中西药联合应用对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用机制

王晓玲，王春光，焦 宏，赵小祺

（1.河北北方学院附属第一医院，河北 张家口075000；2.河北北方学院基础医学院，河北 张家口75000）

1 材料与方法

1.1 动物

Wistar大鼠40只，体质量180～220g，雌雄各半，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

1.2 中药制备及药品试剂

四逆汤由熟附子、干姜、炙甘草按5∶3∶2比例用水煎制成1g·mL－1生药。福辛普利由上海施贵宝公司生产，规格：10mg/片，以0.9%生理盐水配成所需浓度。丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）测试盒均由南京建成生物技术研究所提供。

1.3 分组与给药方法

随机将40只Wistar大鼠分为假手术（sham）组、AMI模型（model）组、四逆汤（sini decoction，SND）组、福辛普利（fosinopril）组，四逆汤＋福辛普利联合（SND＋fosinopril）组，每组8只。四逆汤按5mL·kg－1灌胃，福辛普利按20mg·kg－1灌胃，联合用药组按四逆汤2.5mL·kg－1＋福辛普利10mg·kg－1灌胃，Model组和Sham组灌服公斤体重相符的生理盐水，每组灌胃容量均为5mL·kg－1，每日一次，连续3d。

1.4 实验方法

于末次给药后1h，按文献方法[3]：大鼠麻醉后仰卧位固定，剪去胸前鼠毛，先用缝线在开胸部位做一荷包，之后开胸暴露心脏，在冠状动脉起始点下方2～3mm处用0号丝线结扎冠状动脉。术毕迅速将心脏放回胸腔，挤出胸腔内气体，迅速收拢荷包关闭胸腔，整个开胸时间不超过30s。缺血30min后再次开胸，剪断丝线使血流再通，之后关闭胸腔。sham组第一次开胸时只穿线绕过冠状动脉前降支而不结扎，其他操作与上所述完全相同。除去术中及术后死亡大鼠，24h后sham组、fosinopril组各存活大鼠6只；model组、联合用药组各存活大鼠5只；SND组存活7只。术后24h腹主动脉取血，3000r·min－1离心10min，取血清。按试剂盒方法测血清MDA含量，SOD和GSH－Px活性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0软件包完成统计学处理，计量资料以（±s）表示，组间比较t检验。

2 结 果

Model组与Sham组比较，血清MDA有明显升高（P＜0.01）而SOD和GSH－Px有明显降低（P＜0.05）；SND组、Fosinopril组和联合用药组血清MDA、SOD、GSH－Px较Model组均有显著改善（P＜0.05或P＜0.01），其中联合用药组的血清MDA含量显著低于Fosinopril组（P＜0.05），见表1。

表1 四逆汤及福辛普利对缺血—再灌注损伤大鼠心肌血清MDA、SOD、GSH－Px的影响（±s）

表1 四逆汤及福辛普利对缺血—再灌注损伤大鼠心肌血清MDA、SOD、GSH－Px的影响（±s）

注：与sham组相比＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与 model相比＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与fosinopril组相比△P＜0.05

分组 n MDA（nmol·L－1）SOD（mg·L－1）GSH－Px（kU·L－1）sham 6 4.14±0.31 5.81±0.37 8.97±0.93 model 5 6.16±0.40＊＊ 4.28±0.92＊ 7.49±0.83＊SND 7 4.90±0.34＃ 6.31±0.94＃＃ 8.58±1.01＃fosinopril 6 5.13±0.50＃ 6.07±1.03＃＃ 8.90±0.91＃SND＋fosinopril 5 4.09±0.61＃＃△ 6.48±1.05＃＃ 9.10±0.90＃＃

3 讨 论

心肌缺血－再灌注损伤是冠脉缺血后血流重建的主要并发症之一，其机制尚未彻底阐明，但已有大量研究证实：氧自由基的作用是重要发病环节之一。再灌注后氧自由基生成增多，氧自由基与细胞膜上的多聚不饱和脂肪酸反应，发生脂质过氧化（LPO），其过氧化的最终产物MDA对细胞膜有很强的破坏作用，导致细胞膜及细胞器膜的流动性降低而通透性增高，发生细胞肿胀和Ca2＋内流进而引起钙超载，线粒体膜氧化磷酸化受损，导致ATP生成障碍，进而抑制心功能。再灌注时不仅自由基的生成增多，机体对自由基的清除能力也减低，本研究中model组与sham组比较，具有自由基清除功能的SOD、GSH－Px活性降低也证明了这一点。

关于心肌缺血－再灌注时氧自由基生成增多的机制，有研究认为与心肌局部肾素－血管紧张素系统（RAS）激活后生成大量血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）有关[1]。AngⅡ与受体ATI结合后激活细胞磷脂酶C或A2，引起膜磷脂降解，之后再通过花生四烯酸途径产生大量的氧自由基[2]。另外，AngⅡ可促进交感神经末梢释放儿茶酚胺，使心脏局部的氧化产物增多，导致氧自由基大量生成[3]。

福辛普利是血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI），它通过抑制ACE能有效阻断AngⅡ的生物学效应，从而阻断自由基的产生。本实验也证实了福辛普利可明显降低心肌缺血－再灌注大鼠血清中MDA含量并提高具有自由基清除效应的SOD及GSH－Px的活性，从而发挥其保护缺氧复氧心肌的作用。

四逆汤由附子、干姜、炙甘草组成，在四逆汤拆方研究中发现，甘草的主要成分—甘草甜素对OFR有直接的淬灭效应及和显著的抗氧化作用[4]。体内体外大量研究均证实：四逆汤可显著降低缺血心肌内OFR浓度和丙二醛（MDA）含量，增加SOD活性，对抗脂质过氧化反应（LPO）[5]，增加机体防御自由基的能力。

中药与西药在治疗方面各有优缺点，西药治疗迅速可靠，但长期服药会产生耐药性以及不同程度的毒副作用；中药配伍常具多方面的调节功能，药势相对缓和，基本无副作用。中西药联合应用可有效降低单一西药的毒副作用，药效趋于缓和持久。本研究显示：四逆汤和福辛普利在大鼠心肌缺血－再灌注中都有对抗自由基的效应，可明显改善心肌再灌注损伤，二者联用在某些方面比单药效果更好，但临床应用疗效有待进一步证实。

[1]Shimizu M，Sjoquist PO，Wang QD，et al.Effects of angiotensinⅡreceptor blocker candesartan on myocardial ischemic/re－perfusion injury [J].J Am See Nephrol，1999，10（Suppl）11：S137－S142.

[2]Zughaib ME，Sun JZ.Effect of angiotensin－converting enzyme inhibitors on myocardial ischemia/reperfusion injury in rats [J].Hypertension，1996，27（1）：7－13.

[3]赵学忠，秦玲，于小风，等.福辛普利对急性心肌梗死大鼠心室重构的影响 [J].中国心血管病研究杂志，2003，1（1）：50－54.

[4]吴伟康，侯灿，罗汉川，等.四逆汤方药抗缺血心肌脂质过氧化作用及其量效时效的研究 [J].中国中药杂志，1995，20（4）：235.

[5]吴伟康，侯灿，罗汉川.四逆汤对缺血心肌NBF、OFR浓度，SOD活性及MDA含量的影响 [J].中山医科大学学报，1993，14（4）：292－295.