HPLC法测定颈椎通络丸桂皮醛、芍药苷含量△

孟克巴牙尔 常 岚 张高娃 赵 阳 白音夫✴

(1.内蒙古自治区中蒙医医院，内蒙古呼和浩特010020;2.呼和浩特市环境科学研究所，内蒙古呼和浩特010030;3.内蒙古医学院2010级研究生，内蒙古呼和浩特 010050)

颈椎通络丸是我院所临床协定处方制剂。具有祛风通络，活血化瘀作用，用于颈椎病引起的头痛、头晕、耳鸣等症。主要由白芍、葛根、桂枝、羌活、地龙、乌蛇、防风、制草乌、甘草等药材组成。制法，以上药材粉碎成细粉，加蜂蜜制成小蜜丸。本文采用液相色谱法对桂皮醛、芍药苷含量进行测定。

1 仪器、试剂及样品

高效液相色谱仪:1100型(美国 Agilentg公司制造);NC－2000中北色谱工作站;1/10万光电天平:TG332A型(湘仪制造);超声清洗仪:AS2060B型(上海科学仪器公司制造)。

甲醇、乙腈:色谱纯，由美国Tedai公司生产;磷酸为分析纯;水为三蒸水。桂皮醛(710～9005)芍药苷(0736～200014)由中国药品生物制品检定所提供。颈椎通络丸由内蒙古中蒙医医院制剂中心生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:非罗门 Kromasil色谱柱 C18(4.6×200mm，5μm)。流速:1mL·min－1;柱温:30℃。桂皮醛测定波长290nm，流动相:甲醇－1%:磷酸(300:200);芍药苷测定波长为230nm，流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(22:78)［1］。

2.2 测定溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取桂皮醛对照品适量，用甲醇配制成0.08mg·mL－1;浓度的溶液。精密称取芍药苷对照品适量，用甲醇配制成0.09mg·mL－1;浓度的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品，用剪刀剪碎，称取0.4g，置研钵内，加甲醇2ml研磨直到全部溶散，甲醇溶液转移至50mL具塞锥形瓶中，用甲醇冲洗研钵3次，每次2mL。超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，再将甲醇溶液转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静止，用0.45μm滤膜滤过，即的。

2.2.3 专属性试验:依照样品制备方法分别制备不含肉桂和芍药的颈椎通络丸的阴性制剂，依照色谱条件测定。桂皮醛阴性样品与芍药苷阴性样品在与样品相应的保留时间内无干扰峰出现，表明，其它药材对桂皮醛及芍药苷的测定无干扰。

2.3 线性关系考察:精密吸取桂皮醛溶液1mL置10mL量瓶内为A溶液，由A溶液量取1mL按上法稀释为B溶液。吸取 B 溶液2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色谱条件测定峰面积。回归方程:Y=5738+4369354x，r=0.9999。桂皮醛在 0.02 ～0.64μg成线性关系。

芍药苷对照品溶液为A，精密吸取1mL置10mL量瓶内加甲醇至刻度为B溶液。吸取A溶液4、6、8μL，B溶液2、4、6μL按色谱条件测定峰面积。回归方程:Y=20038+3807746x，r=0.999。芍药苷在 0.0182 ～0.546μg 范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液4μL，连续进样5次，分别测定桂皮醛和芍药苷峰面积，结果峰面积的RSD分别为0.74%与1.01%。

2.5 稳定性试验:取同批号供试品溶液，分别于样品制备后第0，2，4，8h进样 4μL，测定桂皮醛和芍药苷峰面积，结果峰面积的RSD分别为0.65%与1.10%，样品在8h内稳定

2.6 重复性试验:取同批次样品，按2.2项下的方法制备5份样品。分别测定桂皮醛和芍药苷含量，桂皮醛平均含量 0.21 mg·g－1，RSD 为 3.5%;芍药苷平均含量 0.16 mg·g－1，RSD 为 3.7%。

2.7 回收率试验:取已知桂皮醛和芍药苷含量颈椎通络丸0.3g，置10mL容量瓶内分别精密加入桂皮醛对照品溶液1mL(0.08mg·mL－1)，芍药苷对照品溶液 0.5mL(0.091mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液转入置50mL具塞锥形瓶中，按供试品方法制备，提取，过滤。按色谱条件测定。计算测定平均回收率。见表1样品编号1～5为桂皮醛加样回收率测定，6～10为芍药苷加样回收率测定3样品测定分别吸取对照品溶液与样品溶液4μL，依上述色谱条件测定不同批号桂皮醛和芍药苷含量，二者平均含量分别为 0.24 mg﹒ g－1、0.16 mg﹒g–1。

表1 颈椎通络丸加样回收率测定

表2 样品中桂皮醛和芍药苷含量测定(n=5)

4 讨论

对供试品溶液制备方法进行研究。分别考察超声、回流提取方法，结果表明超声处理方法操作简便、省时，提取效率高。对提取时间考察表明，样品超声处理30min后桂皮醛与芍药苷含量不再增加。色谱柱适用性研究表明，Agilent XDB －C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非罗门Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)均可适用本试验测定。测定结果表明，桂皮醛含量在 0.21 ～0.27 mg·g－1，芍药苷含量0.12 ～0.19mg·g－1，批次之间含量差异不大。采用 HPLC法测定颈椎通络丸指标性成分，可作为有效控制药品的质量的方法之一。该方法重现性好，操作简便、灵敏、准确、可靠。

［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部)［S］.中国医药出版社，2010.127，96