HPLC法同时测定开胸顺气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚的含量

刘宏明，杨福伟

（1.山东大学药学院，济南250012；2.淄博市药品检验所，山东淄博255086；3.淄博职业学院，山东淄博 255314）

HPLC法同时测定开胸顺气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚的含量

刘宏明1，2＊，杨福伟3

（1.山东大学药学院，济南250012；2.淄博市药品检验所，山东淄博255086；3.淄博职业学院，山东淄博 255314）

目的：建立同时测定开胸顺气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，流动相为甲醇（A）-5%冰醋酸溶液（B）（梯度洗脱），流速为1.0 mL·min－1，柱温为40℃，进样量为10μL，检测波长0～20 min为284 nm、20～65 min为294 nm。结果：橙皮苷进样量在0.171 7～4.292μg范围内（r＝0.999 8）、和厚朴酚进样量在0.040 04～1.001μg范围内（r＝0.999 4）、厚朴酚进样量在0.092 80～4.640μg范围内（r＝0.999 8）与各自峰面积积分值均呈良好的线性关系；平均回收率分别为99.88%、99.34%、99.34%，RSD分别为0.67%、1.10%、0.86%（n＝6）。结论：本法简便、准确、重复性好、精密度高，可更好地控制开胸顺气丸的质量。

开胸顺气丸；橙皮苷；和厚朴酚；厚朴酚；高效液相色谱法；含量测定

开胸顺气丸是山东省基本药物，为传统中药制剂，收载于《中国药典》2010年版（一部），由槟榔、牵牛子、陈皮、木香、厚朴、三棱、莪术、猪牙皂8味中药组成，具有消积化滞、行气止痛之功效，用于气郁食滞所致的胸胁胀满、胃脘疼痛、嗳气呕恶、食少纳呆。《中国药典》标准采用高效液相色谱（HPLC）法测定开胸顺气丸中和厚朴酚与厚朴酚的含量[1]，也有文献采用HPLC法单独测定其中橙皮苷的含量[2]，但同时测定其中上述3种成分含量的方法尚未见报道。为此，笔者采用HPLC法，建立了同时测定开胸顺气丸中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚含量的方法，可为更好地控制其质量提供依据。

1 仪器与试药

LC-20AT HPLC仪，包括LC-20ATVP泵、SPD-20AVP紫外检测器、CTO-20A柱温箱、SIL-20A自动进样器（日本岛津公司）；AE 240电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KS-300E超声波清洗机（宁波科生仪器厂）。

开胸顺气丸（河北永丰药业有限公司，批号：20111101；山东华洋制药有限公司，批号：11060；陕西香菊药业集团有限公司，批号：091001）；橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110721-201014、110730-201011、110729-200411）；甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-5%冰醋酸溶液（B），梯度洗脱（0～20 min，35%A；20～25 min，35%A→70%A；25～50 min，70%A；50～55 min，70%A→35%A；55～65 min，35%A）；检测波长：0～20 min为284 nm、20～65 min为294 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱温：40℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，理论板数按橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚计算均不低于4 000，分离度均大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的橙皮苷对照品21.46 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成橙皮苷对照品贮备液（每1 mL含橙皮苷0.858 4 mg）。精密量取上述贮备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品溶液（每1 mL含橙皮苷0.085 84 mg）。

取经五氧化二磷减压干燥至恒重的和厚朴酚对照品10.01 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成和厚朴酚对照品贮备液（每1 mL含和厚朴酚0.400 4 mg）。

取经五氧化二磷减压干燥至恒重的厚朴酚对照品23.20 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成厚朴酚对照品贮备液（每1 mL含厚朴酚0.928 0 mg）。

精密量取上述2种贮备液各5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成和厚朴酚与厚朴酚对照品混合贮备液（每1 mL含和厚朴酚0.200 2 mg、厚朴酚0.464 0 mg）。再精密量取上述混合贮备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得和厚朴酚与厚朴酚对照品混合溶液（每1 mL含和厚朴酚0.020 02 mg、厚朴酚0.046 4 mg）。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品适量，研细，取约2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率：300 W，频率：40 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方中药味的比例制成缺陈皮和厚朴的阴性对照制剂100 g，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

分别精密吸取橙皮苷对照品溶液、和厚朴酚与厚朴酚对照品混合溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，按“2.1”项下色谱条件进样。结果，供试品色谱中呈现与橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚对照品色谱保留时间一致的色谱峰，阴性对照无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.橙皮苷对照品；B.和厚朴酚与厚朴酚对照品；C.供试品；D.阴性对照；1.橙皮苷；2.和厚朴酚；3.厚朴酚Fig 1 HPLC chromatogramsA.hesperidin control；B.honokiol and magnolol control；C.test sample；D，negative control；1.hesperidin；2.honokiol；3.magnolol

2.3 线性关系考察

分别精密吸取“2.2.1”项下橙皮苷对照品贮备液0.2、0.5、1、2、5μL，注入HPLC仪，测定峰面积。以峰面积（y）为纵坐标，进样量（μg，x）为横坐标，绘制标准曲线，得橙皮苷的回归方程y＝1 022 602x－924.85（r＝0.999 8）。结果表明，橙皮苷进样量在0.171 7～4.292μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

分别精密吸取“2.2.1”项下和厚朴酚与厚朴酚对照品混合贮备液0.2、0.5、1、2、5μL，注入HPLC仪，测定峰面积。以峰面积（y）为纵坐标，进样量（μg，x）为横坐标，绘制标准曲线，得和厚朴酚的回归方程y＝1 992 403x+11 284（r＝0.999 4），厚朴酚的回归方程y＝796 715x+37 822（r＝0.999 8）。结果表明，和厚朴酚进样量在0.040 04～1.001μg范围内、厚朴酚进样量在0.092 80～4.640μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取各对照品溶液10μL，重复进样5次。结果，橙皮苷平均峰面积为886 090，RSD＝0.35%；和厚朴酚平均峰面积为 402 494，RSD＝0.42%；厚朴酚平均峰面积为963 173，RSD＝0.51%。可见，仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一批（批号：20111101）样品适量，共5份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并进样测定。结果，样品中橙皮苷含量为7.101 mg·g－1，RSD＝0.83%；和厚朴酚含量为0.626 mg·g－1，RSD＝0.83%；厚朴酚含量为 0.925 mg·g－1，RSD＝0.48%。可见，本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取“2.5”项下第1份供试品溶液适量，置于室温下分别在放置0、2、4、6、8、10、12 h时进样10μL测定。结果，样品中橙皮苷平均峰面积为293 215 8，RSD＝0.81%；和厚朴酚平均峰面积为502 806，RSD＝1.10%；厚朴酚峰面积为743 373，RSD＝0.98%。可见，供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的同一批（批号：20111101）样品20 g，粉碎，取1 g，精密称定，分别精密加入“2.2.1”项下橙皮苷对照品贮备液10 mL、和厚朴酚对照品贮备液1.5 mL、厚朴酚对照品贮备液1 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.8 样品含量测定

按上述方法对3批样品中的橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚的含量进行测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 测定成分的选择

开胸顺气丸《中国药典》标准只有厚朴主要成分和厚朴酚与厚朴酚的含量测定，而陈皮也是开胸顺气丸的主药之一，其主要成分橙皮苷具有多种药理作用[3-5]。单独测定开胸顺气丸中橙皮苷含量的方法曾有报道[2]，但是同时测定其中橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚的含量，可以节约时间和成本，有利于方便、简单、快速地控制该制剂的内在质量。

表2 样品含量测定结果（n＝2）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝2）

3.2 提取方法的选择

取本品适量，分别加甲醇超声处理20、40、60 min，发现超声40 min提取即较为完全。而《中国药典》标准采用的提取方法不能将橙皮苷提取完全，且操作比较复杂。故本试验采用超声提取法。

3.3 测定波长的选择

橙皮苷的最大吸收波长在284 nm附近，而和厚朴酚与厚朴酚的最大吸收波长在294 nm附近，故采用切换波长的方法可满足各个测定成分在最大吸收波长处进行测定。

3.4 流动相的选择

采用甲醇-乙腈-水等流动相系统等度洗脱可以很好地分离和厚朴酚与厚朴酚2种成分[6]，也可较好地分离木香烃内酯、去氢木香烃内酯、和厚朴酚与厚朴酚4种成分[7]，但不能分离橙皮苷、和厚朴酚与厚朴酚。而采用甲醇-5%冰醋酸溶液梯度洗脱使上述3种成分得到了良好分离。

试验结果表明，本方法简便、准确、重复性好、精密度高，可用于该制剂的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：514.

[2] 王福霞，彭 柳，康红英.HPLC法测定开胸顺气丸中橙皮苷的含量[J].中国药房，2008，19（18）：1 413.

[3] 娄桂予，江 渝，彭家和，等.橙皮苷抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响[J].第三军医大学学报，2004，26（8）：717.

[4] 秦得安，王晓玲.橙皮苷对羟自由基的清除作用[J].中国药学杂志，1996，31（7）：390.

[5] 秦得安，王晓玲.橙皮苷对羟自由基引发红细胞膜损伤的影响[J].中国药学杂志，1996，31（7）：396.

[6] 郑晓英，黄 威，周子平.RP-HPLC法测定开胸顺气丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中成药，2003，25（8）：683.

[7] 孙全明，柯红梅，熊贤锋.HPLC法同时测定开胸顺气丸中4种成分的含量[J].中国药品标准，2010，11（2）：131.

Simultaneous Content Determination of Hesperidin，Honokiol and Magnolo in Kaixiong Shunqi Pills by HPLC

LIU Hong-ming
（School of Pharmacy，Shandong University，Jinan 250012，China）
LIU Hong-ming
（Zibo Institute for Drug Control，Shandong Zibo 255086，China）
YANG Fu-wei
（Zibo Vocational Institute，Shandong Zibo 255314，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of hesperidin，honokiol and magnolol in Kaixiong shunqi pills.METHODS：HPLC method was adopted.The separation were achieved on an Agilent ZORBAX SB-C18column with methanol（A）-5%acetic acid solution（B）as mobile phase（gradient elution）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The column temperature was 40℃ and the detection wavelengths were 284 nm at 0～20 min and 294 nm at 20～65 min.The injection volume was 10μL.RESULTS：The linear range was 0.171 7～4.292μg for hesperidin（r＝0.999 8），0.04 004～1.001μg for honokiol（r＝0.999 4）and 0.092 80～4.640μg for magnolol（r＝0.999 8）；the average recoveries were 99.88%（RSD＝0.67%，n＝6），99.34%（RSD＝1.1%，n＝6）and 99.34%（RSD＝0.86%，n＝6），respectively.CONCLUSION：The method is simple，accurate，reproducible and precise，and it is suitable for the quality control of Kaixiong shunqi pills.

Kaixiong shunqi pills；Hesperidin；Honokiol；Magnolol；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2012）40-3825-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.40.30

2012-05-07

2012-08-24）