海南黄灯笼椒与不同品种辣椒的辣椒素含量测定

李海龙，张俊清，赖伟勇，符乃光，谭银丰

黄灯笼椒(Capsicum chinense Jacquin)为茄科辣椒属多年生草本植物，起源于南美亚马逊流域，成熟果实亮黄色，又叫黄帝椒;其味极辣并有奇香，营养丰富，是海南特有的地方珍稀辣椒品种，在海南有着悠久的栽培和食用历史。黄灯笼椒气味芳香，能增加人的食欲，开发出的黄灯笼辣椒酱也是目前海南最热销的旅游产品之一，是海南最具开发潜力得特色农作物之一［1，2］。由于黄灯笼辣椒的栽培技术要求较高，其抗病毒病和疫病的能力较差，使得黄灯笼椒的种植面积、产量和品质都明显减少，海南黄灯笼辣椒的产业发展受到了很大影响［2，3］。黄灯笼辣椒中的辣味成分也主要是辣椒素类物质，辣椒素类物质不仅镇痛止痒、调节食欲及抗炎消肿，还在医药工业里具有广泛应用，在食品添加剂和生物农药等方面也具有广阔的开发前景，因此，高含量辣椒素的辣椒品种也具有较高的附加值［4］。国内有关黄灯笼椒的研究，也只有很少量报道，关于海南黄灯笼椒辣椒素含量方面的还未见报道。本文将进行海南黄灯笼椒辣椒素含量测定，并与海南红米椒、海南朝天椒等一些特有辣椒品种的辣椒素含量进行比较，为海南黄灯笼辣椒的综合开发利用提供依据，也为海南黄灯笼辣椒更好的进行质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters515液相色谱系统(Waters 515泵，2996PDA检测器)，美国Pall公司CascadeⅨ超纯水器，SK5200LHC型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。

1.2 试药 海南黄灯笼辣椒、海南米辣椒样品分别购买于海口、陵水及万宁菜市场的新鲜辣椒，海南杂交种黄灯笼椒购于海口市老城农科院种植基地的新鲜辣椒;四川辣椒和贵州辣椒样品购买于海口菜市场;辣椒素对照品(中国药品生物制品检定所)、甲醇(色谱纯)、95%乙醇(分析纯)，超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(体积比70∶30);流速:1.0 mL/min;UV检测波长为230 nm;柱温:30℃;进样量:20μL;此条件下，样品中辣椒素峰与杂质峰分离度良好，见图 1、2。

图1 辣椒素对照品HPLC图谱

图2 海南黄灯笼椒HPLC图谱

2.2 对照品溶液的制备

取辣椒素对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品储备溶液。精密量取1 mL对照品储备溶液于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，即得浓度为0.1 mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

将洗净后的辣椒去梗后，于50℃干燥6 h，粉碎，过60目筛，置于干燥器中保存备用。称取辣椒粉约2.0 g，置于碘量瓶中，再加入精密量取的70%乙醇溶液100 mL，称重，超声处理60 min后，冷却，称重后，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，即得供试品溶液。

2.4 线性关系考察

取2.2对照品溶液，精密量取0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，加甲醇定容至 10 mL，按上述色谱条件，重复进样2次，测定辣椒素峰面积，以峰面积平均值和辣椒素浓度进行回归处理，得回归方程:Y=15077X+36677，r=0.9990。结果表明，辣椒素在2.0μg/mL～20.0μg/mL范围内呈线性关系。

2.5 精密度实验

取2.2对照品溶液，连续进样6次，测定辣椒素峰面积，RSD=0.66%。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验

取海南黄灯笼椒粉末，按2.3项下的方法制备供试品溶液，分别于 0、4、8、16、24、48 h 各进样 1次，测定辣椒素峰面积，RSD=1.3%。表明供试品溶液在48 h之内稳定。

2.7 重复性实验

取海南黄灯笼椒粉末6份，按2.3项下的方法制备供试品溶液，测定辣椒素平均含量为0.7344%，，RSD=1.7%。表明本法有良好的重复性。

2.8 加样回收实验

取海南黄灯笼椒粉末约1 g，精密称定，按2.3项下的方法制备供试品溶液，测定其辣椒素浓度。而后精密量取9份供试品溶液1 mL分置于标号1～9号的10 mL容量瓶中，精密加入1.0 mL对照品溶液于1～3号容量瓶，精密加入1.5 mL对照品溶液于4～6号容量瓶，精密加入2.0 mL对照品溶液于7～9号容量瓶。按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 辣椒素加样回收率试验测定结果(n=9)

2.9 样品的测定结果

取各种辣椒样品，分别按2.3项下的方法制备供试品溶液。按上述色谱条件，用外标法以峰面积计算，测定个辣椒样品中辣椒素的含量。结果见表2。

表2 不同品种、不同产地辣椒辣椒素含量测定结果

3 讨论

辣椒素在高温下不稳定，选取合适的辣椒素提取方法非常必要。综合分析文献报道［5－7］的辣椒素的提取制备方面信息，本文选用以70%乙醇做溶剂，超声处理60 min的超声辅助法对辣椒素进行提取，避免高温处理的损失。按此方法提取制备的供试品溶液，其辣椒素峰的峰型好，与相邻色谱峰也有良好的分离度，杂质峰也少。

本文选用甲醇－水(70∶30)做流动相的HPLC法对辣椒素含量进行测定，该法分离效果好、出峰时间适中，其稳定性、重现性及精密度都很好，其平均回收率100.8%(n=9)，这些说明本方法在辣椒的处理过程中辣椒素损失少，适合辣椒中辣椒素含量的测定，并且流动相组成简单。

从测定的辣椒样品结果(表2)可看到，海南黄灯笼辣椒辣椒素含量高达8.37 mg/g，比文献报道［8］的口感极辣的四川野山椒的8.02 mg/g还高。海口市售黄灯椒椒的辣椒素含量最高，海南小红米椒及朝天椒次之，四川辣椒、贵州辣椒等较少。同时，海口市售黄灯笼椒的辣椒素含量是海南小红米椒的3倍多，是贵州辣椒和四川辣椒的13倍多。海口市售黄灯笼椒也比万宁产和杂交种黄灯笼椒的辣椒素含量高的多。不同品种、不同产地辣椒的辣椒素含量变化幅度很大，存在着广泛的遗传和变异。以上这些说明辣椒中辣椒素含量的高低与辣椒品种、种植环境密切有关。海南黄灯笼辣椒这一地方特有的珍稀辣椒品种口感极辣、风味独特，具有很高的综合开发价值。有关海南黄灯笼辣椒的不同成熟期的辣椒素含量变化，辣椒果实不同部位的辣椒素含量等内容也具有重要的意义，并有待于进一步的研究。

［1］ 黄海波，淡明，郭安平，等.黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生［J］.热带农业科学，2006，26(3):18 －21.

［2］ 高芳华，武壮生，邓长智，等.海南黄灯笼辣椒高产栽培技术［J］.辣椒杂志，2009，2:18 －20.

［3］ 王健华，吉训聪.海南黄灯笼辣椒2种病毒病的电镜诊断［J］.热带农业科学，2003，23(6):11 －14.

［4］ 龙笛笛，成善汉，王玲，等.海南黄灯笼椒辣椒素合成酶基因克隆与表达研究［J］.中国农学通报，2010，26(20):61 －64.

［5］ 樊钰虎，易龙，丁伟等.辣椒中辣椒碱提取工艺条件的研究［J］.西南大学学报:自然科学版，2008，31(1):64 －67.

［6］ 韩晓岚，胡云峰，赵学志，等.辣椒中辣椒素、二氢辣椒素的超声波提取及其含量测定［J］.食品科技，2009，34(10):179－183.

［7］ 高艺，钟世安，周春山，等.高效液相色谱法测定辣椒干中辣椒素的含量［J］.天然产物研究与开发，2005，17(6):797 －799.

［8］ 张海利，李焕秀，刘为国，等.高效液相色谱法测定不同品种辣椒中的辣椒素［J］.四川农业大学学报，2008，26(2):131－134.