秦巴山区不同产地娑罗子中七叶皂苷的含量比较Δ

张辰露，吴三桥，韩 豪，周建军，缑慧君

（1.陕西省资源生物重点实验室，陕西汉中723000；2.汉中市药品检验所，陕西汉中 723000）

秦巴山区不同产地娑罗子中七叶皂苷的含量比较Δ

张辰露1＊，吴三桥1，韩 豪1，周建军1，缑慧君2

（1.陕西省资源生物重点实验室，陕西汉中723000；2.汉中市药品检验所，陕西汉中 723000）

目的：对秦巴山区10个不同产地娑罗子药材中的七叶皂苷成分进行分析比较。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODSC18（100 mm×4.6 mm，5µm），检测波长为220 nm，流动相为乙腈-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V），流速为1 mL·min－1，柱温为20℃。结果：10个不同产地样品中七叶皂苷A的含量均高于七叶皂苷B，且均符合2010年版《中国药典》标准（七叶皂苷A＞0.7%）。产自略阳的样品中七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量最高，分别为28.46和19.77 mg·g－1（生药）；其次为康县、留坝的样品，宁强、勉县、宁陕、镇坪的样品含量居中，而平利、西乡、洋县的样品含量则相对较低。10个产地样品中七叶皂苷A含量在1.16%～2.85%之间，七叶皂苷B含量在0.89%～1.98%之间，平均值分别为1.92%和1.43%，其中七叶皂苷A与七叶皂苷B的含量比在1.14～1.45之间。结论：秦巴山区不同产地娑罗子中七叶皂苷含量和组成存在明显差异，种源、生态环境等因素对娑罗子药材有效成分的积累过程影响较大，控制药材产地来源对保障娑罗子药材质量的稳定性有着重要意义。

娑罗子；七叶皂苷；秦巴山区；产地；高效液相色谱法

娑罗子为七叶树科植物七叶树Aesculuschinensis Bge.、浙江七叶树A.chinensis Bge.var.chekiangensis（Hu et Fang）Fang和天师栗A.wilsonii Rehd.的干燥成熟种子。娑罗子的主要成分为皂苷类化合物，具有疏肝、理气、和胃、止痛、杀虫之功效，还具有抗炎、消肿胀、抗渗出、抗肿瘤作用[1]。七叶树原产于黄河流域，通常分布在海拔1 000 m以下的山坡和林中，我国以河北、陕西、山西、河南、江苏、浙江等地分布较多，多野生、散生，呈零星分布。我国的陕西秦岭、湖北神农架是娑罗子的主产区，为七叶树的最佳适生区[2]。除具有药用价值之外，七叶树也是世界上著名观赏树种之一，因市场需求逐年增大，各地人工种植发展迅速[3]。

近年来，对娑罗子的研究主要集中在化学成分的分析与分离提纯技术、药理学、栽培技术以及加工技术等方面，对于原药材的品质差异性分析还鲜有报道[2～6]。然而多种因素如种质资源、生长环境和种植技术的差异都可能影响娑罗子的药材品质，因此笔者对秦巴山区的娑罗子资源进行调查取样，采用高效液相色谱（HPLC）法对其有效成分七叶皂苷进行分析比较，以期为今后中药材产业发展提供参考。

1 仪器与试药

HP1100 HPLC仪、G1314AVWD紫外检测器（美国Agilent公司）；R201BL旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；FA2004电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；302恒温干燥箱（山东潍坊医疗器械公司）；TTL-10A超纯水器（北京同泰联科技发展公司）；KQ5200DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

七叶皂苷钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号：10346-0001，其中七叶皂苷A为总皂苷的43.5%，七叶皂苷B为32.0%，干燥失重11.8%）；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，乙醇、乙酸乙酯等为分析纯。娑罗子于2008年10－11月分别采自陕西略阳、留坝、洋县、宁强、勉县、西乡、宁陕、平利、镇坪县与甘肃康县，共10个产区，选择单粒直径不小于2.5 cm、成熟饱满的娑罗子为样品，均经陕西省资源生物重点实验室杨培君教授鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 样品处理

从每个产地样品中挑选大小均一的娑罗子若干，自然晾晒后于45℃烘箱中烘干15 h，粉碎，过60目筛，密封保存，备用。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 精密称取娑罗子样品粉末1.5 g，置索氏提取器中，加乙醚加热回流1 h，弃去乙醚液，药渣连同滤纸筒挥干溶剂后置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇80 mL，超声处理（功率：160 W，频率：40 kHz）30 min，滤过，浓缩，以正丁醇萃取，减压浓缩，低温挥干溶剂，以甲醇定容至50 mL，摇匀，待测[1]。

2.2.2 对照品溶液 精密称取七叶皂苷钠对照品50 mg，以甲醇定容至50 mL，摇匀，得浓度为1.0 mg·mL－1的对照品溶液，待测。

2.3 色谱条件

参照《中国药典》方法[1]并进行优化。色谱柱：Hypersil ODSC18（100 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V）；检测波长：220 nm；流速：1 mL·min－1；进样量：10µL；检测时间：16.5 min；柱温：20℃。在此条件下，样品中七叶皂苷主要组分可达到基线分离。色谱见图1。

2.4 方法学考察

图1 高效液相色谱图A.七叶皂苷钠对照品；B.供试品；1.七叶皂苷A；2.七叶皂苷B ；3.七叶皂苷C；4.七叶皂苷DFig 1 HPLC chromatogramsA.aescine sodium control；B.test sample；1.escin A；2.escin B；3.escin C；4.escin D

2.4.1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液适量，加甲醇制备成质量浓度分别为0.10、0.30、0.50、0.80、1.00 mg·mL－1的系列梯度溶液，各进样10μL，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，质量浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，得七叶皂苷A和七叶皂苷B的回归方程、r和线性范围，详见表1。

表1 七叶皂苷A和七叶皂苷B的线性关系考察结果Tab 1 Results of linear relationship of escin A and B

2.4.2 精密度试验 精密吸取0.80 mg·mL－1的对照品溶液适量，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积。结果，七叶皂苷A和七叶皂苷B的RSD分别为1.23%和1.41%（n均为6），表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h进样10μL，测定峰面积。结果，七叶皂苷A和七叶皂苷B的RSD分别为2.04%和1.58%（n均为9），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.4 重复性试验 精密称取娑罗子样品粉末适量，共6份，分别按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样10μL，测定样品含量。结果，七叶皂苷A和七叶皂苷B的平均含量分别为24.36、17.29 mg·g－1（生药），RSD分别为2.01%和1.85%（n均为6），表明该方法重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品（产地：勉县，含量：七叶皂苷A为19.51 mg·g－1（生药），七叶皂苷B为14.01 mg·g－1（生药））0.10 g，置于100 mL容量瓶中，精密加入质量浓度为2.485μg·mL－1的对照品溶液（七叶皂苷A占43.5%，七叶皂苷B占32.0%）1 mL，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，再稀释100倍后按上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.5 样品含量测定

取10个不同产地样品，分别按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，照上述方法测定样品中七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量，重复3次，取平均值，结果见表3。

表3 不同产地娑罗子中七叶皂苷组分含量测定结果（n＝3）Tab 3 Contents and ingredient of escin in Aesculi Semen from different producing areas（n＝3）

3 讨论

由HPLC图可看出，娑罗子中七叶皂苷类成分主要有4种，分别为七叶皂苷A、B、C和D，其他组分含量均较低。秦巴山区10个县所产的娑罗子中七叶皂苷A的含量均大于七叶皂苷B，所有产地样品均符合《中国药典》规定（七叶皂苷A含量＞0.7%[1]）。其中，产自略阳的药材中七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量最高，分别为28.46和19.77 mg·g－1（生药）；其次为产自康县、留坝的样品，宁强、勉县、宁陕、镇坪的样品含量居中，而平利、西乡、洋县的样品中七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量相对较低。10个产地样品中七叶皂苷A的含量范围为11.57～28.46 mg·g－1（生药），七叶皂苷B的含量范围为8.89～19.77 mg·g－1（生药），平均值分别为19.16和14.34 mg·g－1（生药）。

秦巴山区中所分布的娑罗子主要来源于七叶树。本试验结果表明，秦巴山区10个不同产地的娑罗子中七叶皂苷A和七叶皂苷B不仅在含量上差异较大，而且七叶皂苷A与七叶皂苷B的比值也不同，其中康县、略阳和留坝的比例为1.45、1.44和1.40，西乡、洋县、宁强、勉县的比例在1.29～1.39之间，而镇坪、平利、宁陕的比例在1.14～1.25之间。费学谦等[7，8]的研究表明，不同品种来源的娑罗子中七叶皂苷各个组分的比例存在差异。另有药理学研究表明，七叶皂苷A、B、C、D的比例与药效有关，当它们的比例不同时，其活性和毒性也不同[9]。药材种源、生态环境等因素的差异对娑罗子有效成分的积累过程影响较大，直接影响着药材的内在品质[10]。因此，控制药材产地来源对保障娑罗子药材质量的稳定性有着重要意义。通过分析比较秦巴山区娑罗子中有效成分的构成，可了解秦巴山区娑罗子资源概况，以期为药源地的选择提供参考。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：275.

[2] 徐 文，陈西仓，张振纲.七叶树的栽培技术与开发利用[J].中国野生植物资源，2003，22（3）：34.

[3] 刘顺良，陈敬然，王文森.娑罗子的化学成分药理及临床研究进展[J].时珍国医国药，2004，15（8）：528.

[4] 田晓丽.七叶皂苷的药理学研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（5）：76.

[5] 任晓蕾，张海英，李玉珍，等.七叶皂苷钠治疗急性脑卒中有效性和安全性的Meta分析[J].中国药房，2011，22（11）：1 029.

[6] 张辰露.不同炮制方法对娑罗子饮片质量的影响[J].中成药，2010，32（9）：1 548.

[7] 费学谦，丁 明，周志春，等.七叶树种子皂苷含量及其组分的产地变异分析[J].林业科学研究，2005，18（2）：227.

[8] 郭 杰，徐 嵬，杨秀伟.娑罗子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析[J].中草药，2007，38（5）：767.

[9] 薛云丽，侯金玲，王 芃，等.不同组成比例的七叶皂苷钠抗炎作用及急性毒性研究[J].齐鲁药事，2009，28（5）：305.

[10] 马 鹏，李隆云，喻 强，等.不同产地仙茅药材的HPLC指纹图谱研究[J].中国药房，2011，22（39）：3 692.

Comparison of the Contentsof Escin in Aesculi Semen from Different Originsin Qinba Mountain Area

ZHANG Chen-lu，WU San-qiao，HAN Hao，ZHOU Jian-jun
（Shaanxi Key Laboratory of Bio-resource，Shaanxi Hanzhong 723000，China）
GOU Hui-jun
（Hanzhong Institute for Drug Control，Shaanxi Hanzhong 723000，China）

OBJECTIVE：To compare the contents of escin in Aesculi Semen from different origins in Qinba mountain area.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on Hypersil ODS C18（100 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water-0.02%phosphoric acid（35∶65，V/V）at flow rate of 1 mL·min－1.The detection wavelength was set at 220 nm and the column temperature was 20℃.RESULTS：The content of escin A（＞0.7%）was higher than that of escin B in all samples from 10 different producing areas in accordance with pharmacopeia（2010 edition）.The contents of escin A and escin B from Lüeyang county were 28.46 mg·g－1and 19.77 mg·g－1and were the highest，followed by samples from Kangxian and Liuba，Ningqiang，Mianxian，Ningshan，Zhenping，and the samples from Pingli，Xixiang and Yangxian were lower than them.The range of escin A content from 10 different producing areas was 1.16%～2.85%，the range of escin B content was 0.89%～1.98%，and their averages were 1.92%and 1.43%.The ratios of escin A and escin B were 1.14～1.45.CONCLUSION：The contents and compositions of escins in Aesculi Semen from different origins in Qinba mountain area are significant.The influence of provenance，ecological environment and other factors to the accumulation of effective components in Aesculi Semen is obviously.To select material habitat is very important for stability guarantee of Aesculi Semen.

Aesculi Semen；Escin；Qinba mountain area；Producing area；HPLC

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2012）35-3323-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.35.21

2011-09-01

2012-01-09）