进展期胃癌组织中EGFR和PI3K的表达及相关性

宫海涛 程永远 程鸽 辛玲 王雪梅 姜慧峰

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率在世界范围居第二位［1］，严重威胁人类的健康和生命。胃癌也是消化系统最常见的恶性肿瘤，居我国恶性肿瘤病死率第一位。由于大多数患者在确诊时已属进展期，传统的手术及放化疗整体疗效不佳。靶向治疗是近年来肿瘤治疗领域中的研究热点，已在肿瘤治疗中显示出高效、低毒等特点。本研究应用免疫组化法检测EGFR和PI3K在进展期胃癌组织中的表达情况，探讨二者表达的特点及其相关性，为以EGFR和PI3K为靶点的生物制剂在进展期胃癌中的应用及联合应用提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 标本来源收集潍坊医学院附属莱阳中心医院2004年1月到2005年10月间手术切除并经病理检查证实的进展期胃癌石蜡包埋组织标本68例。所有患者术前均未接受放化疗。术后病理诊断为胃腺癌。68例患者中位年龄49岁(36～69岁)，≤60岁47例，＞60岁21例。男45例，女23例，男女比例1.96∶1。按WHO分类标准高分化腺癌19例，中低分化腺癌49例。有淋巴结转移46例，无淋巴结转移22例。按照AJCC(第7版)胃癌分期系统，Ⅱ期22例，Ⅲ期30例，Ⅳ期16例。并选择同期胃溃疡病例正常胃切除标本15例作为对照组。标本取材大小0.5 cm×1.0 cm×0.5 cm，组织标本用10%甲醛固定。所有患者术前均未接受放化疗。

1.2 试剂与方法 EGFR鼠源性人单克隆抗体和PI3K鼠源性人单克隆抗体由福州迈新生物技术公司提供。采用免疫组织化学SABC法，具体操作步骤如下:石蜡切片逐级脱蜡至水，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶10 min，高温高压热修复，2%牛血清封闭20 min，滴加一抗(EGFR稀释浓度为1∶100;PI3K稀释浓度为1∶50)，湿盒内4℃冰箱孵育过夜后滴加二抗，室温20 min，滴加辣根酶标记的链霉素，DAB显色，脱水，透明，封片。结果判定后再进行苏木素复染细胞核。以磷酸盐缓冲液(PBS)替代第一抗体作为阴性对照。

1.3 评定标准 由两位有临床经验的病理科医生对免疫组化结果进行判读。EGFR和PI3K阳性染色均为淡黄色、棕黄色或棕褐色，定位于细胞质或细胞膜。采用二级计分法，根据细胞染色程度分类:无着色为0分，淡黄色为1分，黄或棕黄色为2分，棕褐色为3分;根据阳性细胞所占5个以上高倍视野比例计数分为5类:5%以下为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，76%以上为4分。根据二者乘积判断阳性等级:0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS 13.0统计软件处理，样本率的比较使用χ2检验，相关性用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR和PI3K的表达 本研究表明，EGFR的阳性表达呈棕黄色或棕褐色，主要定位于细胞膜上，PI3K的阳性表达呈明显棕黄色，主要定位于定位于细胞核和部分细胞质上。EGFR和PI3K的阳性表达率分别为58.82%(40/68)和76.47%(52/68)。在正常胃组织中无表达。胃癌组织中EGFR阳性表达率:在有淋巴结转移胃癌组织中为73.91%较无淋巴结转移27.27%明显高(P＜0.05);TNM分期Ⅲ期、Ⅳ期的胃癌为67.39%较Ⅱ期36.36%高(P＜0.05);在有远处转移胃癌组织中为81.25%较无远处转移51.92%高(P＜0.05)。由此可见，EGFR的阳性表达与胃癌淋巴结转移、TNM分期和远处转移密切相关，而在浸润深度和分化程度等方面无差异。PI3K在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中的阳性表达率分别为63.64%(14/22)、80.00%(24/30)、87.50%(14/16)，临床分期越晚，PI3K阳性表达率也越高(P＜0.05)，PI3K在高分化、中分化和低分化胃癌组织中阳性表达率分别为63.16%(12/19)、76.92%(20/26)、86.96%(20/23)，分化越差PI3K表达越强，但无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 进展期胃癌中EGFR和PI3K的表达及与临床病理的关系(例，%)

2.2 EGFR和PI3K表达的相关性分析 52例PI3K表达阳性胃癌组织中有25例EGFR表达阳性，阳性率为48.08%，16例PI3K表达阴性病例中有3例EGFR表达阳性，阳性率仅为18.75%，PI3K表达阳性胃癌组织中EGFR阳性表达明显高于PI3K阴性者(P＜0.05)，即二者在进展期胃癌组织中表达同时阳性的百分率较高，表明二者在进展期胃癌中有共同表达现象。Spearman等级相关分析表明，进展期胃癌组织中EGFR表达和PI3K之间具有显著相关性(P＜0.05)。

3 讨论

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor，EGFR)广泛表达于表皮细胞和基质细胞、部分神经胶质细胞和平滑肌细胞，在调节细胞生长和组织修复中起十分重要的作用。EGFR是受体型酪氨酸蛋白激酶，它与相应配体结合以后，主要通过PI3K通路将信号传入细胞核，从而调节细胞的生长和分裂，进而引起肿瘤细胞增殖、增加新生血管生成、促进肿瘤浸润和转移。因此，高水平EGFR反映了肿瘤的高增殖、高恶性度、高术后复发率及预后不良。近年来，多篇文献［2-8］报道EGFR在胃癌组织中存在过度表达，过度表达率基本在40% ～65%之间，而对照组［3，4］正常胃黏膜组织中EGFR无阳性表达，阳性率为零。据此可以确定在正常胃组织中EGFR的表达很低，而在胃癌组织中存在着过度表达。本研究EGFR在胃癌组织中的表达率为58.82%(40/68)，其过度表达率明显高于正常胃组织，且与肿瘤的淋巴结转移、远处转移和临床TNM分期有关。因此，EGFR过度表达可作为判断胃癌预后不良的重要指标。

磷脂酸肌醇-3激酶(PI3K)是由Sugimoto等于1984年发现的一种胞内磷脂酰肌醇激酶，是磷脂激酶家族中的一个重要成员，具有脂类激酶活性和蛋白激酶活性，通过多种途径进行与细胞生长及存活有关的信号传导。国内外研究发现PI3K在卵巢癌［9，10］发生、发展中起重要作用。PI3K是T淋巴细胞内重要的信号传导分子，通过激活下游底物蛋白激酶B(Akt)介导的信号传导通路，具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进骨架蛋白重排、促进细胞间粘附等功能。本研究PI3K在进展期胃癌组织中表达率为76.47%(52/68)，呈过度表达特征，明显高于正常胃组织，差异有显著性，提示PI3K的高表达与胃癌的形成及进展有关。

本实验研究了进展期胃癌组织中EGFR和PI3K表达的相关性，在进展期胃癌组织中EGFR和PI3K二者存在着共同高表达现象。实验结果经过Spearman等级相关分析表明，进展期胃癌组织中EGFR和PI3K具有显著正相关。对二者病理特点及其相关性的研究为靶向EGFR抑制剂和靶向PI3K抑制剂在进展期胃癌综合治疗中的应用或联合应用提供了一定的分子学依据。

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