替米沙坦对大鼠糖尿病肾病中PPARγ途径的作用

邵建苹 李学庆 柏琳 孙艳玲

替米沙坦对大鼠糖尿病肾病中PPARγ途径的作用

邵建苹 李学庆 柏琳 孙艳玲

目的 观察替米沙坦对大鼠糖尿病肾病中PPARγ途径的作用。方法 予替米沙坦治疗大鼠糖尿病肾病。结论 替米沙坦可能通过PPARγ途径对糖尿病肾病中肾脏损伤起保护作用。

替米沙坦;糖尿病肾病;PPARγ途径

许多研究表明，在糖尿病肾病的状态下，肾脏组织中的血管紧张素水平和内皮素-1水平明显升高，这两种活性物质通过许多机制参与了糖尿病肾病的发生与进展，其中很重要的一个机制是激活细胞中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路。此外，近年的研究表明，应用噻唑烷二酮类药物(TZDs)激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)能够改善肾脏病变。替米沙坦可高选择性地作用于血管紧张素AT1受体，它与胰岛素增敏剂吡格列酮有类似的结构，有研究证明它可以部分激活PPAR-γ，而且这种作用并不依赖于血管紧张素Ⅱ受体的阻滞作用，在缺乏血管紧张素受体的情况下这些分子仍能在细胞内激活PPARγ，影响PPARγ靶基因的表达。此外，激活PPARγ可以减少AT1基因的表达，并能抑制血管紧张素Ⅱ对细胞内信号传导途径的影响。我们采用链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型，观察糖尿病状态下肾脏中PPARγ途径的变化，以及替米沙坦对该途径的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雄性SD大鼠20只，体重180～200 g，月龄2～3个月，由哈尔滨兽研中心提供。适应2周后在氯胺酮(50 mg/kg，腹腔内注射)麻醉下行右肾切除术以加速糖尿病肾病模型的形成。2周后予以枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，PH4.5)新鲜配置的链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射造模，第72小时测血糖，超过16.7 mmol/L者为造模成功，测尿蛋白阳性后考虑为糖尿病肾病，随机分为模型组及治疗组。治疗组给子替米沙坦3 mg/(kg·d)灌胃，模型组予以等量生理盐水灌胃，共12周。第12周末处死大鼠，沿腹中线切开取双侧肾脏，沿冠状线将肾脏分成两半，再沿冠状面将肾脏继续切分。剥离肾脏被膜，去除周围脂肪组织，迅速置于液氮中速冻，再移入-80℃冰箱保存，进行RT― PCR检测。

1.2 RT-PCR检测

均采用TRIzol试剂一步抽提总RNA，再逆转录成cDNA，以适量cDNA为模板，在TagDNA聚合酶(华美公司)催化下行PCR，引物由生物公司设计。PPARγ的引物序列为正链：5'-TCC GTG ATG GAA GAC CAC TC-3';负链5'-CCC TTG CAT CCT TCA CAA GC-3'。扩增条件为95℃3 min 进入循环，94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，32 个循环后，72℃延伸5 min，终产物为332bp。以GAPDH作为内参照进行校正，以目的基因片断/GAPDH片断的条带光密度比值代表目的基因的相对表达含量，进行半定量PCR分析。

1.3 统计学分析

所有数据均采用SPSS 13.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差(s)表示。重复测量资料采用重复测量资料的方差分析(单变量方差分析，univariate ANOVA)。P＜0.05为差异具有统计学意义，P＜0.01为显著性差异。

2 结果

模型组表达增多，治疗组表达与模型组相比明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

表1

3 讨论

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是一类配体激活的核内受体转录因子，近年来发现它参与调节细胞的生长分化及凋亡、炎症反应、脂肪酸及脂类代谢等，并且与许多疾病，如2型糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、高血压、肿瘤等密切相关，因而成为研究的热点。其亚型PPARγ与肾脏病的关系最为密切，它可通过抑制炎症因子、改善脂类代谢及胰岛素抵抗、影响血流动力学等方面保护肾脏。

替米沙坦是一种新型的非肽类ARB类药物，可高选择性地作用于血管紧张素AT1受体，对AT1受体的作用强度较之AT2强约20000倍，选择性高于同类产品，其作用较氯沙坦强6倍。它是目前临床上所应用的半衰期最长、分布容积最大、经肾脏排泄最少的ARB类药物。

目前有研究证明替米沙坦可以部分激活PPARγ，而且这种作用并不依赖于血管紧张素Ⅱ受体的阻滞作用，在缺乏血管紧张素受体的情况下这些分子仍然能在细胞内激活PPARγ，影响PPARγ靶基因的表达。而其他ARB类药物没有此种作用。通过对PPARγ RT-PCR的检测发现其在治疗组的表达与模型组相比明显减少，由此推测，替米沙坦除了有拮抗血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)的作用外，还有可能通过PPARγ途径对糖尿病肾病中肾脏损伤起保护作用。在损伤状态下PPARγ表达增强可能是机体保护性的代偿反应，使之易于被内源性的配体活化，对抗细胞增殖及炎症反应。然而PPARγ表达上调可被替米沙坦抑制，可能由于PPARγ的过度应激有可能导致肾脏固有细胞过度凋亡，对机体损伤的恢复不利，因此配体对受体的反馈抑制作用也可能是机体适应性的调节反应，而其机制等方面的探讨则需进一步研究加以证明。

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163453 油田总院集团大庆龙南医院(齐齐哈尔医学院第五附属医院)