孟鲁司特钠片微生物限度检查方法的验证

曲萍 仇丽霞 赵思俊

孟鲁司特钠片微生物限度检查方法的验证

曲萍 仇丽霞 赵思俊

目的建立孟鲁司特钠片的微生物限度检查法，并对方法进行验证。方法采用离心集菌加薄膜过滤法，冲洗量为500 ml。结果验证试验中各种菌的回收率均大于70%。结论该方法有效可行，可用于该品种的微生物限度检查。

孟鲁司特钠片;微生物限度;方法验证;薄膜过滤

孟鲁司特钠片是一种口服有效的选择性白三烯受体拮抗剂，适用于预防哮喘。为了更好的控制产品质量，本文通过多次验证试验，建立了适宜的微生物限度检查方法。

1 试验材料

1.1 试验样品 孟鲁司特钠片(杭州默沙东制药有限公司，规格10 mg)

1.2 试验菌株 枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］均购于中国食品药品检定研究院。

1.3 试药 营养琼脂培养基(120419)、营养肉汤培养基(120220)、玫瑰红钠琼脂培养基(120410)、改良马丁液体培养基(101118)、胆盐乳糖培养基(20110705)、MUG(120310)均购于中国食品药品检定研究院。

2 细菌计数、霉菌和酵母菌计数方法的验证

2.1 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10 ml营养肉汤中，35℃培养18 h，采用10倍递增稀释法，使菌数约为50～100 cfu/ml。接种白色念珠菌的新鲜培养物至10 ml改良马丁培养基中，25℃培养24 h，采用10倍递增稀释法，使菌数约为50～100 cfu/ml。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，25℃培养5 d，加3～5 m l0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，采用10倍递增稀释法，使孢子数约为50～100 cfu/ml［1］。

2.2 方法

2.2.1 常规法 供试液制备：取本品10 g，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨无菌缓冲溶液(45℃)至100 ml，振摇，使成1∶10的供试液，备用。试验组：取供试液1 ml于培养皿中，加入1 ml制备好的菌液，按《中国药典》2010年版微生物限度菌落计数方法测定菌落数。菌液组：分别取制备好的菌液1 ml于培养皿中，计数。供试品对照组：取供试液1 ml于培养皿中，计数。进行3次独立的平行试验，分别计算回收率，测定结果见表1。

表1 回收率结果(常规法)

结果表明，白色念珠菌和黑曲霉的回收率高于70%，而金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌2种试验菌的回收率低于70%，所以孟鲁司特钠片的霉菌和酵母菌计数可以采用常规法进行检查，而细菌计数不可以采用常规法进行检查。

2.2.2 薄膜过滤法 供试液制备：取供试品10 g，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨无菌缓冲溶液(45℃)至100 ml，溶解，使成1∶10的溶液。取10 ml，500转/min离心3 min，取上清液，补至10 ml即得供试液。

试验组：取供试液1 ml，注入50 m l 0.9%无菌氯化钠溶液(45℃)中，薄膜过滤，冲洗液为pH7.0氯化钠-蛋白胨无菌缓冲溶液(45℃)500 ml/膜，在最后一次冲洗液中加入试验菌，过滤。取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基上，35℃培养。按《中国药典》2010年版微生物限度菌落计数方法测定菌落数。

菌液组：分别取制备好的菌液1 ml于培养皿中，按《中国药典》2010年版微生物限度菌落计数方法测定菌落数。

供试品对照组：操作方法同试验组，但不加试验菌，按《中国药典》2010年版微生物限度菌落计数方法测定样品中的本底菌数。

稀释剂对照组：取稀释液1 m l，注入50 ml0.9%无菌氯化钠溶液(45℃)中，以下操作同试验组。

进行3次独立的平行试验，分别计算回收率，测定结果见表2。

表2 回收率结果(薄膜过滤法)

结果表明，在3次平行试验中，采用薄膜过滤法检验孟鲁司特钠片，人工加入菌液，稀释剂对照组的回收率均高于70%，说明稀释剂对测定无干扰。试验组回收率均高于70%，细菌计数可以采用薄膜过滤法进行检验。

3 控制菌检查

供试液的制备：取本品10 g，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨无菌缓冲溶液(45℃)至100 ml，振摇，使成1：10的供试液，备用。

试验组取供试液10ml加入胆盐乳糖培养基100ml中，再加入10～100 cfu/ml大肠埃希菌1 ml，35℃培养24 h，取上述增菌液0.2 ml，接种至5 ml MUG培养基中培养5 h、24 h，在366 nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基做本底对照。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质指示液，观察液面颜色。

阴性菌对照组：方法同试验组，加入10～100 cfu/ml金黄色葡萄球菌1 m l代替大肠埃希菌。

结果：试验组检出大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。

4 讨论

孟鲁司特钠片有较强的抑菌作用，进行微生物限度检查时，细菌计数必须采用薄膜过滤法去除其抑菌作用，然后再进行计数检查，霉菌和酵母菌计数可以直接采用常规法进行检查，控制菌采用常规法进行检查。

［1］国家药典委员会.中国药典(二部).北京：化学工业出版社，2010：附录 107-116.

Validation ofm icrobial lim it tests of m ontelukast sodium tablets

QU Ping，QIU Li-xia，ZHAO Si-jun.ShanxiMedical University，Taiyuan 030001，China

ObjectiveTo provide amethod of themicrobial limit test formontelukast sodium tablets and carry out the verification of themethod.M ethodsCentrifuging and filteringmethod was used，and washing quantity was500 ml.ResultsTest recoveries were over 70% .ConclusionItwas proved that themethod was and reliable，and it can be used for themicrobial limit test formontelukast sodium tablets.

Montelukast sodium tablets;Microbial limit test;Validation of themethod;Membrane-filter

030001 山西医科大学卫生统计学教研室(曲萍 仇丽霞);山西省食品药品检验所(曲萍 赵思俊)

仇丽霞