不同炮制方法对黄芩中黄芩苷含量的影响

李宝春

（安徽科技学院动物科学学院，安徽 凤阳233100）

黄芩为唇形科黄芩属植物黄芩的干燥根。其性寒味苦，归肺、胃、胆、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效。中医临床用于治疗肺热咳嗽、高热神昏、肝火头痛、目赤肿痛、湿热黄疸、泻痢、胎热不安等证［1］。现代药理研究表明，黄芩具有抗菌、消炎、降压、利尿、降血脂、抗变态反应等作用，这些作用与黄芩中含有多种黄酮类衍生物有关［2－3］，如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、木蝴蝶素等，其中黄芩苷为主要有效成分之一。黄芩有多种炮制方法［4］，不同方法炮制的黄芩饮片中黄芩苷含量存在一定差异［5］。本文采用高效液相色谱法分别测定生黄芩、酒炒黄芩、焦黄芩、黄芩炭中黄芩苷的含量，以比较不同炮制方法对黄芩中黄芩苷含量的影响。

1 材料

1.1 药品及试剂 黄芩饮片，购自安徽省凤阳县回春灵大药房，由安徽科技学院中药教研室老师鉴定；炮制品按《中华本草》所规定的炮制方法炮制；黄芩苷标准品，购自中国药品生物制品检定所，批号：110715－200212。甲醇（色谱纯），美国Tedia公司生产，批号：Lot305064；甲醇（分析纯），徐州试剂厂生产，批号：040303；磷酸（分析纯），上海兴达化工试剂厂生产，批号：030208；水为超纯水。

1.2 仪器 Waters 1525高效液相色谱仪（包括Waters 2484型紫外检测器，Waters Breeze数据处理系统），美国 Waters公司制造；JL－360台式超声波清洗器，J ＆ L上海分公司制造；FA1004电子天平，上海精科天平厂制造；HH－4数显恒温水浴锅，常州国华电器有限公司制造；Millipore超纯水器，法国Millipore Molsheim公司制造；368－A电热恒温鼓风干燥箱，上海向阳无线电元件厂制造；AG135电子天平，瑞典 Metter Toledo公司制造；粉碎机，安徽省明光市光明电器厂制造。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［6］色谱柱 Hypersil C18（5μm，150 mm×4.6mm id）；流动相［7－9］：甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1mL／min；柱温：25℃；检测波长：280nm。

2.2 样品溶液的制备

2.2.1 黄芩及其炮制品的制备（1）生黄芩：称取干燥的黄芩饮片500g，去除杂质和霉变品，筛去灰屑，备用。（2）酒黄芩：称取生黄芩饮片100g，用10 mL黄酒拌匀，闷润至透，约6h左右，置热锅内，用文火炒至深黄色时，取出摊开放凉，筛去灰屑，备用。（3）焦黄芩：称取生黄芩饮片100g，置热锅内用中火炒至焦黄色，取出摊开放凉，筛去灰屑，备用。（4）黄芩炭：称取生黄芩饮片100g，置热锅内，用武火炒至表面焦黑色，内部焦黄色时，喷淋清水少许，灭尽火星，取出凉透，备用。

2.2.2 黄芩及其炮制品的粉碎 将生黄芩饮片和炮制好的黄芩饮片烘干，粉碎，过20目筛，待用。

2.2.3 样品溶液的制备 称取生药粉末（60℃干燥4h）1g，置烧瓶中，加50%甲醇50mL，水浴回流加热1h，趁热过滤，以适量50%甲醇洗涤容器和残渣两次，滤液全部并入100mL容量瓶中，然后再以50%甲醇补至100mL作为储备液。精密吸取1.0 mL，置10mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，然后过0.45μm滤膜两次，得黄芩生药样品溶液Ⅰ。其他3种炮制品也分别按生药样品溶液Ⅰ的制备方法处理，得酒炒黄芩样品溶液Ⅱ、焦黄芩样品溶液Ⅲ和黄芩炭样品溶液Ⅳ。

2.3 标准曲线的制备 称取黄芩苷标准品1mg，用50%甲醇溶解定容至10mL，得标准品溶液A（0.1mg／mL）。取标准品溶液A适量，分别稀释2倍、4倍、10倍、20倍，得标准品溶液 B（0.05mg／mL）、C（0.025mg／mL）、D（0.01mg／mL）、E（0.005mg／mL），均过0.45μm 滤膜1次，然后分别吸取A、B、C、D、E各20μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，峰面积积分值分别为12 996、6 315、3 179、1 312、658。以峰面积积分值Y为纵坐标，标准品溶液进样量X（μg）为横坐标进行回归，得回归方程为Y＝6391.863X＋9.651，r＝0.9986，线性范围为0.1～2.0μg。空白组、标准品及样品的色谱图见图1。

图1 对照品和样品的高效液相色谱图

2.4 精密度试验 取上述标准品溶液C，重复进样5次，每次20μL，记录峰面积分别为3 212、3 178、3 226、3 210、3 189，平均峰面积为3 203，相对标准偏差（RSD）为0.60%。

2.5 稳定性试验 吸取样品溶液Ⅰ20μL，每1.5h进样1次，共测定5次，记录峰面积分别为8 632、8 709、8 669、8 605、8 674、8 658，平均峰面积为8 658，RSD为0.46%，表明样品在7.5小时内稳定。

2.6 重复性试验 按样品提取方法分别制备5份黄芩生药样品溶液，然后各取20μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积分别为8 693、8 637、8 715、8 667、8 612，平均峰面积为8 667，RSD为0.48%。

2.7 样品含量测定 分别吸取样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各20μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，并计算样品溶液中黄芩苷含量，再重复操作2次，记录结果，见表1。

由试验结果可知，不同炮制方法对黄芩中黄芩苷成分的影响较大，生黄芩、酒炒黄芩、焦黄芩、黄芩炭中黄芩苷的含量依次降低。

表1 黄芩及其炮制品中黄芩苷的含量（%）

2.8 加样回收率试验 称取5份已知黄芩苷含量的生药粉末0.1g，分别加入精密称定的黄芩苷标准品0.55mg，然后按样品溶液制备方法处理，在同样的色谱条件下测定其中黄芩苷的含量，并计算回收率和RSD，记录结果，见表2。

表2 生黄芩中黄芩苷的回收率

3 讨论

3.1 在一定温度和湿度条件下，黄芩苷可被黄芩酶酶解成葡萄糖醛酸和黄芩苷元，而黄芩苷元不稳定，易被氧化。

3.2 黄芩酶以冷水浸润时其活性最大，故炮制前不能用冷水浸润处理，应沸水煮10min左右，以杀酶保苷。

3.3 黄芩苷遇光、热易分解变化。因此，提取时应控制受热温度、缩短受热时间，提取液应低温避光保存。

3.4 测定黄芩苷含量，须选用快速准确的测定分析方法－高效液相色谱法，既提高了黄芩苷的分离效果，与紫外分光光度计测定法相比，试验的准确度和精密度也得到提高。

3.5 黄芩苷有一定的脂溶性。在提取时采用醇作溶剂，大大增加了黄芩苷的溶出率。文献报道黄芩中黄芩苷的提取，可用70%乙醇［10］或50%甲醇［8］作溶剂，前者回流提取时间约3h，后者约需1h，由于本试验所用流动相中含有甲醇，所以选用50%甲醇为提取溶剂。

3.6 甲醇－磷酸水溶液为分离黄芩苷常用的流动相，通过试验得出0.04%的磷酸水溶液即可有效分离黄芩苷，此法简便可靠，故本试验采用甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）作为流动相，效果较好。

4 结论

试验结果表明，生黄芩饮片中黄芩苷含量最高，酒炒黄芩、焦黄芩、黄芩炭饮片中黄芩苷含量依次下降，表明不同的炮制方法对黄芩中黄芩苷的含量有很大的影响。

［1］《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编（上册）［M］.北京：人民卫生出版社，1975：759.

［2］Fusen.Studies on the Constitents of Scutellaria Species VI，on the Flavonoid Constitents of the Root of Scutellaria baicalensis GEORGI（5）Quantitative Analysis of Flavonoids in Scutellaria Root by High－Performance Liquid Chromatography［J］.Chromatography，1995，10（5）：148.

［3］K.Sagara.Simultaneous Determination of Baicalein，wogonin，oroxylin－a and their glucuronides in scutellariae radix by ionpair high－performance liquid chromatography［J］.Chromatography，1985，32（8）：289.

［4］王孝涛.历代中药炮制法汇编［M］.南昌：江西科学技术出版社，1998：127.

［5］叶定江，张世臣.中药炮制学［M］.北京：人民卫生出版社，1999：375.

［6］王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析［M］.北京：科学出版社，1999：319.

［7］相乐.用高效液相色谱法对黄芩中黄芩苷的定量［J］.医药品研究，1996，27：243.

［8］季逸云，黄启娟，刘柏年.高效液相色谱法测定茵栀黄注射液中黄芩苷的含量［J］.中成药，1997，19（3）：9.

［9］狄留庆，徐枢.HPLC法测定止喘雾化液中黄芩苷的含量［J］.中国现代应用药学，2000，17（1）：42.

［10］傅桂兰.HPLC法测定黄芩及其复方制剂中黄芩苷的含量［J］.中国中药杂志，1994，19（12）：731.