HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效成分的含量研究分析

叶冰 苏慕霞 梁淑妍 谭苑芬 邓青

(广州中医药大学第一附属医院药剂科 广州 510405)

虎杖为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。为传统中药,虎杖富含蒽醌类、黄酮类等药用成分,其中以大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等为主的羟基蒽醌类化合物具有抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤的功效,临床应用广泛。现代的分析技术中用于分析蒽醌类成分定量分析的方法有很多,本文采用高效液相色谱法同时对虎杖及其提取物中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种有效成分进行含量测定方法的研究与分析。本法重现性好、效率高、结果准确。为科学客观评价中药材虎杖的质量提供依据。

1 仪器与试药

仪器:十万分之一电子天平(CPA22 5D德国 赛多利斯);高效液相色谱仪(Agilent 1260美国 安捷伦)。试剂:乙腈、甲醇(色谱纯 迪马公司)、磷酸(色谱纯 天津科密欧)、乙醇、硫酸(分析纯 国药集团);对照品:大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚,均来源于中国药品生物制品检定所;样品:市售中药材虎杖三批(编号:111101、111102、111103)及其自制乙醇提取物三批(编号:T111101、T111102、T111103)。

2 色谱条件

色谱柱:Hyperbond C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A相为乙腈,B相为0.1%磷酸,按下表进行梯度洗脱(表1);流速:1.0mL/min;检测波长:254nm;柱温:30℃。

表1 A相B相不同时间段梯度洗脱结果

3 试验方法和结果

3.1 虎杖乙醇提取物的提取方法

通过查阅相关资料,对虎杖中的有效成分进行提取分离。具体方法如下:取市售的虎杖中药材细粉0.5kg置5L的圆底烧瓶中。加入8倍量的80%的乙醇溶液,加热回流2h,过滤,收集滤液。至5L的烧杯中,加入20%的硫酸溶液200mL,静置24h,抽滤,取滤饼置鼓风干燥箱中,70℃干燥后,粉碎得虎杖乙醇提取物。

3.2 对照品溶液贮备液的制备

分别称取大黄酸约10mg,大黄素约20mg,大黄酚约10mg,大黄素甲醚约10mg,精密称定,置同一100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得1mL中约含上述对照品100、200、100、100μg的溶液作为贮备液。

3.3 样品溶液的制备

取虎杖细粉,精密称取约1g,置具塞锥形瓶中,加甲醇50mL,超声处理15min,滤过,滤渣加甲醇50mL,再次超声处理15min,过滤,滤渣用适量甲醇分次洗涤,合并滤液与洗液置250mL分液漏斗中,加10%盐酸20mL,混匀后用氯仿萃取3次,每次60mL,收集氯仿层,蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至25mL,经微孔滤膜滤过作为样品溶液。取虎杖乙醇提取物精密称取约0.5g同法操作。

3.4 重复性试验

精密量取对照品溶液贮备液2.0mL置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。取该溶液20μL注入液相色谱仪,连续进样5针,记录对照品的峰面积,计算相对标准偏差。RSD%分别为0.26%、0.32%、0.28%、0.52%,说明此方法重复性好。

3.5 线性试验

取对照品贮备液分别精密吸取0.5、1、1.5、2、2.5mL置25mL量瓶中,分别加甲醇稀释至刻度。取上述溶液各20μL分别注入液相色谱仪,记录各峰的峰面积,峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标,求回归方程,计算相关系数r。4种对照品的回归方程如表2。

表2 4种对照品的回归方程

结果表明:4种对照品浓度与峰面积呈良好的线性关系。

3.6 样品含量测定

按上述方法对市售中药材及自制乙醇提取物进行含量测定,结果见表3。

表3 对市售中药材及自制乙醇提取物进行含量测定的结果比较

4 讨论

虎杖提取物在医药领域应用广泛,但由于中药材中化学成分多,给检验工作和生产使用都带来很大的困难,若能对两种或两种以上的功效成分同时进行提取和检验,将会带来巨大的经济效益和社会效益,节省了人力物力。

本文采用高效液相色谱法同时对虎杖及其提取物中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种有效成分进行含量测定方法的研究与分析。结果表明乙醇提取物中有效成分的含量远高于虎杖中药材,且有效成分的含量也更加稳定、可控。便于生产使用。

[1] 张彩宁,王煦漫,薛兴亚,等.虎杖提取物高效液相色谱分析方法的优化[J].精细化工,2007,24(8):761～765.

[2] 翟旭光,陈广通.HPLC同时测定胆宁片中5种蒽醌类成分的含量[J].现代医药卫生,2010,26(21):3223～3225.

[3] 王欣,王晓欣,陈莹,等.正交设计优选虎杖中蒽醌成分的超声提取工艺[J].河北化工,2008,31(7):55～56.