高效液相色谱法测定茵赤胶囊中芍药苷的含量

沈 萍 罗海保

江西省南昌市第九医院，江西南昌 330002

高效液相色谱法测定茵赤胶囊中芍药苷的含量

沈 萍 罗海保

江西省南昌市第九医院，江西南昌 330002

目的 建立测定茵赤胶囊中芍药苷的含量。 方法 采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱为Hyspersil C18，流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40∶65），检测波长为230 nm。 结果 平均加样回收率为101.72%，RSD=1.85%。结论 方法简便、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。

茵赤胶囊；芍药苷；高效液相色谱

茵赤胶囊是由茵陈、赤芍、丹参、山楂、苦参、麦芽、牛膝、泽兰、女贞子等中药经提取加工制成的中药胶囊制剂。经多年来临床应用，证明功效确切，疗效显著。为控制其质量，本研究采用HPLC法对方中赤芍所含的芍药苷进行了含量测定。该方法简便、快速、准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制标准。

1 仪器与试药

LC-ATP高效液相色谱仪；LC-ATVP紫外检测器；Hyspersil C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；METTLER AE240十万分之一天平；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110736-200628）；茵赤胶囊为本院经验方开发而成的医院制剂（批号分别为101014、101108、101211）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

参考《中国药典》2010年版中赤芍药材中测定芍药苷的色谱条件，LC-ATP高效液相色谱仪；LC-ATVP紫外检测器，用十八烷基键合硅胶填充剂，甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40∶65）为流动相，检测波长：230 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：室温；理论塔板数经多次结果显示按芍药苷峰计算不低于2 000。照上述色谱条件，芍药苷对照品和制剂中芍药苷与其他组分均能达到基线分离。进样量10 μL。阴性样品、对照品和供试品色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品20.94 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.418 8 mg/mL的对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10粒内容物，取细粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（120 W，40 kHz）60 min，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液经0.45 μm微孔滤膜滤过即得供试品溶液。

图1 芍药苷HPLC图谱

2.2.3 阴性品溶液的制备 参照茵赤胶囊处方，制备不含赤芍的阴性对照品胶囊，按照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。

2.3 专属性试验

取除赤芍以外的其他药材，按处方比例制得的阴性样品0.5 g，用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。在与供试品测定完全相同的条件下，精密吸取阴性对照液10 μL，注入液相色谱仪，结果阴性无干扰，说明在茵赤胶囊中，芍药苷的专属性较强。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品储备液制备得41.88、83.76、167.52、251.28、335.04、418.80 μg/mL 的系列对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，以对照品浓度C（mg/mL）为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：C=6.511×10-7A-0.005 3，r=0.999 9。 实验表明，芍药苷浓度在41.88～418.80 μg/mL范围内呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取浓度为251.28 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL。依法测得芍药苷峰面积RSD为1.26%（n=6），实验结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取批号为101108的供试品0.5 g，按“2.2.2”项下相同方法制备得供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10 h 分别进样 10 μL，依法测得芍药苷峰面积RSD为1.83%。结果表明供试品溶液室温放置10 h内稳定。

2.7 重复性试验

取批号为101108的茵赤胶囊约0.5 g，共6份，精密称定，按“2.2.2”项下相同的方法制备得供试品溶液，测得样品中芍药苷的含量RSD=1.88%，表明重复性良好。见表1。

表1 重复性试验

2.8 加样回收率试验

取批号为101211的茵赤胶囊约0.25 g，共6份，精密称定，分别置三角烧瓶中，各精密加入浓度为0.418 8 mg/mL的对照液6 mL，参照“2.2.2”项下方法制得供试品溶液，按样品相同方法测定芍药苷的含量，平均回收率为101.72%，测定结果见表2。

2.9 样品测定

取 3 个批号（101044、101108、101211）的茵赤胶囊约 0.5 g，每批2份，精密称定，分别按“2.2.2”项下相同的制备方法制成供试品溶液。按上述色谱条件，分别吸取10 μL注入液相色谱仪，依法测定，即得。见表3。

由上可知茵赤胶囊样品的平均含量为2.59 mg/粒，根据上述测定结果，暂定本品每粒按芍药苷含量计不得少于2.0 mg。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

参照《中国药典》2010年版一部及有关文献[2-3]中的方法，比较了甲醇、乙醇、50%甲醇、稀乙醇作为溶剂进行提取并测定，结果含量有一定差异。甲醇、乙醇提取的溶出成分中杂质较多，而50%甲醇提取的杂质峰较少，测得组分的峰形最好且芍药苷的含量最高，故确定以50%的甲醇为提取溶剂。

表2 加样回收率试验结果（n=6）

表3 含量测定结果

3.2 提取方法及时间的选择[2-3]

试验中过程中采取了加热回流提取和超声提取，经比较发现超声提取法测得的芍药苷的含量明显较高且提取时间短、提取物中杂质少。同时还对超声时间10、30、60 min进行考察，结果发现超声10 min和30 min的含量偏低，故采用超声60 min，提取效果较好。

3.3 流动相的选择

结合《中国药典》2010年版一部及有关文献[4-8]，对不同比例甲醇-水和甲醇-醋酸-水体系选择比较，发现制剂中芍药苷分离效果差，而以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40∶65）为流动相，分离效果最佳。

本研究采用HPLC法测定茵赤胶囊中芍药苷的含量，方法简便、快速、准确，重现性好，专属性强，可作为其质量控制的指标，为该药品的质量均一、可控提供了保障。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：96-1163.

[2]朱志峰，兰和楼，郭民生，等.HPLC法测定生命调节素口服液中芍药苷的含量[J].中国药品标准，2002，3（3）：31-32.

[3]林爱琴，蒋建露.HPLC法测定健胃消炎颗粒中芍药苷的含量[J].中国医药导报，2010，7（3）：54-56.

[4]王燕玲，陈惠芬.十全大补丸中芍药苷的含量测定[J].中国中药杂志，2006，31（11）：942.

[5]常丽影，赫玉芳，南敏伦，等.高效液相色谱法测定胃康灵胶囊中芍药苷的含量[J].时珍国医国药，2005，16（7）：596.

[6]国家药典委员会.国家药品标准新药转正标准第39册[S].中国药品标准，2011，12（5）：34-36.

[7]徐玉婷，卢金清，万威，等.HPLC法测定银芍颗粒中芍药苷的含量[J].湖北中医杂志，2008，30（4）：12-15.

[8]杨丽.HPLC法测定千金止带丸中芍药苷的含量[J].中国药事，2007，21（6）：422.

Determination of Paeoniflorin in Yinchi Capsule by HPLC

SHEN Ping LUO Haibao
The Ninth Hospital of Nanchang,Jiangxi Province,Nanchang 330002,China

ObjectiveTo establish a method for determination of Paeoniflorin in Yinchi Capsule.MethodsThe column of Hyspersil-C18was used,the mobile phase was Methanol-0.05 mol/L Potassium dihydrogen phosphate solution(40∶65),and the peak was detected at 230 nm.ResultsThe average recovery was 101.72%,RSD=1.85%.ConclusionThe method is easy to operate with accurate result and good reproducibility.It can be used for quality control of this preparation.

Yinchi Capsule;Paeoniflorin;HPLC

R283.6

A

1673-7210（2012）08（c）-0111-02

沈萍（1966.6-），女，本科，学士，副主任药师；研究方向：中药制剂质量标准。

2012-03-20 本文编辑：卫 轲）