毛细管电泳技术对多发性骨髓瘤的免疫学分型分析

李海炜，秦 雪＊，李 山，王 健，赖战峰

（1.广西医科大学第一附属医院 临床医学实验部，广西 南宁530021；2.广西医科大学医学检验系）

电泳法分析血清或尿液中蛋白质，辅助临床诊断的重要性已被广泛认可。随着电泳技术和仪器的发展，毛细管电泳技术（capillary electrophoresis，CE）逐渐受到重视。CE技术是一类以毛细管为分离通道、以高压电场为驱动力的分离分析技术，近年来该技术在科研和临床领域得到广泛应用［1，2］。

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种骨髓浆细胞异常增生的恶性肿瘤，特点是骨髓中异常浆细胞（骨髓瘤细胞）大量增殖，合成和分泌大量结构均一的单克隆免疫球蛋白（M蛋白）或（和）其轻链，引起骨痛及病理性骨折、贫血、出血、感染、肾功能损害、高钙血症和免疫球蛋白异常等临床表现。该病临床表现复杂多样，易误诊或漏诊，常规化疗完全缓解率甚低，预后不良［3］。由于MM分泌异常免疫球蛋白的种类和数量不同，临床常用血清蛋白电泳和免疫固定电泳技术（immunofixation electrophoresis，IFE）来检测 MM患者血清 M蛋白，并对MM进行诊断和分型，而目前毛细管电泳技术（CE）运用于MM免疫分型分析的报导国内尚不多见。为了探讨CE技术对MM诊断的应用价值，本文对51例MM患者采用毛细管区带电泳法 （capillary zone electrophoresis，CZE）进行血清蛋白电泳和采用毛细管区带电泳－免疫消减法（immunosubtraction capillary zone electrophoresis，IS－CZE）进行免疫分型，对结果进行分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 来自广西医科大学第一附属医院2008年10月－2010年10月本院MM住院患者的血清标本，共51例，其中男33例，女18例，年龄在38－82岁之间，诊断均符合国家诊断标准［4］。静脉取全血，分离后血清标本置－20℃冰箱待用。

1.1.2 仪器与试剂 血清蛋白电泳和毛细管区带电泳－免疫消减法（IS－CZE）电泳均采用法国sebia公司sebia capillaryⅡ型全自动毛细管电泳仪检测，版本为6.1.2，毛细管电泳试剂包括血清蛋白电泳试剂CAPILLARYS PROTEIN（Eβ1＋β2），批号为22090／01；IS－CZE试剂 CAPILLARYS IMMUNOTYPING，批号为15040／01。所用试剂均为原装配套试剂。免疫球蛋白定量使用HITACHI日立7600全自动生化分析仪检测，试剂由上海执诚提供。采用法国sebia公司HY－drasys电泳仪进行免疫固定电泳分析，试剂为原装配套试剂。

1.2 方法

1.2.1 毛细管血清蛋白电泳 使用sebia capillaryⅡ型全自动电泳仪进行分析，方法为毛细管区带电泳（CZE）。将待检血清和样品稀释小杯置于样品架上，检测程序选择“血清蛋白6”全自动进样和分析，产生6个峰，分别为白蛋白，α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白和γ球蛋白。健康人结果见图1。

图1 健康人毛细管血清蛋白电泳结果

1.2.2 毛细管区带电泳－免疫消减法（IS－CZE） 使用sebia capillaryⅡ型全自动电泳仪进行分析。将待检血清和抗体小杯（含ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清）置于样品架上，检测程序选择“免疫分型”全自动进样和分析，每个样本共生成6个图像，分别对应的是依次加了ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清后电泳的结果。

1.2.3 免疫球蛋白定量 采用免疫比浊法进行检测。

1.2.4 免疫固定电泳（IFE） 对患者血清样本进行稀释，各取10μl加入加样梳内，保湿5min后电泳。装好加样模板，依次加入抗血清ELP、抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清各10μl，电泳结束后进行免疫固定程序约5min，染色后读取结果。

2 结果

2.1 毛细管血清蛋白电泳结果 51例MM患者中，有50例血清蛋白电泳检测出α、β区或γ区或β区和γ之间出现底部狭窄，高尖的M蛋白峰（峰高大于或等于2倍峰宽）。检测结果见表1。

2.2 毛细管区带电泳－免疫消减法结果 样品分别与抗体小杯中的ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清混合，发生抗原抗体反应，经过生成抗原抗体复合物的样品再分别进入不同的毛细管进行电泳，得到6个电泳图谱，其中形成了复合物的蛋白在电泳图谱中被消除。所以，如果在加入了某种抗体的电泳结果图谱中，M蛋白峰消失，即为该种类型的M蛋白峰，判断为该种类型的MM，得出其免疫分型，见图2和图3。M蛋白免疫分型结果为IgG31例，其中IgGκ型16例，IgGλ型15例；IgA型10例，其中IgAκ型5例，IgAλ型5例；IgMκ型2例；单纯轻链型7例，其中κ型4例，λ型3例；双克隆型1例。51例MM血清毛细管电泳免疫分型结果如表2。

图2 患者IS－CZE电泳图谱，分别是加了ELP，抗IgG、IgA、IgM，抗κ血清和抗λ血清后电泳的结果。在加入了抗IgG和抗λ血清的图中M峰消失，检测结果为IgG＋λ型

图3 患者IS－CZE电泳图谱，分别是加了ELP，抗IgG、IgA、IgM，K血清和抗λ血清后电泳的结果。在加入了抗IgA和抗κ血清的图中M峰消失，检测结果为IgA＋κ型

2.3 免疫球蛋白定量结果 51例MM患者中，有1例IgAκ型和1例IgMκ型患者表现为IgG含量升高，其余与毛细管区带电泳－免疫消减法结果相符。

2.4 免疫固定电泳结果 免疫固定电泳结果与毛细管区带电泳－免疫消减法结果相符。

2.5 51例MM患者入院初诊断分析 对51例MM患者病例资料的回顾性分析结果显示，MM的临床首发症状多样化，可表现为肾脏损害、贫血、骨折、感染和心血管疾病等症状，由肾病综合征、肾功能不全入院者15例（29.4%），由贫血、出血等入院者13例（25.5%），由肝病入院者10例（19.6%），其它原因较少，具体统计结果详见表3。

3 讨论

多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性增生性疾病，以中老年好发，近年来发病率呈上升趋势［5，6］。临床上的患者多因肾病、贫血、出血和骨病等表现就诊，由于其临床症状的不典型和多样化，而且骨髓穿刺瘤细胞形态学检查受穿刺部位、穿刺次数影响，不利于MM的早期诊断及治疗。提高早期诊断率，对MM的治疗具有重要意义。

表1 51例MM患者毛细管血清蛋白电泳结果及M带出现区域

表2 51例MM患者血清IS－CZE电泳结果

表3 51例MM患者入院原因及入住科室分布

血清中出现M蛋白是MM诊断重要依据之一。M蛋白是单株浆细胞恶性增殖分泌的结构均一的免疫球蛋白或其肽链亚单位，可分为lgG，IgA，IgM，lgD，IgE，游离轻链κ，λ7种类型，其检出对MM的分型、病情、预后具有重要意义［7］。目前临床上使用免疫比浊法进行免疫球蛋白定量检测以确定M蛋白的种类和数量，但是不能区分是否由巨球蛋白血症、浆细胞性白血病等其它疾病造成的免疫球蛋白增高［8］；或使用以琼脂糖凝胶作为迁移支持物的琼脂糖凝胶电泳法（agar gel electrophoresis，AGE）进行血清蛋白电泳和免疫固定电泳作为检测M蛋白的重要手段，但是由于存在着技术的局限性和手工加样的操作误差，不同的实验室使用AGE法进行电泳得出的检测结果存在差异。故本研究使用毛细管电泳技术（CE）对51例 MM患者血清进行分析，探讨CE技术对MM诊断的临床应用价值。

使用毛细管电泳技术分别对MM患者进行血清蛋白电泳和IS－CZE电泳的结果发现，IS－CZE电泳可检出全部血清中M蛋白峰，且与IFE结果相符；血清蛋白电泳存在一例漏检。血清蛋白电泳具有一定的局限性，首先是不能区分M蛋白峰和其它蛋白峰，例如慢性肝炎病人在γ区或β－γ连接区间出现较钝圆的峰，或者肾病综合症病人在α区和（或）β区出现的高尖的峰；其次为不能区分M蛋白峰的类型。利用IS－CZE进行的免疫分型电泳则可鉴别M蛋白免疫类型。本实验分型结果显示IgG型（60.8%）最多，IgA 型（19.6%）和轻链型（13.7）次之，IgM 型（3.9%）少见，双克隆型（2.0%）最少见，与国内刘玉梅［9］等的报道基本一致，但各类型百分比和轻链类型仍有差别，分析原因可能与地域差异和样本量较小有关。因为MM的治疗方式与其免疫分型相关，故根据免疫球蛋白对MM进行准确的免疫分型对患者的治疗具有重要意义。所以利用毛细管电泳技术进行MM的免疫分型对其诊断和治疗均具有较高临床价值。另外，有研究表明，毛细管电泳技术（CE）是一种灵敏度、精确度更高的实验方法［1，10］，毛细管电泳技术在实现全自动化的基础上，仪器还可以识别患者样品条形码，与免疫固定电泳技术（IFE）相比具有分析时间更短，分辨率高，基线噪音低等优点，简化了实验过程，使操作更加方便快捷［11，12］。

综上所述，毛细管电泳技术中血清蛋白电泳可用于初步筛查是否存在M蛋白，IS－CZE电泳则可鉴别M蛋白免疫类型，对鉴定M蛋白血症有较高的应用价值。目前尚无早期诊断MM的方法，对临床上不明原因的骨痛、贫血患者，和血清总蛋白、免疫球蛋白异常升高的患者应进行毛细管电泳，阳性结果可作为诊断MM的重要依据，从而实现早诊断早治疗的目的。

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