等综合康复疗法。转笼长100cm，直径60cm的圆柱形金属网笼;中间分为4格，同时训练4只大鼠;水平放置于金属架上，一端有转动柄，可按需要纵轴转动。术后24h开始到21天。10min/d，5次/周。转棒:长750cm，直径4.5cm木棒一根，两端悬挂，手动以5r/min顺、逆时针交替转动。术后24h开始，10min，5天/周;杂技任务训练:要求大鼠按顺序走过独木直径2.7cm、绳直径2cm、梯(间距)5cm、重金属铰链(扣环2.7cm ×4.3cm)、系列障碍(高 l．3cm ～21cm)、网格平台(85cm×11cm，平台上依次有面积 6.25cm2、8.4cm2、12.25cm2的小洞)、一条缝隙，最后回到小笼。术后24h到4天在实验者的帮助下让大鼠适应此训练过程，然后改为4次/天(5～14天)，到2次/天(15～21天)。4)针康组大鼠造模24h后进行头穴丛刺结合康复技术治疗，头穴丛刺:采用头穴丛刺法，在相应的刺激区，按照“大鼠穴位图谱”所示，取百会穴及百会左、右侧各旁开4mm处沿皮分别刺入10mm，快速捻转1min后留针2h，期间每20min快速捻转1次，每日1次，共治疗3周;康复技术:同康复组。

1．4 指标测定方法

1．4．1 神经功能评定

按Bederson等制定的标准评分，评分分为4级。0级:未见行为缺陷;1级前肢屈曲;2级:侧推抵抗力下降(即侧向推力实验阳性)伴前肢屈曲，无转圈行为;3级:同二级行为伴自发性旋转。各组大鼠在治疗前、7天、14天、21天分别进行行为学评估，观察其评分情况。

1．4．2 行为功能评估

在大鼠脑梗死模型制作后24h，7，14，21天，进行功能评估，观察大鼠在行为学方面的差异。每项试验进行2次，取较高的分数值作为大鼠的该项得分。行为学测定在安静的环境中进行，评分标准见表1。

网屏测验(screentest):将大鼠置于水平放置的网屏上，而后迅速将网屏一端抬高并转至垂直位，记录大鼠在网屏上的维持时间。此项主要检测总的肌力。平衡木测验(balancebeamtest):将大鼠置于木棒中间位置，记录大鼠在木棒上维持的时间，最长30s。此项主要检测平衡能力［8］。抓握一牵引测验(prehensiletractiontest):将大鼠前爪放于水平放置绳上，松开［9］。记录大鼠在绳上悬掉的时间以及是否有第三肢(后爪)参与，最长5s。抓握是指大鼠前爪悬掉在水平绳上的能力，主要检测肌力;牵引是指大鼠将后肢放在绳上的能力，主要检测平衡和肌力［10］。

表1 评分标准

1．5 统计学处理

各组最终取2套切片纳入统计分析，实验数据用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 13．0统计软件进行统计分析，根据方差齐性与否分别采用参数检验和非参数检验，即齐性资料用单因素方差分析(one－factor ANOVA)的单向分类的方差分析(one－way ANVOA)，两两比较应用LDS－t检验;非齐性资料采用秩和检验。选择P＜0.05为差异有显著性，P＜0.01为差异有极显著性。

2 结果

2．1 神经功能评定 见表2。

表2 神经功能评定(±s)

表2 神经功能评定(±s)

n疗前 7天 14天模型组12 3．42 ±0．67 2．83 ±0．58 1．83 ±0．55康复组 12 3．33 ±0．78 1．83 ±1．11 1．08 ±0．76针康组12 3．25 ±0．75 1．00 ±0．85 0．33 ±0．47

2．2 行为学功能评定 见表3。

表3 脑梗死大鼠行为学评估得分(±s)

表3 脑梗死大鼠行为学评估得分(±s)

n疗前 24小时 7天 14天12 1．08 ±0．79 4．50 ±1．17 5．25 ±1．22 6．58 ±0．95康复组 12 1．33 ±0．98 4．67 ±1．23 6．16 ±1．11 7．41 ±0．86针康组模型组12 1．25 ±0．97 4．75 ±1．06 7．16 ±0．94 8．25 ±0．92

3 讨论

本实验采用的头穴丛刺结合康复技术方法对治疗中枢神经系统疾病特别是脑血管疾病有很好的效果。大量有关头穴丛刺和康复技术的研究显示，其能促进脑损伤后原位诱导内源性神经干细胞增殖、分化;这些方法还有改善脑血管循环、减轻脑细胞缺氧、抑制伤灶局部炎症反应、改善大脑电生理活动等功效，这些条件的变化也会进一步影响神经干细胞的增殖分化［11］。而且这些方法本身不同于外源性药物，它作用范围广泛，具有多靶点效应，作用机制多样，无不良反应，因而对于诱导内源性干细胞增殖分化具有其他药物疗法不可比拟的优越性、可行性［12］。鉴于成年脑内原位神经干细胞本身数量较少，其增殖不一定能满足补充需要，我们要做的是通过干预使干细胞数量增多以利于补充需要;用一定的方法促使其迁移和分化并最终融入功能缺失区的神经网络。虽然成体神经干细胞的可塑性仍是一个争论的问题，但有较好前景。

［1］ Aubert I，Ridet JL，Schachner M，et al．Expression of L1 and regeneration in the adult hippocampal formation［J］．J Comp Neurol，2010，399:1－19．

［2］ Falk A，Holmstrom N，Carlen M，et al．Gene delivery to adult neural stem cells［J］．Experimental Cell Research，2009，279(1):34－39．

［3］ 杨牧祥，于文涛．缺血性中风患者证型分布规律的研究［J］．中医药学刊，2006，24(9):1593－1595．

［4］ 白晶，李宝栋，唐强．头穴丛刺法对急性缺血性脑梗死大鼠神经可塑性影响的实验研究［J］．针灸临床杂志，2005，21(6):47－48．

［5］ 孙晓伟，于学平，李洪涛．头针对脑缺血再灌注大鼠脑组织MMP－9 表达调控的动态研究［J］．中医药学报，2011，39(3):107－111．

［6］ 郭玉红，滕秀英，戴晓红，等．头体针疗法对脑梗死患者血浆同型半胱氨酸水平的影响［J］．中医药学报，2011，39(4):87－89．

［7］ 孙晓伟，于学平，滕伟，等．头针对脑缺血再灌注大鼠神经功能评分、脑梗死体积及皮层神经元损伤的影响［J］．中医药信息，2011，28(4):91－93．

［8］ Rossella G，Angela G，Luca B，et al．Neural stem cells［J］．CircRes，2010，92:598－608．

［9］ Zheng W，Nowakowski RS，Vaccarino FM．Fibroblast growth factor 2 is required for maintaining the neural stem cell pool in the mouse brain subventricular zone［J］．Dev Neurosci，2010，26:181－196．

［10］ Enwere E，Shingo T，Gregg C，et al．Aging results in reduced epidermal growth factor receptor signaling，diminished olfactory neurogenesis，and deficits in fine olfactory discrimination［J］．J Neurosci，2009，24:8354－8365．

［11］ Crews FT，Nixon K，Willie ME．Exercise reverse ethanol inhibition of neural stem cell proliferation［J］．Alcohol，2006，33:63－71．

［12］ Pla AF，Maric D，Brazer SC，et al．Canonical transient receptor potential1 plays a role in basic fibroblast growth factor(bFGF)/FGF receptor－1－induced Ca2+entry and embryonic rat neural stem cell proliferation［J］．J Neurosci，2008，25:2687－2701．