莓叶委陵菜醇提物急性毒性实验研究

闵运江，陈澍潭

（1.皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安237012；2.安徽省植物生物技术实训中心，安徽 六安237012）

莓叶委陵菜（Potentilla fragarioides L.），为蔷薇科（Rosaceae）委陵菜属（Potentilla）多年生草本植物［1-2］，别名雉子筵、毛猴子、菜飘子、满山红等。其根极多；茎直立或倾斜，簇生丛状，茎叶有长柔毛；基生叶为成丛生状，奇数羽状复叶，叶柄有开展的疏长柔毛，小叶5～9枚，上部小叶较下部的大。顶生伞房状聚伞花序，花多，黄色；瘦果小，近肾形。常生长于草地、沟边、灌丛及疏林下。

莓叶委陵菜主产江苏、浙江、江西、山东及安徽等省。其植株中的生物活性成分含量丰富，其中总黄酮含量，显著高于已被广泛研究的银杏叶中黄酮含量。据初步研究，安徽产委陵菜属植物各种类的全草都含黄酮类、三萜类、有机酸等［3］，均可药用，已有报道的委陵菜（Potentilla chinensis Ser.）、三叶委陵菜（Potentilla freyniana Bornm.）等三萜类成分含量较高，有清热解毒、凉血止血等功能［4-5］。黄酮类、三萜类等化合物具有较强生物活性，能防治血管硬化和降低心肌耗氧量等；也是天然抗氧化剂，能增强机体免疫力、抗衰老、抗癌防癌等，在食品和医药等领域具有广泛的应用［6-10］。有研究表明，三萜类有显著抗病毒活性［11-12］。此外，莓叶委陵菜因其花色鲜黄而艳丽，繁殖力强而在城市园林绿化中常被用作地被植物。而对于莓叶委陵菜的乙醇提取物急性毒性研究尚未见报道。本研究即是用新制备的莓叶委陵菜乙醇提取物给实验小鼠灌胃，观察其急性毒性反应，从而为莓叶委陵菜的药用开发利用提供初步的安全性参考数据。

1 材料、方法

1.1 实验动物

试验所用小鼠为南京医科大学实验动物中心提供的昆明种小鼠，许可证号：SCXK（苏）2002-0031，雌雄各占50%，体重20±2g。正式试验前先适应性饲养1周。

1.2 仪器、试剂

TU-1201紫外-可见分光光度计，HH—4恒温水浴锅，40目标准检验筛，RE-52D旋转蒸发器，101AS-2型电热鼓风干燥箱，超声波破碎仪，加热回流装置；乙醇，乙醚，等；试剂均为AR级。

1.3 莓叶委陵菜乙醇提取物的制备

1.3.1 莓叶委陵菜的处理

新鲜莓叶委陵菜根采于六安市小华山荒地林缘，新鲜材料先经105℃杀青15min，70℃烘至近干，剪成2～3mm小段，再用103℃烘干。干样品磨成粉末，过40目筛后的粉末于103℃烘至恒重，干燥器中冷却，备用。

1.3.2 脱脂

Soxhlet提取法，45℃下无水乙醚脱脂约20h，待充分除去样品中脂类和脂溶性色素后取出样品滤纸包，吹干乙醚，103℃烘干，备用。

1.3.3 浸提

脱脂后的材料，置于三角烧瓶中，捣碎并加入80%乙醇（V／V），80℃水浴中回流浸提10次，每次浸提2h，第一次浸提固液比为1∶5（g∶ml），其后各次浸提的固液比为1∶3，最后一次浸提的乙醇浸提液几乎为无色，表明已浸提充分。合并10次浸提液于分液漏斗中，加适量石油醚，充分震荡，静置，弃去石油醚层，以进行二次脱脂，收集脱脂处理后的含粗黄酮和三萜类物质的提取液，用旋转蒸发器减压浓缩，至一定体积后取出，移于烧杯内。

1.3.4 制备乙醇提取物

将上述烧杯中的浸提液，在90℃水浴中加热浓缩，至注射器能抽动的最大浓度，即为实验用莓叶委陵菜乙醇提取物。换算该乙醇提取物，每ml提取物相当于3.6g新鲜莓叶委陵菜原料。依据文献方法［13］，测定提取物中黄酮类和三萜类的含量，提取物中含三萜类和黄酮类总量为36.0mg／ml。

1.4 动物实验

依文献方法［14-15］，选取体重20±2g的小鼠20只，随机分为2组，每组雌雄各半，分别为给药组和空白对照组。给药组小鼠分别在头、背、尾部用黑色记号笔标注，记录为1～10号。灌胃前禁食不禁水16 h，按每kg小鼠体重给予莓叶委陵菜乙醇提取物20 ml剂量灌胃；灌胃后，连续观察小鼠7d，记录其活动、饮食、毛发、大小便和死亡情况等，解剖观察死亡小鼠的心、肺、肝、肾、脾等主要器官的组织变化；未死亡的小鼠，实验第8d称其体重后处死，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等主要器官的组织变化。

2 结果

2.1 莓叶委陵菜乙醇提取物对小鼠体征的影响

小鼠给予莓叶委陵菜乙醇提取物21.50g／kg灌胃后10min内，与对照组小鼠比较，均表现为活动减少，精神不佳；10min后，小鼠活动恢复正常，应为灌胃刺激的影响所致；连续观察7d，存活的受试小鼠的饮食、毛色、活动及大小便均正常，眼、鼻、口腔未见异常分泌物，无不良症状出现。

2.2 给药前后小鼠体重的变化

各组小鼠的体重及其变化情况见表1。

由表1可见，给药组小鼠体重平均增重6.6g，而空白对照组小白鼠的体重增重7.1g，考虑到灌胃影响，尤其是灌胃初期对其食欲的影响，可认为药物对其体重增重无显著影响。

表1 莓叶委陵菜醇提物对试验小鼠体重的影响

2.3 小鼠死亡状况

灌胃后7d，给药组小鼠有一只在给药后1min内死亡，经解剖后发现是由于灌胃时注射器针头插进了胸腔里，导致胸腔破裂等机械性致死，属于操作不当致死，其余试验小鼠均正常，未出现给药后死亡的情况。

2.4 对小鼠心、肝、肺、肾、脾等脏器的影响

处死所有试验后的小鼠，解剖各组实验小鼠心、肺、肝、肾、胃、脾等主要脏器，均未见异常病变。

由以上试验可知，莓叶委陵菜醇提物21.50g／kg灌胃小鼠，对小鼠均无影响，表明莓叶委陵菜乙醇提取物对小鼠的LD50大于21.50g／kg。

3 讨论

目前，国内外对委陵菜属植物的研究，大多是针对其性状、产地分布、种属分类及栽培技术等方面，国外有其抗病毒活性的研究。对莓叶委陵菜醇提物的急性毒性研究，是为其药用、食用时对人体是否有毒副作用的基本要求之一。根据保健食品毒理学实验方法，本研究将小白鼠分为2组，每组10只，雌雄各半，分为给药组和空白对照组。实验观察结果，只有1只由于操作不当致其死亡，其余小鼠灌胃后的活动、饮食、粪便、毛发和精神状态等方面，均无异常表现，未见任何急性中毒症状或药物致死现象，表明试验小鼠在灌胃莓叶委陵菜乙醇提取物20ml／kg，即720mg／kg的情况下，未出现急性中毒症状。因此，小鼠对受试物的LD50大于21.50g／kg，表明莓叶委陵菜乙醇提取物对实验小鼠无毒副作用［11-12］。

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