广东清远鹅弓形虫病血清学调查

王新秋，高 艳，李功勇，2，何 勇，袁子国，翁亚彪，林瑞庆

（1.华南农业大学兽医学院，广东 广州510642；2.广东省清远市动物卫生监督所，广东 清远511515）

弓形虫病是由孢子虫纲、弓形虫属的龚地弓形虫（Toxoplasmagondii）引起的一种寄生于动物或人的细胞内的多宿主原虫病，是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病［1－2］。弓形虫病在人群中流行范围广，全世界有约1／4人口受到感染，平均血清阳性率为25%～50%，甚至可高达85%以上［3］。龚地弓形虫血清学调查在许多国家都有研究［1－2］，并且在中国的许多省份也见报道，但禽类的报道相对较少［4－7］。尽管禽类感染弓形虫常呈亚临床症状或无临床症状，但禽作为其传播的中间宿主，在该病的传播中起重要作用［1］。广东是我国水禽的传统出口大省，而清远市是广东养鹅业的重要的生产基地，对弓形虫特异性抗体的检测可以揭示弓形虫在鹅群中的感染情况，有助于了解该病在广东地区以至我国养鹅业的流行情况，并有利于审时度势，提前预防，以减少病原对养鹅业及对社会的影响和危害，为更好的预防和控制此类寄生虫提供参考。

1 材料与方法

1.1 血清样品的采集 血清样品从广东省清远市12个鹅场（编号 MG1－MG8，BG1－BG4）不同日龄的鹅只，共520只，其中包括1～30日龄肉鹅，31～60日龄肉鹅和60日龄以上肉鹅各120只，91～360日龄种鹅和360日龄以上种鹅各80只（表1）。无菌采集受检动物的静脉血1.5～2.0mL，离心获得血清。

1.2 检测试剂 血清稀释液及抗原稀释液由本实验室自备保存。检测抗原由美国农业部动物与自然资源研究所Jitender Dubey教授惠赠。

1.3 方法 应用美国农业部动物与自然资源研究所Jitender Dubey教授所赠弓形虫抗原按常规方法进行抗体检测，反应在96孔微孔板上进行。抗原按500μL的抗原稀释液中加入7μL的2－巯基乙醇、10μL的伊文氏蓝和30μL的抗原的比例稀释备用。每孔加血清稀释液24μL，除阳性对照孔、阴性对照孔和空白对照孔之外，每孔加1μL的待检血清。在加入25μL稀释后的抗原。充分振荡后于37℃温育过夜。结果判定：判定“＋＋”以上的为阳性，“＋”以下的判定为阴性。

1.4 数据分析 应用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。

2 结果

被检520份鹅血清中，共检出弓形虫抗体阳性的9份，阳性率为1.73%。其中肉鹅血清360份，检出弓形虫抗体阳性2份，阳性率为0.56%，鹅场MG2和MG3各检出1例阳性血清，阳性率均为2.22%；种鹅血清160份，检出弓形虫抗体阳性7份，阳性率为4.38%，鹅场BG1、BG2、BG3和BG4的阳性率分别为：2.5%、5%、7.5%、2.5%，见表1。

表1 清远市鹅弓形虫抗体的血清学调查样品及结果

3 分析与讨论

由于弓形虫病的感染一般无特异性临床症状而难以确诊，病原分离限于机率及感染期不同等原因使得这一确诊方法不易达到预期目的，因此血清学诊断方法仍为目前主要的诊断方法。常见的血清学方法有染色试验（DT）、补体结合试验（CFT与CIT）、直接凝集试验（DAT）、间接凝集试验（IHAT）、乳胶凝集试验（LAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光抗体试验（IFAT）以及本试验所用的改良凝集试验（MAT）。MAT方法是在直接凝集试验的基础上经改良发展而来的，是目前检测禽弓形虫抗体最为特异、敏感的方法，其原理是用福尔马林浸泡的弓形虫速殖子和稀释的血清在微量“U”型板上反应，阳性样品产生凝集现象，而阴性样品将在孔底出现速殖子沉积团。由于试验前血清样品经2－巯基乙醇的处理将IgM 蛋白变性直接检测IgG抗体，使得MAT方法克服了直接凝集试验特异性不强的缺点；在抗原稀释液中加入伊文氏蓝染液，使得阴、阳性结果在蓝色背景下更容易观察，可直接用肉眼观察，不需任何仪器。鉴于上述优点，本方法已经广泛应用于禽弓形虫的流行病学调查、虫株分离以及临床检测［2］。

本次调查发现，清远市不同鹅场的鹅弓形虫抗体检测阳性率较低，与之前实验室的对清远散养鹅［7］调查的阳性率比较差异极显著（P＜0.01），造成这种差异可能的原因有以下几个方面：（1）本次调查样品来源于清远市的规模化养殖场，规模化养殖场能够有效控制环境因素，采用封闭式饲养管理，有利于疾病控制，也有利于药物的合理使用。（2）猫、犬等多种动物都可作为弓形虫的中间宿主，同时猫又为弓形虫的终未宿主，农村散养户犬猫活动较频繁，而规模化养殖场养犬猫的少，且能够有效控制其他中间宿主动物在养殖场的活动，有助于弓形虫病的控制。（3）由于本次调查样品量的限制，可能存在一些误差，故需加大样品量，进行进一步分析。在本次调查中，清远地区种鹅的弓形虫感染率明显高于肉鹅，差异显著（P＜0.05），可能与鹅的日龄和饲养管理不同等有关，肉鹅饲养周期相较于种鹅的要短很多，故而接触病原的机会相对地也更少；两种鹅的用途不一样，其饲养喂料、用药方式等也不尽相同。

本次调查有利于掌握广东省清远市鹅弓形虫病的流行情况，种鹅的感染率较之于肉鹅的要高，可能会给畜禽和人类健康带来威胁，应引起重视，采取进一步综合战略措施预防和控制鹅弓形虫病，减少对社会带来的危害。

［1］Dubey J P，Jones J L.Toxoplasma gondii infection in humans and animals in the United States［J］.Int J Parasitol，2008，38：1257－1278.

［2］Dubey J P.Toxoplasmosis in pigs－the last 20years［J］.Vet Parasitol，2009，164：89－103.

［3］于恩庶.弓形虫病学［M］.2版.福州：福建科学技术出版社，1992.

［4］Yan C，Yue C L，Yuan Z G，etal.Toxoplasma gondii infection in domestic ducks，free－range and caged chickens in southern China［J］.Vet Parasitol，2009，165（3－4）：337－340.

［5］Zou F C，Sun X T，Xie Y J，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii in pigs in Southwestern China［J］.Parasitol Int，2009，58：306－307.

［6］Huang C Q，Lin Y Y，Dai A L，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in breeding sows in Western Fujian Province，China［J］.Trop Anim Health Prod，2010，42：115－118.

［7］Yan C，Yue C L，Zhang H，etal.Serological Survey of Toxoplasma gondii Infection in the Domestic Goose（Anser domestica）in Southern China［J］.Zoonoses Public Health，2011，58（4）：299－302.