自体黑素细胞移植治疗不同临床类型白癜风患者的疗效评价

姚 蕾，钟淑霞，李珊山，宋 洋，郭静微，谢晓蕾，艾 鹤

（吉林大学第一医院皮肤科，吉林 长春130021）

自体黑素细胞移植治疗不同临床类型白癜风患者的疗效评价

Evaluation on curative effect of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different clinical types of vitiligo

姚 蕾，钟淑霞，李珊山，宋 洋，郭静微，谢晓蕾，艾 鹤

（吉林大学第一医院皮肤科，吉林 长春130021）

目的：评估自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风的疗效，并探讨不同临床分型、不同移植部位和不同病程白癜风患者的疗效差别，为该技术在临床的应用和推广提供参考。方法：选择稳定时间均≥6个月、对药物和光疗反应不佳的白癜风患者34例，其中散发型12例，局限型13例，节段型9例；面颈发病17例，四肢及躯干发病12例，肢端发病5例。34例患者均采用自体黑素细胞体外培养移植法治疗，评价患者移植区复色面积比率及有无副作用 （疤痕形成、创面感染和原白斑扩大）发生。结果：34例患者痊愈17例 （50.00%），显效10例 （79.41%），有效6例 （97.06%），无效1例 （2.94%）。散发型移植者疗效较局限型和节段型差 （P＝0.008）；肢端移植者效果较面颈、躯干和四肢移植者差 （P＝0.025）；病程长短对疗效无影响 （P＝1.000）。结论：自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风效果良好，不同移植部位和临床分型的白癜风患者临床疗效不同。

白癜风；黑素细胞；移植；疗效

白癜风是皮肤科常见的疑难病，严重时可以导致毁容，对患者的身心危害较大。白癜风发病的关键环节是表皮黑素细胞缺失导致白斑形成。如果白斑处黑素细胞完全丧失，则采用传统的药物和物理治疗方法难以复色，此时需要外科治疗将自体黑素细胞移入白斑区域。外科疗法主要包括自体表皮片移植、自体表皮黑素细胞悬液移植和自体黑素细胞体外培养移植等方法［1］。自体黑素细胞体外培养移植通过负压发疱取皮法取少量正常表皮，在体外对黑素细胞进行分离培养，并扩增至足够数量后移植于白斑区。由于仅需较少的表皮即可培养出大量自体黑素细胞，因此可以最大限度降低供区取表皮片的数量［2］。该法不受受皮区形状和皮肤弧度的限制，术后复色均匀，具有见效快、疗效高和疗程短等特点。目前国外仅有少数研究［3－5］分析了不同临床分型、部位和病程的白癜风患者应用自体黑素细胞移植疗法疗效的差别，但国内尚未见该方面的报道。本研究探讨自体黑色素细胞移植治疗不同临床分型、不同部位和不同病程白癜风患者的疗效差别，旨在为该技术在临床的应用和推广提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年10月—2011年2月在本科门诊就诊的白癜风患者34例。入选标准：①病情稳定时间≥6个月；②对药物和光疗反应不佳；③无其他内科疾病。排除标准：①妊娠期及哺乳期；②瘢痕体质患者。34例患者中男性15例，女性19例；年龄5～48岁，平均年龄 （23.76±8.05）岁；病程：≤1年者15例，2～5年者9例，＞5年者10例；临床类型：散发型者12例，局限型者13例，节段型者9例；面颈部17例，四肢及躯干12例，肢端5例。

1.2 主要试剂

F12培养液、0.25%胰蛋白酶和胎牛血清购自Gibco公司；EDTA、G－418、3－异丁基－1－甲基黄嘌呤 （3－isobuty－1－methylxanthine，IBMX） 和 碱 性成纤维细胞生长因子 （basic fibroblast growth factor，b－FGF）购自Sigma公司；黑素细胞培养使用 Hu16培养基［3］。

1.3 黑素细胞培养及移植方法

1.3.1 术前准备 详细记录患者信息，与患者或患者家属进行治疗前沟通，使其对整个治疗过程有所了解后，签知情同意书并拍照。该研究经本院伦理委员会讨论同意。

1.3.2 黑素细胞的分离培养 采用凸凹型吸盘，75%酒精消毒供皮区，用BFY－IIIA皮肤分离仪在供皮区进行负压吸引发疱，工作负压为40～60kPa，40～60min后发疱完成，用碘伏和75%酒精消毒水疱区皮肤，用眼科剪沿疱壁边缘剪下疱壁，于37℃、0.25%胰酶消化10min，立体显微镜下刮下表皮细胞，将细胞重悬于Hank’s液中，用过滤器过滤后低速离心5min，弃上清，置于含Hu16培养液的培养瓶中培养3d，加入G－418（终浓度为100mg·L－1）以除去杂细胞，1周后即可得到高纯度的黑素细胞 （图1，见插页四）。当黑素细胞生长至80%融合时传代 （图2，见插页四）。每次传代和移植时均计数黑素细胞、测定黑素含量并计算黑素细胞倍增时间［6］，以评估黑素细胞生长情况及其功能。移植前用0.25%胰酶－EDTA消化黑素细胞后分置2个离心管，其中4／5细胞用于移植，1／5细胞继续传代。计数用于移植的黑素细胞，离心后弃上清，加入F12培养液制成黑素细胞悬液备用。

1.3.3 白斑区去表皮 白斑区用5%利多卡因乳膏局麻60min后，常规消毒，采用超脉冲CO2激光进行磨削，磨削后即刻用无菌生理盐水棉签擦拭去除表皮。将制备好的黑素细胞悬液均匀铺种于移植区创面，细胞数量控制在 （6～10）×104cm－2［2］。铺种后用油纱覆盖，油纱上面覆盖培养液浸湿的无菌纱布及干纱布。包扎完毕后患者静卧至少1h。

1.4 疗效评价方法

每次移植前和移植结束后6个月复诊，由同一工作人员于同一地点用同一数码相机进行拍照，记录治疗前后白斑面积，评价移植区复色面积比率和有无副作用发生。副作用包括疤痕形成、创面感染和原白斑扩大。疗效评价标准［7］：痊愈，移植区复色面积为90%～100%；显效，复色面积达50%～89%；有效，复色面积达20%～49%；无效，白斑区复色面积＜20%。有效率＝ （痊愈例数＋显效例数＋有效例数）／总例数×100%；显效率＝ （痊愈例数＋显效例数）／总例数×100%；痊愈率＝痊愈例数／总例数×100%。

1.5 统计学分析

采用SPSS 13.0软件进行数据分析。不同临床分型、不同移植部位和不同病程患者移植后显效率比较采用卡方检验，不满足卡方检验条件时使用Fisher确切概率法。

2 结 果

移植面积为2～65cm2，平均移植面积为（16.66±14.98）cm2。34例患者痊愈17例，显效10例，有效6例，无效1例，痊愈率为50%，显效率为79.41%，有效率为97.06%。34例患者无治疗副作用出现。不同临床分型白癜风患者疗效：12例散发型患者，痊愈2例，显效4例，有效5例，无效1例，显效率为50%；13例局限型患者，痊愈10例，显效2例，有效1例，无效0例，显效率为92.31%；9例节段型患者，痊愈5例，显效4例，有效及无效均为0例，显效率为100%。不同临床分型白癜风患者疗效差异具有统计学意义（P＝0.008）。不同移植部位患者疗效：面颈部患者共17例，痊愈12例，显效4例，有效1例，无效0例，显效率为94.12%；四肢及躯干患者共12例，痊愈5例，显效4例，有效2例，无效1例，显效率为75.0%；肢端部位患者5例，痊愈0例，显效2例，有效3例，无效0例，显效率为40%。不同移植部位患者疗效差异具有统计学意义（P＝0.025）。不同病程白癜风患者疗效：≤1年者15例，痊愈9例，显效3例，有效3例，无效0例，显效率为80.0%；2～5年者9例，痊愈3例，显效4例，有效2例，无效0例，显效率为77.78%；＞5年者10例，痊愈5例，显效3例，有效1例，无效1例，显效率为80.0%。不同病程白癜风患者疗效差异无统计学意义 （P＝1.000）。见表1～3。

表1 不同临床分型白癜风患者自体黑素细胞培养移植疗效的比较Tab.1 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different clinical types of vitiligo

表2 不同移植部位白癜风患者自体黑素细胞培养移植疗效的比较Tab.2 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with vitiligo at different transplantation locations

表3 不同病程白癜风患者自体黑素细胞培养移植疗效比较Tab.3 Comparison of the curative effects of autologous melanocyte transplantation in treatment of patients with different disease durations of vitiligo

3 讨 论

对于稳定期白癜风，当非外科疗法如药物和光疗效果不理想时，可选择外科疗法。自体黑素细胞体外培养可获得足够数量的黑素细胞，受皮与供皮的比例更大［8］，故适用于治疗面积较大的顽固性稳定期白癜风。本研究结果显示：自体黑素细胞移植治疗白癜风效果良好，移植有效率达97.06%，这与Hong等［4］的报道近似。本研究结果表明：白癜风临床类型和白斑部位可影响自体黑素细胞移植的疗效，其中局限型与节段型白癜风治疗效果要好于散发型，与以往报道［4－5］一致。面、颈部的白斑治疗效果最好，其次为躯干及四肢，肢端尤其是手指等活动度大的部位治疗效果相对较差，但Olsson等［5］研究显示：躯干及四肢效果好于面颈部，而膝部、肘部等效果最差；朱美财等［9］研究发现：下肢、躯干、面部白癜风治疗效果较好，而颈部、眼睑、嘴唇相对较差，但未进行统计学分析。本研究结果显示：白癜风病程长短不影响自体黑素细胞移植的效果，而Olsson等［5］认为：稳定期白癜风病程越长移植效果越差，其差异尚需加大样本量和延长随访时间以进一步研究。

自体黑素细胞体外培养移植疗法的技术关键在于体外培养的黑素细胞的质量和稳定性。该法最早由Lerner等［10］于1987年首次报道，国内最早则由徐小珂等［11］于1996年报道，但二者培养液中均含强有丝分裂促进剂佛波酯，不排除有致癌的危险性［9］。朱美财等［9］研究中所用的 M2培养液为含重组bFGF的DMEM／F12，成分固定不易调整。而本研 究 与 Hong 等［4，7－8，12］研 究 均 使 用 Hu16 培 养液，其添加物质主要为bFGF、IBMX和胎牛血清，无致突变成分，且在培养过程中可根据黑素细胞的生长情况和产黑素能力调整培养液中成分用量，使体外培养的黑素细胞状态达到最佳。徐小珂等［11］报道的方法为：一次取材可复色25cm2，对于白斑皮损面积大的患者则需多次取材。而使用Hu16培养液培养的黑素细胞可传至10余代仍保持良好的增殖能力，每次移植时留取1／5细胞继续传代，该法具有一次取材、多次移植的优势，可减少患者多次取皮的痛苦。本研究结果显示：自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风技术具有见效快、复色均匀等优势，值得临床推广。

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R758.41

B

1671－587Ⅹ（2012）06－1187－04

2012－03－13

吉林省产业技术研究与开发专项项目资助课题 （3J110J403428）；吉林省科技发展计划项目资助课题（20080740）

姚 蕾 （1983－），女，黑龙江省大庆市人，医师，医学硕士，主要从事白癜风的发病机理及治疗的研究。

李珊山 （Tel：0431－88782615，E－mail：shansalee＠163.com）