接触低浓度苯系物工人血细胞计数和血浆中P16／CDKN2A蛋白含量的变化及其意义

2012-12-06于碧鲲金永龙杜忠君

吉林大学学报（医学版） 2012年5期

于碧鲲，金永龙，国佳，李鹏，杜忠君，刘颖

（1.广东省深圳市龙岗区疾病预防控制中心职业卫生科，广东深圳510182；2.吉林大学第二医院肿瘤生物治疗中心，吉林长春130041；3.吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室，吉林长春130021）

于碧鲲1，金永龙2，国佳2，李鹏3，杜忠君3，刘颖3

目的：探讨在低于职业接触限值情况下，长期接触苯系物对工人血细胞计数和血浆中P16／CDKN2A蛋白含量的影响情况，为更好地进行苯系物污染的监测和监督工作提供理论基础。方法：选择深圳市某印刷企业从事印刷作业工龄超过2年的50名工人作为接触组，选择该企业不接触苯系物的50名行政和后勤工作人员作为对照组。对2组人员进行血常规检测；ELISA法检测接触组和对照组人员血浆中P16／CDKN2A蛋白含量；同时测定接触组工作环境中苯系物的浓度。结果：接触组和对照组工作环境中苯系物浓度均低于职业接触限值；接触组和对照组工人白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数均在正常范围内，2组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；接触组工人血浆P16／CDKN2A蛋白含量均值低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：在低于职业接触限制情况下，长期接触低浓度苯系物对工人血细胞计数和血浆中P16／CDKN2A蛋白含量无明显影响。

苯系物；P16／CDKN2A蛋白；血细胞计数

苯、甲苯和二甲苯常通称为“苯系物”，存在于多种作业环境中，印刷业使用的油墨常采用含苯、甲苯和二甲苯等的溶剂作为稀释剂，因此印刷作业工人在工作过程中会接触到苯系物并可能引起潜在的危害［1－2］。苯系物的主要职业危害是引起造血系统发生病变，长期接触可以引起慢性中毒，早期常表现为白细胞减少为主的血细胞计数改变。此外，研究［3－6］表明：P16／CDKN2A 与苯中毒引起的白血病发病关系密切。随着卫生监督部门对苯系物污染监管力度的加大，多数企业污染水平均在职业接触限值之下，但是迄今为止仍有有关低剂量苯系物接触后对工人健康产生危害的报道［7－9］，因此，本文作者以深圳市的某印刷企业作为研究对象，观察在低于职业接触限值情况下对作业工人血细胞计数及血浆中P16／CDKN2A蛋白含量的影响，探讨在该接触水平的情况下对工人健康的影响，为更好地进行苯系物污染的监测和监督工作提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 研究对象于2011年6月选择深圳市某印刷企业的从事印刷作业的50名工人作为接触组，包括印刷、丝印和过胶岗位，工龄均超过2年，其中男性31名，女性19名，年龄21～46岁，年龄中位数为31岁，工龄2～19年，工龄中位数为6年；选择该企业不接触苯系物的行政和后勤工作人员50名作为对照组，包括人事部、生控部、收发部、财务部、订装部、采购部、统计部和报关部，其中男性25名，女性25名，年龄20～43岁，年龄中位数为29岁，工龄1～18年，工龄中位数为7年。接触组和对照组人员在年龄、性别、工龄构成方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以上研究对象近2周内均无发热和感冒症状，不患有可能影响研究结果的疾病，如肿瘤、糖尿病和结核病等，未长期服用特殊的药物和保健品。

1.2 主要仪器及试剂全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞公司），GC2010型气相色谱仪（日本岛津公司），TWA－300型低流量空气采样器（江苏省建湖电子仪器仪表厂），人P16／CDKN2A ELISA检测试剂盒（美国Rapidbio公司），酶标仪（美国Bio Tek公司）。

1.3 作业环境监测按照GBZ 159－2004《工作场所空气中有毒物质监测采样规范》和GBZ／T160.42－2004《工作场所空气中有毒物质测定芳香烃类化合物》中规定方法，对作业环境含苯系物的6个工作岗位和对照组人员的9个办公区域进行空气采样和测定，每种毒物均采样3份，用空气采样器（活性炭管法）采样，采用溶剂解吸－气相色谱法分析。

1.4 标本的收集接触组和对照组人员每人采集静脉血3 m L，分2个抗凝管存放，其中1 m L用于血常规检测血细胞计数变化，另外2 m L血液样本当日3000 r·min－1离心30 min分离血浆，置于－20℃冰箱保存备测。

1.5 血浆中P16蛋白含量的检测采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测，具体操作步骤按照试剂盒方法进行：以P16／CDKN2A抗体包被酶标板，设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL，空白孔不加，除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60 min，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次，每孔加入底物A和底物B各50μL，37℃避光孵育15 min，每孔加入终止液50μL，15 min内，在450 nm波长处测定各孔的吸光度（A）值。在Excel工作表中，以标准品浓度作为横坐标，对应A值作为纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

1.6 统计学分析应用SPSS 11.5统计分析软件对数据进行统计学处理，年龄和工龄差异比较采用秩和检验，性别差异比较采用χ2检验，血常规结果组间比较采用单因素方差分析，血浆P16／CDKN2A蛋白含量组间比较采用独立样本t检验。

2 结果

2.1 接触组和对照组工作岗位环境监测结果苯系物监测结果显示：接触组各工作岗位的苯、甲苯和二甲苯浓度范围均在短时间接触容许浓度（PC－STEL）之下，合格率100%，其中苯和二甲苯浓度低于仪器的最低检出限；对照组各工作区域的苯、甲苯和二甲苯浓度均低于仪器的最低检出限，见表1。

表1 深圳市某印刷厂工作岗位苯系物检测结果Tab.1 The detection results of concentrations of benzene series in one printing plant in Shenzhen city

2.2 接触组与对照组人员血常规检测结果接触组与对照组人员的白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）和血小板计数（PLT）均在正常范围，接触组的 WBC、RBC和PLT值低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；接触组HGB值高于对照组，与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 深圳市某印刷厂苯系物接触组与对照组人员血常规检查结果Tab.2 The results of blood routine examination of benzene series of the subjects in exposed group and control group of one printing plant in Shenzhen city （n＝50，±s）

Group WBC（×109 L－1） RBC（×1012 L－1） HGB［ρB／（g·L－1）］ PLT（×109 L－1）Exposed 5.65±1.20 5.15±0.57 141.76±13.72 211.44±42.17 Control 5.76±0.75 5.18±0.81 135.92±17.10 220.42±53.92

2.3 接触组与对照组人员血浆中P16／CDKN2A蛋白含量检测结果接触组血浆P16／CDKN2A蛋白含量为（13.18±4.83）ng·L－1，低于对照组的（13.90±4.69）ng·L－1，但与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

在职业活动中，苯及其同系物主要以蒸汽形态经呼吸道进入人体，少量可经皮肤吸收，苯系物的慢性毒作用主要表现为对造血系统的损伤，如引起白细胞和血小板减少等，另外还可对神经系统产生影响，以及对皮肤黏膜的刺激作用［10］。国内也有关于长期低剂量接触苯系物导致工人白细胞发生减少及对造血系统产生影响的报道［7－9］，这些报道的苯系物暴露水平均在职业接触限值之下，但是暴露水平要高于本研究。本研究结果显示：接触组与对照组人员血中WBC、RBC、HGB和PLT均在正常范围，接触组人员血中WBC、RBC和PLT值低于对照组，与对照组比较差异无统计学意义；接触组人员HGB值高于对照组，与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），说明在本研究的暴露情况下，苯系物接触对血液系统无明显的影响。

P16是细胞周期素依赖性蛋白激酶2A（cyclin－dependent kinase inhibitor－2A，CDKN2A）的别名，P16／CDKN2A基因位于9号染色体短臂21区域，属于细胞周期素依赖性激酶4抑制物（inhibitor of CDK4，INK4）家族成员，其基因产物P16／CDKN2A蛋白能负向调控细胞周期进程，可以与细胞周期蛋白D竞争CDK4和CDK6，从而阻止视网膜母细胞瘤蛋白的磷酸化并且阻止细胞进入 S 期，使细胞发生 G1期阻滞［11］。P16／CDKN2A与苯中毒和白血病的发病关系密切，在苯中毒和白血病患者中可以观察到P16／CDKN2A基因甲基化水平增高的现象，而引起P16／CDKN2A基因转录减少，进而可能导致P16／CDKN2A蛋白表达减少，使进入G1期的细胞增多，导致细胞异常增殖［6，12］。本研究以工人血浆中P16／CDKN2A蛋白含量为观察指标，探讨长期低剂量苯系物接触后可能产生的毒性作用，结果显示：接触组工人血浆中P16／CDKN2A蛋白含量低于对照组，但差异无统计学意义，结果表明：在本研究的接触情况下，对工人血浆中P16／CDKN2A蛋白含量无明显影响。

本研究所选的研究对象为同一间企业，苯系物的污染控制较好，其中苯和二甲苯浓度均远远低于职业接触限值，由于不同企业的情况不同，虽多数企业均能达到合格标准，但是苯系物的浓度存在差别，而且苯、甲苯和二甲苯的混合比例也不尽相同，因此为更好地了解长期低剂量苯系物接触可能产生的健康危害今后还需要扩大样本量和选择更为敏感的指标进行观察和研究。

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Changes of blood cell count and P16／CDKN2A protein content in plasma of workers exposed to low concentrations of benzene series and significance

YU Bi－kun1，JIN Yong－long2，GUO Jia2，LI Peng3，DU Zhong－jun3，LIU Ying3
（1.Department of Occupational Health，Shenzhen Longgang District Center for Disease Control ＆Prevention，Shenzhen 510182，China；2.Center of Biological Therapy for Tumor，Second Hospital，Jilin University，Changchun 130041，China；3.Department of Health Toxicology，School of Public Health，Jilin University，Changchun 130021，China）

Objective Below the national health standards，to observe the changes of the blood cell count and P16／CDKN2A protein content in plasma of workers who long－term exposed to benzene series，and to provide theoretical basis for better monitoring and supervision in benzene series pollution.Methods 50 workers which worked on operating environment more than 2 years were selected as exposed group in one printing plant in Shenzhen，and 50 administrative and logistic staffs in the same printing plant were used as control group.The inspections were taken on white blood cell count，red blood cell count，hemoglobin content and platelet count in two groups by blood routine examination.The plasma P16／CDKN2A protein content in two groups were detected by ELISA assay.The concentrations of benzene，toluene and xylene in exposed group in the operating and non－operating environment were determined at the same time.Results The benzene，toluene and xylene levels in exposed and control groups were lower than the national health standards.The white blood cell count，red blood cell counts，hemoglobin contents and platelet counts in two groups were all in normal range and had no significant differences between two groups（P＞0.05）.The average content of plasma P16／CDKN2A protein of the workers in the exposed group was lower than that in control group，but there was no significant difference between two groups（P＞0.05）.Conclusion In the exposure condition，long－term exposure to low concentrations of benzene series has no significant effects on blood cell count and plasma P16／CDKN2A protein content of the workers.

benzene series；P16／CDKN2A protein；blood cell count

R994.6

1671－587Ⅹ（2012）05－0965－04

2012－02－21

国家自然科学基金青年基金资助课题（30700672）；广东省深圳市龙岗区科技局基金资助课题（YLL2010016）；吉林大学基本科研业务费资助项目（201103080）

于碧鲲（1979－），男，黑龙江省大庆市人，主治医师，医学硕士，主要从事劳动卫生与职业病研究。

刘颖（Tel：0431－85619133，E－mail：yliu99＠jlu.edu.cn）