雷公藤不同提取部位对小鼠肝肾的损伤作用*

王 蓓 陈 晨 余 黎 蒋宝平 许 立 方泰惠△

（1.南京中医药大学，江苏 南京 210029；2.江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，江苏南京 210029）

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）为卫矛科植物雷公藤根的木质部，其味苦、辛，性凉，大毒，归肝、肾经，具有祛风除湿、通络止痛、杀虫解毒之功效［1］。现代临床研究表明雷公藤及其制剂具有抗炎、免疫抑制、抗生育等活性，对于与自身免疫相关的多种疑难病症疗效显著。但大量研究表明，雷公藤毒副作用大，且其主要毒性成分也是主要有效成分［2］。雷公藤的急性毒性以急性肝坏死为主［3］，而亚慢性中毒的主要原因之一为肾损害［4］。但迄今为止，雷公藤毒性作用的物质基础尚不明确。故本研究通过对小鼠进行灌胃给药，观察雷公藤不同部位对小鼠肝肾损伤相关指标的影响，以期对雷公藤毒性物质基础研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 雷公藤饮片（安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，批号：11080），经鉴定为雷公藤根的木质部。谷丙转氨酶（ALT）测定试剂盒 （南京建成生物工程研究）、谷草转氨酶（AST）测定试剂盒（南京建成生物工程研究）、尿素氮（BUN）测定试剂盒（南京建成生物工程研究）、血肌酐（Scr）测定试剂盒（南京建成生物工程研究）。

1.2 动物 ICR小鼠，清洁级，雌雄各半，体质量 18～22 g，共360只。适龄，健康，购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号 scxk（沪）2007-0005。

1.3 仪器 LDZ5-2型台式离心机（北京医用离心机厂）；酶联免疫检测仪酶标仪（SPECTRAMAX190，美国MD公司）；DKB-8A型电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）。

1.4 药物制备

1.4.1 提取 （1）醇提：将雷公藤饮片用95%乙醇提取2次，乙醇量为药材量的8倍，提取时间分别为2、1.5 h，180℃沸腾，130℃保持微沸，分别为2、1.5 h。提取完后，将药渣倒出，晾干。两次提取物合并。（2）水提：药渣用蒸馏水提，量为药渣的8倍，提取2次，时间分别为2、1.5 h。200℃沸腾，160℃保持微沸，分别为2、1.5 h。两次提取物合并。

1.4.2 减压浓缩 （1）醇提物：减压浓缩95%乙醇提取物，温度为50℃，转速为34 r/min，压力为-0.095 MPa，浓缩至2 L。取出500 mL留样，于水浴锅中蒸发至干，温度为82.5℃，再放入烘箱中烘干成干燥物（烘箱的温度为42.5℃），得到醇提物部位。剩余的1.5 L用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。（2）水提物：减压浓缩水提物，温度为70℃，转速为40 r/min，压力为-0.095 MPa，浓缩至2 L。取出500 mL留样。从500 mL中取出50 mL不干燥，其余450 mL于水浴锅中蒸发至干，温度为80℃，再放入烘箱中烘干成干燥物（烘箱的温度为42.5℃），得到水提物部位。剩余的1.5 L醇沉，用95%乙醇至80%乙醇。放置6 d后，倒出上清液，减压浓缩，温度为50℃，转速为60 r/min，压力为-0.095 MPa，倒入蒸发皿中蒸发至干，再放于烘箱中烘干。其上清液部分为水提醇沉上清液部位，沉淀物部分为水提醇沉沉淀物部位。

1.4.3 化学萃取 （1）石油醚萃取：1.5 L的石油醚倒入1.5 L的醇提取物中，混匀，静止2 h，打开活塞，放掉下层，从上口倒出石油醚部位，重复5次，石油醚部位萃取完。减压浓缩石油醚部位，温度为40℃，转速为50 r/min，压力为-0.095 MPa。倒入蒸发皿中蒸发至干，再放于烘箱中烘干，得到石油醚部位。（2）乙酸乙酯萃取：每次倒入1.5 L的乙酸乙酯，混匀，静止2 h，打开活塞，放掉下层，从上口倒出石油醚部位，重复7次，乙酸乙酯部位萃取完。旋转蒸发乙酸乙酯部位，温度为50℃，转速为50 r/min，压力为-0.09 MPa。倒入蒸发皿中蒸发至干，再放于烘箱中烘干，得到乙酸乙酯部位。（3）正丁醇萃取：根据提取物的量加入正丁醇，混匀，静止2 h，打开活塞，放掉下层，从上口倒出正丁醇部位，重复6次，正丁醇部位萃取完。旋转蒸发正丁醇部位，温度为55℃，转速为60 r/min，压力为-0.095 MPa。倒入蒸发皿中蒸发至干，再放于烘箱中烘干，得到正丁醇部位。

1.5 肝肾损伤实验 （1）分组及给药：小鼠随机分成15组，分别为：空白对照组；水提物高、低剂量组；醇提物高、低剂量组；水提醇沉上清液高、低剂量组；水提醇沉沉淀物高、低剂量组；石油醚提取物高、低剂量组；乙酸乙酯高、低剂量组和正丁醇高、低剂量组。每组实验动物分两批，每批12只，雌雄各半，一批给药5 d，一批给药10 d。低剂量为临床等效量（3.25 g/kg），高剂量为临床等效量的5倍量 （16.25 g/kg），空白对照组给予等体积生理盐水，每日灌胃给药1次。（2）标本采集与检测：上述小鼠实验前稳定3 d，观察小鼠的摄食、粪便、活动等一般状况。分别于实验分组第5日和第10日给药12 h后（禁食不禁水12 h），对两批动物眼眶取血致死，于3000 r/min离心10 min，取血清，测定ALT、AST以及BUN、Scr水平。

1.6 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件。计量资料以（）表示。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 雷公藤不同提取部位给药对小鼠肝功能指标的影响 见表1。结果显示，给药5 d后，与空白对照组比较，正丁醇组和醇提物组的ALT和AST值均升高，并且有显著差异 （P＜0.05或0.01）。给药10 d后，除正丁醇组和醇提物组外，乙酸乙酯组、水提醇沉上清液高剂量组ALT和AST值均升高，且和空白对照组比较有显著差异（P＜0.05或0.01）。

表1 各组肝功能指标比较（U/g，，n=12）

表1 各组肝功能指标比较（U/g，，n=12）

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

组别给药5 d 给药10 d ALT AST ALT AST空白对照组 33.19±5.75 19.77±2.41 39.16±5.94 30.08±6.63醇提物低剂量组 36.33±6.56 27.97±4.35* 47.18±7.50*44.44±8.74*醇提物高剂量组 43.26±2.88* 30.16±1.92** 52.20±9.56**50.41±6.75**乙酸乙酯低剂量组 33.29±4.13 20.91±3.57 46.79±5.16 49.24±5.41*乙酸乙酯高剂量组 33.86±5.38 25.91±1.75* 56.12±8.52**63.33±9.53**正丁醇低剂量组 38.21±7.44 25.91±1.75* 47.49±6.77*49.27±6.29*正丁醇高剂量组 50.71±5.73**27.00±7.98** 55.83±5.46**56.78±5.51**石油醚低剂量组 35.32±2.28 16.03±2.23 42.44±3.97 35.61±4.66石油醚高剂量组 37.34±4.98 17.03±3.75 45.59±7.27 43.87±6.92*水提物低剂量组 31.73±4.58 17.18±2.80 41.62±8.65 32.13±3.24水提物高剂量组 33.03±4.56 21.03±4.68 43.21±8.52 45.39±7.33*水提醇沉上清液低剂量组 36.76±4.24 20.72±1.75 46.61±8.19 31.72±4.76水提醇沉上清液高剂量组 40.54±2.22 22.65±3.42 48.01±7.28*50.41±6.75**水提醇沉沉淀物低剂量组 38.99±9.37 19.94±2.49 42.52±4.42 32.20±5.48水提醇沉沉淀物低剂量组 40.54±5.42*20.54±0.70 49.65±5.78*34.72±3.88

2.2 雷公藤不同提取部位给药对小鼠肾功能指标的影响 见表2。给药5 d后，醇提物组、乙酸乙酯高剂量组和正丁醇高剂量组的BUN值升高，和空白对照组比较有显著差异 （P＜0.05或0.01）。但是给药5 d对小鼠的Scr影响不大，给药10 d后，正丁醇高剂量组、乙酸乙酰高剂量组、石油醚高剂量组以及醇提物组的BUN升高，且和空白对照组比较有显著差异。醇提物组Scr值升高，和空白对照组比较差异显著（P＜0.05）。

表2 各组肾功能指标比较（，n=12）

表2 各组肾功能指标比较（，n=12）

给药5 d 给药10 d BUN（mmol/L） Scr（μmol/L） BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白对照组 7.52±1.29 82.09±5.15 8.11±1.01 76.50±15.62醇提物低剂量组 10.13±2.69* 82.15±10.85 11.34±1.65* 95.83±10.74*醇提物高剂量组 15.14±3.60**92.55±15.40 11.91±1.04** 97.89±12.68*乙酸乙酯低剂量组 7.35±2.17 85.67±12.27 8.14±0.388 77.55±12.75乙酸乙酯高剂量组 9.79±2.10* 86.8±13.48 9.36±0.878* 78.14±10.55正丁醇低剂量组 8.66±2.13 82.18±18.63 9.11±1.70 71.49±7.14正丁醇高剂量组 9.07±1.06* 90.24±10.57 10.22±1.40* 86.40±10.20石油醚低剂量组 8.17±2.56 77.21±11.00 9.39±1.02 60.02±11.91石油醚高剂量组 7.70±1.95 79.58±12.67 9.76±2.06* 66.59±10.44水提物低剂量组 7.79±1.34 88.73±12.10 8.73±0.52 61.96±6.89水提物高剂量组 8.35±0.83 93.52±14.06 8.86±0.82 68.97±9.08水提醇沉上清液低剂量组 7.28±0.71 81.79±10.42 8.19±1.45 80.07±19.97水提醇沉上清液高剂量组 8.16±1.34 89.09±12.78 8.96±1.20 85.98±9.19水提醇沉沉淀物低剂量组 8.27±2.03 84.94±7.79 9.17±1.07 80.80±7.42水提醇沉沉淀物低剂量组 8.65±1.68 89.56±16.28 9.28±1.55 88.96±13.72组别

3 讨 论

各种临床和实验研究结果表明，雷公藤的毒性与其所含化学成分关系密切，这类植物的已知化学成分至少有200多种［5］。其中各类成分的毒性大小看法不一，有人认为毒性大小依次为二萜类、生物碱、三萜类及苷类［6］；也有研究认为雷公藤中所含的二萜成分毒性最大，第二位是三萜成分，而生物碱类成分毒性较小［7］；还有认为总苷毒性最大，总萜次之，总碱最小的［8］。总的来看，由于成分复杂，雷公藤毒性物质基础仍不十分清楚。本研究表明，用雷公藤不同部位对小鼠进行短期给药后，其醇提物部位，乙酸乙酯部位和正丁醇部位会导致小鼠肝功能指标ALT和AST均显著升高，这说明雷公藤的肝毒性较强，且毒性成分集中在醇提物部位，其中以乙酸乙酯部位和正丁醇部位为多。而给药5 d后，其正丁醇和醇提物部位会使小鼠肾功能指标BUN上升，但是对Scr无明显影响。给药10 d后，醇提物组的Scr才出现上升。这说明，雷公藤不同部位短期给药产生的肾脏毒性不明显，雷公藤肾毒性的产生可能和长期大量用药有关。

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