非发酵豆制品中合成着色剂测定方法的研究

王 鑫，黄韬睿

（1.四川省食品药品检验所，成都610097，2.四川烹饪高等专科学校，成都610100）

1 引言

为减低成本、赋予食品诱人的外观、稳定的色泽，某些生产者为追求经济利益，在食品生产过程中超范围或超量使用合成着色剂。为此，卫生部印发了“食品中可能违法添加的非食用物质名单”的通知，可加强对超范使用合成着色剂检测是十分必要的。

在国家标准GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》中对桔子汁、果味水、果子露汽水类，配制酒类，硬糖、蜜饯类，淀粉软糖等食品的试样前处理进行了规定，但没有非发酵豆制品的前处理方法，且也没有此类食品合适的色素提取方法。为此，笔者研究了样品超声处理时间，前处理温度，梯度洗脱条件对样品中合成着色剂提取率的影响，并对GB/T 5009.35-2003进行了改进，旨在建立适用于非发酵豆制品样品合成着色剂检测的HPLC法。

2 实验部分

2.1 材料与试剂

非发酵豆制品20批，市售。

柠檬黄，日落黄标准储备液（质量浓度均为0.50mg/ml）,中国计量科学研究院；甲醇，fisher公司，色谱纯；乙酸铵，天津市光复科技发展有限公司，优级纯；无水乙醇、氨水，均为市售分析纯；微孔滤膜（有机相，0.45 m）。

2.2 仪器

高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配Agilent 1100紫外检测器；超声波清洗器；超纯水机。

2.3 分析方法

2.3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02mol/L乙酸铵，梯度洗脱程序见表1；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：254nm。

表1 梯度μ洗脱程序

2.3.2 标准溶液的配制

精密量取柠檬黄、日落黄标准物质溶液各200μl，置5ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得混合标准溶液（各含20μg/ml）。

2.4 试样处理

取均质过的样品约5g，精密称定，置具塞离心管中，加无水乙醇-氨水（2ml浓氨水稀释至100ml）-水（70:20:10）20ml，超声处理10分钟，离心，分取上清液，再重复提取3次，每次10ml，合并上清液，蒸至约10ml，加聚酰胺粉（100-200目）0.7g，搅拌片刻，用20%柠檬酸调整pH值至4,60℃加热搅拌至充分吸附，G3垂熔漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤5次，每次10ml，用甲醇-甲酸混合溶液（6:4）洗涤5次，每次5ml，水洗至中性，用无水乙醇-氨水-水混合溶液解析5次，每次5ml，收集解析液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，置5ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，供HPLC分析。测得合成着色剂额标准图谱如图1所示。

3 结果与讨论

3.1 流动相中乙酸铵浓度及pH值的影响

为了得到更好的峰形，对流动相中乙酸铵的浓度及pH值进行了优化。分别选用0.02mol/L，0.05mol/L和0.1mol/L乙酸铵溶液作为流动相，结果表明浓度为0.02mol/L时，各物质的响应值最高。

比较了0.02mol/L乙酸铵在不调pH值和pH值分别为3.5，4，4.5（用乙酸调节）的情况。结果表明，0.02mol/L乙酸铵不调pH值，各物质峰形最好。

3.2 样品前处理方法的优化

一般用来提取合成着色剂的溶剂有乙腈、甲醇、碱性甲醇和乙醇。本研究发现，使用无水乙醇-氨水-水（70:20:10）作为提取溶剂效果很好，回收率也高。试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到4，加入聚酰胺粉才能很好的吸附合成着色剂。

3.3 加标回收率及最低检出限

在5.0g空白豆制品样品中添加适量合成着色剂标准混合溶液，平行添加3份，进行加标回收率试验，结果表明，3份平行样中，合成着色剂的平均回收率均大于90%；以信噪比S/N=3计算，日落黄、柠檬黄的最低检出限均为：0.02mg/kg。

3.4 实际样品分析

采用本方法对20批市售豆制品(包括豆腐、豆干、豆浆)中非食用色素进行了检测，结果均为阴性。

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