HPLC法同时测定维康松乳膏中氯霉素、地塞米松磷酸钠含量

第四军医大学西京医院药剂科 （西安710032）

王 超 肖 茜△ 杨志福 刘 渝 关 月朱艳荣 赵 超 文爱东▲

维康松乳膏为我院研制的院内制剂，已在第四军医大学第一附属医院临床应用近20年，其配方根据临床经验以及现代研究的不断改进而为含氯霉素、地塞米松磷酸钠等成分的外用复方制剂。为进一步控制维康松乳膏的质量，本文成功建立了以高效液相色谱法同时测定维康松乳膏中的两种主要成分氯霉素和地塞米松磷酸钠的方法。经方法学验证，所建立的方法具有良好的精密度和回收率，现报告如下。

仪器与试药

1 仪器 高效液相色谱仪Shi maduz LC-10 Avp（日本岛津）；紫外分光光度计Spectronic Genesys 2（美国）；PHS-3C型精密PH计（上海雷磁仪器厂）

1.1 试剂：维康松乳膏、空白乳膏基质（第四军医大学西京医院药剂科制备）；氯霉素对标品（中国药品生物制品检定所，100016-200813），地塞米松磷酸钠对照品（中国药品生物制品检定所，30555-200602），甲醇（色谱纯，天津彪仕奇科技发展有限，09099501）。

1.2 色谱条件：分析柱 Dia monsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：0.2%三乙胺（磷酸调p H至2.8）∶乙腈＝70∶30；检测波长240n m；流速：1.0 ml／min；室温；进样量：10μl。在此色谱条件下，主峰的理论塔板数为2326。

2 溶液的制备

2.1 对照品溶液的制备：精密称取氯霉素对照品2.0001 mg、地塞米松磷酸钠对照品2.0150 mg，分别置50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，既得对照品储备溶液。

2.2 样品溶液的制备：精密称取维康松乳膏2g，置100 ml量瓶中，加甲醇80 ml，置80℃水浴中加热至溶解，取出冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，迅速冷却2h以上，取出后立即滤过，取续滤液备用。

2.3 空白对照品溶液的配制：精密称取按处方量制备的不含各成分的空白基质0.5g，按样品溶液的制备方法操作，制成空白对照溶液。

3 检测波长的确定 按2010版药典中载录，氯霉素的最佳检测波长为277n m，地塞米松磷酸钠的最佳检测波长为242n m。依据维康松乳膏中，氯霉素含量比地塞米松磷酸钠较高，且响应值也较高，故采用240n m作为检测波长。

4 HPLC法专一性考察 分别将对照品溶液、空白基质溶液和样品溶液10μl注入高效液相色谱仪，在240n m处测定吸收峰面积，保留时间分别为3.8 min和4.9 min，其对照品，空白基质及样品的HPLC图谱见附图。

附图 氯霉素对照品（A）、供试品（B）、氯霉素阴性对照品（C）、地塞米松磷酸钠对照品（D）、地塞米松磷酸钠阴性对照品（E）的HPLC色谱图 （3.9 min：地塞米松磷酸钠的峰；4.9 min：氯霉素的峰）

5 标准曲线的制备 精密吸取上述对照品溶液，分别用甲醇制成含量为0.21 mg／m1，0.30 mg／m1，0.41 mg／m1，0.52 mg／m1，0.60 mg／m1的氯霉素标准溶液以及0.10 mg／m1，0.15 mg／m1，0.20 mg／m1，0.26 mg／m1，0.31 mg／m1的地塞米松磷酸钠标准溶液，在上述色谱条件下进行分析（n＝6），以标准对照品浓度（C）对峰面积进行线性回归，分别得：氯霉素回归方程：y＝79725x+53085，r＝0.9991；地塞米松磷酸钠回归方程：y＝125800x+129315，r＝0.999。求得分别求得氯霉素的含量为10.80 mg／g，地塞米松磷酸钠的含量为5.44 mg／g。

6 精密度试验 分别选择高、中、低3个标准浓度的氯霉素和地塞米松磷酸钠溶液，分别在日内和日间测定3次，计算日内和日间RSD%，结果见表1。

7 加样回收率试验 精密称取维康松乳膏2.0g，置100 ml容量瓶中，加甲醇80 ml，置80℃水浴加热至溶解，取出冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45？m）滤过，取续滤液。按同时测定色谱条件进样10？l测定峰面积，计算含量。取已知含量的样品溶液分别精密加入对照品溶液适量，搅匀后，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表2、表3。

8 样品测定 取精密称取3批维康松样品2.0g，按样品溶液制备方法配制后，在相同色谱条件下测定峰面积，带入回归方程计算含量。结果3批样品氯霉素含量分别为10.91 mg／g，10.72 mg／g，10.77 mg／g，5.74 mg／g，5.12 mg／g，5.45 mg／g。

表1 两组疗效比较

表2 氯霉素回收率测定结果（n＝6）

讨 论

目前，关于治疗各种皮肤疾病乳膏制剂的报道较多［1］，而在治疗用药上多选用氯霉素和地塞米松磷酸钠等。维康松乳膏是经多年的临床使用并不断改进的院内制剂，其主要成分中就含有用氯霉素和地塞米松磷酸钠。但能够同时测定这两种成分的方法却尚未见报道。

表3 地塞米松磷酸钠回收率测定结果（n＝6）

首先，本实验为了增加维康松乳膏的质量可控性，使实验操作更加方便，我们对乳膏的制样方法进行了优化。结果证明，本实验中所采用的制样方法不仅操作简单而且可将样品中的有效成分完全提取。80℃水浴对主要成分氯霉素和地塞米松磷酸钠均不产生影响，而甲醇的沸点是64.8℃，在这种情况下，样品很快溶解［2］。而且，由于重力和甲醇蒸汽的原因瓶壁上的样品快速溶解，而且较为充分。将溶解完全的液体迅速冷却静置2h后过滤，可使乳膏中的基质充分析出，排除了基质的干扰［3］。与此同时，还可以保护色谱柱，防止堵塞，大大延长了使用寿命［4，5］。

在该制样方法的基础之上，样品中的成分相对较为纯化，这就为使采用高效液相色谱法同时测定氯霉素和地塞米松磷酸钠更加容易实现。根据氯霉素和地塞米松磷酸钠的紫外吸收以及这两种成分在维康松乳膏中的含量我们选择240n m为检测波长，使同时检测的两个峰高接近。同时我们坚持流动相最简单的原则基础之上用磷酸调节p H使峰形得到了有效矫正。

［1］姬存武，胡文慧，姬文晨.派瑞松乳膏加特定电磁波辐射治疗湿疹疗效观察［J］.陕西医学杂志，2009，7：903.

［2］马惠玲，杨秀萍，左 莹.苹果渣蒸馏酒中甲醇去除方法的探究［J］.食品科学，2006，27：138-142.

［3］钱晓娟.紫外分光光度法测定盐酸丁卡因注射液的含量［J］.西北药学杂志，2003，18：6-7.

［4］Valenta C，Lexer A，Spiegl P.Analysis of clotri mazole in oint ments by high-perfor mance liquid chro matography［J］.Phar mazie，1992，47（8）：641-642.

［5］Di-Pietra A M，Cavrini V，Andrisano V，etal.HPLC analysis of i midazole anti m ycotic in drugs phar maceutical f ot mulations［J］.J Phar m Bio med Amal，1992，10（10-12）：873-879.