胃癌组织中F框/WD-40域蛋白7和Cyclin E蛋白的表达

李向垒，王贵吉 ，裴迎新，张 琪，王夏飞

1)郑州大学第一附属医院肿瘤科 郑州450052 2)郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室 郑州450001

#通讯作者，男，1954年6月生，本科，教授，研究方向:消化道肿瘤，E-mail:pyx@zzu.edu.cn

F 框/WD-40 域蛋白7 (F-box/WD repeat-containing protein 7，FBXW7)对细胞周期进程、细胞生长和分化起着重要的调节作用，很多肿瘤中都存在FBXW7 调控网络的紊乱［1-2］。Cyclin E 在调控细胞由G1期进入S 期的进程中发挥重要作用，其表达异常会导致基因组不稳定，从而引发肿瘤［3］。该研究通过免疫组化SP 法检测75例胃癌组织中FBXW7和Cyclin E 蛋白的表达，以期探讨FBXW7 和Cyclin E 蛋白与胃癌发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集郑州大学第一附属医院2010年6月至2011年6月手术切除的胃癌组织标本75例，其中男45例，女30例，年龄24～80(55.9±11.1)岁。术后病理诊断明确，术前均未行放、化疗及靶向治疗。病理学类型:腺癌65例，印戒细胞癌10例。分化程度:高、中分化41例，低分化34例。浸润深度:T1(肿瘤侵犯固有层、黏膜肌层或下层)和T2(肿瘤侵犯固有层)24例，T3(肿瘤穿透浆膜下结缔组织，未侵犯脏层腹膜或临近结构)和T4(肿瘤侵犯脏层腹膜或临近结构)51例。淋巴结转移:无淋巴结转移35例，有淋巴结转移40例;TNM 分期:Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期42例。癌旁正常组织标本25例，取自距肿瘤边缘大于5 cm 的正常组织，其中男15例，女10例，年龄24～80(56.3±12.5)岁。所有标本均常规固定、石蜡包埋，4 μm 厚连续切片。

1.2 FBXW7 和Cyclin E 蛋白的检测 采用免疫组化SP 法。FBXW7 鼠抗单克隆抗体为美国Santa Cruz 公司产品，Cyclin E 兔抗单克隆抗体为北京博奥森生物技术有限公司产品，通用型SP 试剂盒和DAB 显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。FBXW7 和Cyclin E 一抗均稀释80 倍使用。严格按说明书步骤进行操作，以PBS 代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定 FBXW7 和Cyclin E 均以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。选择5 个高倍镜视野，每个视野计数200 个细胞，FBXW7 阳性细胞百分数＜20%为阴性，≥20%为阳性;Cyclin E 阳性细胞百分数＜5%为阴性，≥5%为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0 处理数据，2 种胃组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白阳性表达率、不同临床病理特征胃癌患者2 种蛋白阳性表达率的比较采用χ2检验，胃癌组织中FBXW7、Cyclin E 表达的关联性采用Pearson 列联系数表示，检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 正常胃组织和胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表达 见图1、表1。

2.2 胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表达与临床病理特征的关系 见表2。

2.3 胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表达的关联性 见表3。

图1 正常胃组织和胃癌组织中FBXW7(A)和Cyclin E(B)蛋白的表达(SP，×400)

表1 正常胃组织和胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表达 阳性表达例数(%)

表2 胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表达与临床病理特征的关系

续表

表3 胃癌组织中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表达的关联性

3 讨论

许多疾病的发生都以泛素蛋白酶体对蛋白质的异常降解为基础。FBXW7 在泛素蛋白酶体降解途径中具有重要作用，是一种广泛的抑癌蛋白。FBXW7 含有3 个保守的结构域:F-box、WD40 重复序列和D 结构域。F-box 可与S 期激酶相关蛋白1(SKP1)相互作用; WD40 重复序列与靶蛋白上磷酸-降解决定子相互作用，介导FBXW7 与靶蛋白结合; D 结构域的功能是促进FBXW7 二聚化［4］。FBXW7 表达缺失会导致Cyclin E、MYC、Aurora-A等物质的蓄积，加快癌细胞增殖［5］。研究［6］发现FBXW7 mRNA 在大肠癌组织中的表达明显低于正常大肠组织。Wertz 等［7］发现FBXW7 缺陷的卵巢癌和结肠癌细胞中MCL1 蛋白的表达增高，更易于对抗微管药物产生耐受，并证实FBXW7 在泛素-蛋白酶体介导的MCL1 蛋白降解中发挥了关键性作用。国外有文献［8］报道，在胃癌组织中，FBXW7 的低表达与肿瘤大小、淋巴结转移、预后不良有关。该研究结果显示:胃癌组织中FBXW7 的表达降低，且与胃癌的分化程度、淋巴结转移、TNM 分期有关，提示FBXW7 与胃癌的发生和进展有关。

Cyclin E 在调控细胞由G1期进入S 期的进程中发挥重要作用，对DNA 及中心体的复制也有一定的影响。Cyclin E 随着细胞周期不同时相有序地合成和降解是保证细胞周期顺利进行的重要条件，其过度表达可加速细胞由G1期进入S 期，导致细胞增殖失控并最终形成肿瘤［3］。Cyclin E 在宫颈癌、卵巢癌、乳癌、肝细胞癌、肺癌、胃癌、大肠癌等多种恶性肿瘤中呈过度表达，且与肿瘤的恶性程度及预后有关。千新来等［9］发现Cyclin A 和Cyclin E 在HPV16E7 阳性乳癌组织中的阳性率较高。Kouraklis等［10］发现在胃癌组织中Cyclin E 高表达与Lauren分型、淋巴结浸润、肿瘤直径＞5 cm、淋巴管浸润和血管浸润有关。该研究结果表明，Cyclin E 在胃癌组织中的表达升高，且与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM 分期有关，提示Cyclin E 与胃癌的发生和进展有关。

Cyclin E 由泛素FBXW7 介导的蛋白酶体进行调节。一些肿瘤中FBXW7 基因常发生缺失或突变，Cyclin E 就不能被有效降解［11］。Ekholm-Reed等［12］认为FBXW7 功能状态是调节细胞周期中Cyclin E 水平的必要条件，FBXW7 的功能异常足以导致Cyclin E 失调节。该研究结果显示胃癌组织中FBXW7 与Cyclin E 蛋白的表达呈负关联。

综上所述，FBXW7 和Cyclin E 与胃癌的发生、发展及浸润、转移密切相关，联合检测FBXW7 和Cyclin E 的表达将有助于胃癌的预后判断。

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