健康人口服奥硝唑片的药代动力学研究

姜芳宁 刘光斌 邹干朋 杨立顺

（甘肃省嘉峪关市酒钢医院，甘肃 嘉峪关735100）

奥硝唑是继甲硝唑和替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑类衍生物，比甲硝唑和替硝唑疗效更强，体内分布更广，临床常用于厌氧菌感染和滴虫感染等的治疗[1]。本文采用HPLC 测定健康人口服奥硝唑片的血药浓度并进行药物代谢动力学（药动学）特征的研究。

1 材料和试剂

LC-2010 AHT 型高效液相色谱仪（日本岛津）；LC solution 色谱工作站（日本岛津）；AUY220 电子分析天平（日本岛津）；TG16-W 型台式高速离心机（沪康）。

奥硝唑片（浙江爱生药业有限公司，批号：20100406，规格：0.25 g/ 片）；奥硝唑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100608-200301）；甲醇、乙腈为色谱纯；实验中溶液配制均使用新制纯化水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Inertsil ODS-SP 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），流动相∶甲醇-水（28∶72），流速1.0 mL/min，紫外检测波长316 nm，柱温30 ℃，进样体积20 μL。

2.2 专属性考察

图1 人血浆中奥硝唑的HPLC 图

血浆样品按本法分离测定所得结果表明，空白血浆对测定无干扰，采用外标法定量，奥硝唑保留时间为8.758 min，见图1。

2.3 受试者的选择

12 名健康志愿者（男性6 名，女性6 名），年龄20 ～30 岁，平均体重（62.46±8.66）kg，无急、慢性疾病及家族遗传病史，实验前2 周无用药史，查体肝肾功能及各项实验相关检查正常，实验期间禁烟、酒、茶和含咖啡的饮料，各受试者均为自愿参加，经医院伦理委员会讨论通过，在实验前由受试者本人签署知情同意书。

2.4 给药与样品采集

志愿者实验前禁食12 h，受试当天清晨空腹顿服奥硝唑片1 g，饮水200 mL，2 h 后统一进食早餐。于服药前0 h和 服 药 后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24、48、72 h 取肘静脉血3 mL。

2.5 血浆样品处理

精密吸取血浆样品0.5 mL，置1.5 mL 离心管中，加乙腈1 mL，旋涡振荡3 min，离心（4 000 rpm）10 min，取上清液置1.5 mL 离心管中，离心（13 000 rpm）5 min，取上清液用0.22 μm 微孔滤膜滤过，进样20 μL。

2.6 标准曲线的制备

2.6.1 标准溶液的配制 精密称取奥硝唑对照品25.2 mg加纯化水配制成252 mg/L 的标准溶液，置4 ℃冰箱中保存备用，用时以水稀释成不同浓度的奥硝唑系列溶液。

2.6.2 标准曲线的制备 取健康人空白血浆0.25 mL 5份，分别加入不同浓度的奥硝唑标准溶液，使血浆浓度分别为2.52、5.04、10.08、15.12、20.16 mg/L。按“2.4”项下的方法进行处理，经HPLC 测定奥硝唑血浆浓度。以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标进行回归，得标准曲线：A=51 395.7C－13 466.4（n= 5，r= 0.999 8）。奥硝唑血药浓度在2.52 ～20.16 mg/L 范围内与峰面积之间有良好线性关系。定量下限为2.52 mg/L，信噪比以S/N = 3∶1 计，最低检测限0.50 mg/L。

2.7 提取回收率

在空白血浆中加入不同量的奥硝唑标准溶液，配制成高、中、低（2.52、10.08、20.16 mg/L）3 个浓度样品，采用“2.4”项下的方法提取后进样测定，每个浓度样本重复5次，求得平均回收率分别为（101.03±0.02）%（RSD=0.85%）、（100.14±0.03）%（RSD= 0.28%）、（99.98±0.02）%（RSD= 0.12%）。

2.8 精密度

取奥硝唑标准溶液高、中、低（2.52、10.08、20.16 mg/L）3 种浓度样品，1 个浓度同1 日分5 次测定，计算日内变异率分别为（2.53± 0.02）（RSD= 0.85%）、（10.05± 0.03）（RSD= 0.28%）、（20.14±0.02）（RSD= 0.12%）。并于不同的5 d 分别测定，计算日间变异率分别为（2.51±0.02）（RSD= 0.85%）、（10.05±0.03）（RSD= 0.32%）、（20.20±0.31）（RSD= 1.52%）。均满足生物样品分析方法的要求。

2.9 样品稳定性实验

制备奥硝唑血浆浓度分别为2.52、10.08、20.16 mg/L的低、中、高3 种浓度的血浆样品，分别在室温条件下放置8 h，-20℃冰冻24 h 后室温融化，反复冻融3 次，取样测定，考察其稳定性。结果3 种浓度血浆样品测得的RSD均小于8%，表明血浆样品在上述条件下均稳定。

2.10 平均药-时曲线

采用SPSS 12.0 软件进行统计学分析，12 名健康受试者单剂量口服奥硝唑片1 g 后的结果见图2。

图2 健康受试者口服1g 奥硝唑片后的平均药-时曲线（n=12）

2.11 药物动力学参数

采用3p97 程序软件进行药代动力学拟合计算。计算过程按最佳拟合模型选择模型和权重。由血药浓度计算出药物动力学参数（见表1）。结果表明，单次口服奥硝唑片在血浆中的分布符合一室模型。

药动学参数 数值Ke（1/h） 0.05 ±0.01 Ka（1/h） 18.80 ±23.50 T1/2(Ka)（h） 0.14 ±0.24 T1/2(Ke)（h） 15.61 ±1.87 Tpeak（h） 0.76 ±1.18 Cmax（mg/L） 20.55 ±3.02 AUC0-∞（mg.h/L） 474.07 ±63.21 Cl（L/h） 2.15 ±0.31 V/F（L） 48.04 ±6.68

3 讨论

3.1 据文献报道[2]，实验中选用乙腈沉淀处理血样，经1次提取后，直接取上清液进样进行紫外色谱分析，方法简便，沉淀快速、完全，达到了生物样品分析的要求，能保证色谱柱进行大量样品的连续分析，可为临床上奥硝唑血药浓度监测提供参考。

3.2 本实验采用HPLC 测定奥硝唑的血药浓度简便、稳定、灵敏，可满足药动学研究的需要。由表1 可见，12 名健康志愿者药代动力学参数Ka、T1/2(Ka)、Tpeak差别较大，吸收相各受试者在相同时间点血药浓度各不相同，标准偏差较大，不同个体之间差别较明显，这与实验中吸收相取点过少有关。

3.3 12 名健康志愿者单剂量口服奥硝唑片1 g 后，在实验期间未发现明显不良反应，全部受试者均未影响实验过程。

[1] 杨玉平，陈笑，姚飞，等. 甲硝唑、替硝唑和奥硝唑的拉曼光谱研究[J].中央民族大学学报（自然科学版），2010，19（4）：26-29.

[2] 蔡震.奥硝唑血药浓度的高效液相色谱法测定[J].现代医药卫生，2008，24（5）：655-657.