结核感染T细胞斑点试验在结核诊断中的应用分析

申 杰

衡阳市第三人民医院，湖南衡阳 421001

早期诊断和治疗是结核病防治措施中最重要的环节。 结核菌素试验(TST)虽是目前临床最常用于结核筛查的方法，但假阳性率高，且易受患者身体状况影响。结核感染T 细胞斑点试验(T SPOT.TB)是一项诊断结核的有效辅助手段，其敏感性和特异性均较高[1]。 我们采T SPOT.TB 和TST 2 种检测方法在疑患结核病人中进行对比研究，探讨两者在结核诊断中的敏感性和特异性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年12月—2012年3月该院住院及门诊疑诊或待排除结核的患者90 例和对照组—健康体检者35 名,年龄在20～25 岁,平均年龄23 岁。90 例患者中，男性47 例，女性43 例，平均年龄44 岁。 最后确诊结核患者共28 例 (31.1%)， 男性16 例(57.1%)，女性12 例(42.9%)，平均年龄49 岁。 28 例患者中15 例(53.6%)为肺结核，最后确诊均有影像学异常发现，痰涂片发现抗酸杆菌3 例；13 例(46.4%)为肺外结核，其中1 例胰头附近腹膜后淋巴结结核患者，CT 考虑为胰头癌， 最后通过开腹活检发现肉芽肿样病变明确诊断。 收集每位患者临床资料以及既往结核病史、结核接触史、家族史以及其他疾病和治疗史。

1.2 方法

1.2.1 T SPOT.TB 检测 根据T SPOT.TB 试剂盒 (Oxford Immunotec，Oxford，UK)操作。 肝素抗凝管采集5 mL 外周静脉血，密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。 在已包被抗体的微量板的4 个孔中，分别加人阳性对照植物血凝素，阴性对照细胞培养液，A 抗原早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)以及B 抗原滤液培养蛋白10(CFP-10)。 然后每孔加入外周血单个核细胞，一起置于培养箱温孵育16～20 h。 PBS 洗脱，再加入碱性磷酸酶标记的抗干扰素抗体孵育2 h，PBS 洗脱，显色，PBS 终止[2]。 采用放大镜人工计数斑点数。 阳性结果定义为：测量孔点数是阴性对照的2 倍以上或者比阴性对照多5 个点。

1.2.2 结核菌素实验 采用Mantoux 法，取PPD0.1 mL(含5 单位结核菌素) 行前臂尺侧皮内试验，48～72 h 后观察结果。 硬结直径≥10 mm 为TST 阳性结果。

1.2.3 结核诊断 综合考虑临床表现、放射学、病原学以及组织病理学、 对经验性抗痨治疗反应等最后作出肺结核及肺外结核的临床诊断。

1.2.4 评价指标 采用敏感性、特异性、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)、阴性似然比(LR-)等作为诊断试验的评价指标[3]。

1.3 统计方法

连续变量采用均数±标准差表示。 率的比较采用χ2检验或Fisher 确切概率法。 分析两种试验方法诊断效能的一致性用McNemar 检验，一致性强度采用K 系数。

2 结果

2.1 TST 与T SPOT.TB 诊断效能一致性分析

TST 与T SPOT.TB 诊断效能的一致性分析发现，两种检验方法虽然总体检测结果阳性率未有显著差异(P=0.377)，但一致性较弱。在结核患者和非结核患者中，T SPOT.TB 的诊断效能均显著高于TST(P=0.021，P=0.004)，两者一致性差。

2.2 肺结核和肺外结核患者TST 及T SPOT.TB 结果分析

T SPOT.TB 在肺结核患者中阳性率达100%(15/15)，与TST 在肺结核中的阳性率66.7%(10/15)相比，显著增高(P=0.042)。在肺外结核，T SPOT.TB 阳性率达76.9%(10/13)，虽明显高于TST 在肺外结核的阳性率53.8%(7/13)，但未达统计学意义(P=0.411)。 与T SPOT.TB 评价指标比较：TST 与T SPOT.TB 评价指标比较结果显示：T SPOT.TB 的敏感性、特异 性、PPV、NPV、 准确度等均显著高于TST (P<0.05)；T SPOT.TB 的LR+值明显高于TST，LR-值明显低于TST。 见表1。

表1 TST 与T SPOT.TB 检测评价指标（%）

2.3 38kD-IgG 和T SPOT-TB 试验的敏感性分别为73.1%和92.3%； 联合检测菌阳者和菌阴者的阳性率的均数为96.3%。38kD-IgG、T SPOT-TB 试验检测非结核对照人员的特异性分别为70.0%、94.0%,差异具有统计学意义(P<0.01)，联合检测的特异性为66.0%。 见表2。

表2 38kD-IgG 和T SPOT-TB 的试验结果的比较（%）

3 讨论

快速诊断和早期治疗结核是发展中国家结核防治的重点。由于我国卡介苗接种率高，TST 假阳性率高；且TST 易受机体免疫状态影响，在免疫功能受抑制人群中的低反应率限制了其应用。 结核病原学诊断是金标准，但受标本中细菌的数量影响大，且结核菌培养周期长，不利于早期快速诊断；因此，寻找新的快捷诊断方法对结核控制及预防至关重要。 1996年Mahairas 发现结核分支杆菌中存在一段名为“RDI”的基因序列，RDI 编码产生的CFP-10 以及ESAT-6 为结核分支杆菌所特有。

该研究显示，11 例TST 假阴性患者均与高龄、严重疾病状态或合并免疫抑制剂治疗、严重营养不良、结缔组织疾病等有关，说明了TST 对免疫抑制或免疫低下合并结核感染患者容易出现假阴性。 该研究中T SPOT.TB 假阴性患者未发现有接受免疫抑制治疗及合并结缔组织病、HIV 等，初步显示T SPOT.TB 受免疫状态影响较TST 少，更适用于免疫低下、接受免疫抑制剂治疗患者结核感染的检测。最近有研究显示，严重肺结核患者对RDI 肽段反应性低，对RDI 肽段反应性的高低与细菌抗原负荷相关，该研究中3 例T SPOT.TB 假阴性患者是否可归结于上述原因，尚须进一步探讨。

我国是结核高发大国，隐匿性结核发病率高，这不可避免会削弱T SPOT.TB 在诊断活动性肺结核时的特异性，但由于样本量限制，未对活动性结核人群进行分析。 有报道显示，在隐匿性肺结核发病率高的国家，T SPOT.TB 在诊断活动性肺结核的特异性仅47%(95%CI：36%～59%)，在我国具体情况还需深入研究，有关T SPOT.TB 斑点数与结核活动的相关性也需进一步探讨。

[1] 乐军,梁莉,李苏辉,等.酶联免疫斑点试验快速诊断结核分枝杆菌感染的临床应用价值[J].中华检验医学杂志,2010,29(11):1005-1008.

[2] 彭卫生,王英年,肖成志.新编结核病学[M].2 版.北京:中国医药出版社,2008:104.

[3] 全国结核病流行病学抽样调杏技术指导组， 全国结核病流行病学抽样调查办公室.2000年全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2002（24）：98-102.