溃疡性结肠炎患者血清和结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白的表达*

周 川，郝卉杰，薛福敏，张建立，石朝阳，杨万荷，仝亚林，冯百岁

郑州大学第一附属医院消化内科郑州450052

#通讯作者，男，1965年10月生，博士，教授，研究方向:炎症性肠病，E-mail:fbs163@163.com

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)包括克罗恩病和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)，其病因和发病机制尚未阐明。目前国外报道［1］认为鞭毛蛋白是存在于细菌表面的络合物的重要分子组成成分，对细菌的黏附能力和活力起着重要作用。哺乳动物体内有受体可以识别细菌鞭毛蛋白，介导机体产生一系列炎症反应。作者通过检测UC 患者外周血中细菌鞭毛蛋白抗体的含量和肠黏膜细菌鞭毛蛋白的表达，探讨细菌鞭毛蛋白在UC 致病中的作用，为进一步明确IBD 的病因提供新的思路。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2009年9月至2010年10月郑州大学第一附属医院门诊和住院的UC 患者60例，采用Truelove 和Witts UC 分度标准［2］，中、重度UC患者30例，年龄16～55(35.2±7.5)岁;轻度UC 患者30例，年龄20～50(36.2±7.8)岁。结肠镜下取病灶处肠黏膜活检组织。30例健康志愿者为血清对照组，年龄22～53(31.4±8.2)岁。15例肠黏膜对照组为结肠癌行外科手术切除的正常结肠断端，均经病理证实，年龄28～55(40.8±8.3)岁。所有对象受试前4 个月内均未接受氨基水杨酸、糖皮质激素及免疫抑制剂等治疗，且未合并其他自身免疫性疾病、病毒性肝炎等。研究对象均签订知情同意书。

1.2 血清细菌鞭毛蛋白抗体水平检测 采受试者外周血1 mL，进行细菌鞭毛蛋白抗体检测，ELISA 试剂盒购自美国R＆D 公司，实验严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白的表达 采用免疫组化SABC 法测定。取石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，滴加抗人细菌鞭毛蛋白一抗(美国UCL 公司产品，使用时稀释100 倍)。4℃冰箱过夜，次日加入生物素二抗，DAB 显色，各步骤之间用PBS 冲洗3 次，每次5 min，依次脱水和封片，以PBS 代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。均严格按试剂盒说明书步骤进行操作。结果判定:高倍镜(×400)下选择5 个不重复视野观察。阳性细胞百分比:0～25%为0 分，～50%为1 分，～75%为2 分，＞75%为3 分。染色强度:无色或黄色为1 分，棕色为2 分，褐色为3 分。以上两项得分之和≥3 分为阳性，＜3 分为阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0 处理数据，各组患者血清细菌鞭毛蛋白抗体水平的比较应用单因素方差分析和SNK-q 检验，结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白表达的比较应用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组患者血清细菌鞭毛蛋白抗体水平的比较见表1。

表1 各组患者血清细菌鞭毛蛋白抗体水平的比较ng/L

2.2 各组结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白的表达见图1。肠黏膜对照、轻度UC 和中、重度UC组结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白表达的阳性率分别为20.0%(3/15)、56.7%(17/30)和73.3%(22/30)，3 者比较，差异有统计学意义(χ2= 11.553，P =0.003)。其中轻度UC 和中、重度UC组高于对照组，中、重度UC组高于轻度UC组。

图1 各组结肠上皮细胞中细菌鞭毛蛋白的表达(SABC，×400)

3 讨论

IBD 是一种病因和发病机制尚未完全明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，目前，肠道细菌的感染因素已经越来越受到重视。肠腔里存在大量种类繁多的细菌，这些细菌在正常情况下是营养肠道、促进肠道发育的必需细菌，肠黏膜先天固有的免疫系统对其免疫耐受，若打破这种免疫耐受，则会引起肠道炎症的发生［3-5］。运动型的细菌都有复杂的体表细胞器和鞭毛，通过感知外界信号，协调运动，以利于细菌的生长和生存。细菌鞭毛包括三个部分:类似于发动机功能的基部小体，扭转的钩状结构和空心的螺旋纤维(即鞭毛)［6］。鞭毛蛋白由鞭毛的中心管道分泌，在末端的螺旋结构中组装合成［7-8］。细菌鞭毛具有运动、黏附、侵袭黏膜的能力，并且能够释放毒力因子，所以是导致细菌致病的重要结构。

该研究结果显示，UC 患者血清中的细菌鞭毛蛋白抗体水平和肠上皮中细菌鞭毛蛋白的表达较对照组增高，UC 病情越重增高越明显，提示细菌鞭毛蛋白与UC 病情的轻重有关，细菌鞭毛蛋白可能是UC致病和炎症持续发生的重要因素。

总之，细菌鞭毛蛋白可能参与了UC 的发病和病情进展过程，为进一步了解UC 的病因及其治疗提供一种新的思路。

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