灯盏花素对小鼠化学性记忆障碍的改善作用

翟泽玲，颜 勇，商亚珍

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院 中药研究所，河北 承德 067000)

老年性痴呆是一种进行性神经退行性疾病，以功能性神经元退化并在脑病理区出现老年斑、神经纤维缠结和神经元丢失为特征，而学习、记忆障碍是老年性痴呆普遍而严重的表现［1］。目前动物实验采用脑缺氧，某些化学试剂等方法引起动物不同时程记忆缺陷模拟老年痴呆病［2-3］，来研究药物治疗老年性痴呆病的作用。

灯盏花素为血管保护药，能够对抗脑垂体后叶素所致的神经缺血、缺氧。本实验采用戊巴比妥钠和亚硝酸钠引起小鼠记忆获得和记忆保持障碍模型研究了灯盏花素对小鼠学习、记忆的作用。

1 材料

灯盏花素，吉林省辉南辉发制药股份有限公司;戊巴比妥钠，丹麦-中国医药公司北京公司生产分装;亚硝酸钠，天津市北辰骅跃化学试剂厂。

小鼠水迷宫由中国医学科学院药物研究所提供。

雄性昆明种小鼠，18～22 g，清洁级，河北医科大学动物饲养中心提供，合格证编号:703119。

2 方法

2.1 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的作用

小鼠40只，随机等分为5组:空白对照组、戊巴比妥钠模型组、灯盏花素高、中、低剂量组。灯盏花素高、中、低剂量组分别皮下注射5，10和20mg/kg灯盏花素，1次/d，给药7d;空白对照组和戊巴比妥钠模型组给等体积水。在第7天给药40 min后，令小鼠熟悉水环境3 min。第8天，在皮下注射药物40 min和腹腔注射戊巴比妥钠15mg/kg后30 min，各组小鼠进行水迷宫测试，记录小鼠到达终点平台的时间(潜伏期)和进入盲端的次数，每天上下午各测试1次，小鼠学习成绩取两次平均值，连续测试5 d。

2.2 灯盏花素对亚硝酸钠引起小鼠记忆保持障碍的作用

小鼠40只，随机等分5组:空白对照组、亚硝酸钠组、灯盏花素高、中、低剂量组。灯盏花素高、中、低剂量组分别皮下注射5，10和20mg/kg灯盏花素，1次/d，连续给药7d;空白对照组和亚硝酸钠组给等体积水。第8天开始，每天给药30 min后，进行水迷宫训练，上下午各训练一次，学习成绩取两次平均值。当所有小鼠到达终点平台的潜伏期的时间少于20 s，进入盲端的次数小于2次时，小鼠训练即达标，可进行记忆保持障碍实验。达标后的小鼠立即腹腔注射亚硝酸钠120mg/kg(空白对照组腹腔注射等体积水)，24 h后进行水迷宫测试，记录各小鼠到达终点平台的潜伏期以及进入盲端的次数。

2.3 统计学处理

数据用one-way ANVOA Duncan's multiple rang test进行统计学比较。

3 结果

3.1 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的改善作用

结果见表1～2。在连续5 d的小鼠水迷宫记忆获得测试中，与空白对照组相比，戊巴比妥钠明显引起小鼠记忆获得障碍，戊巴比妥钠组小鼠到达终点平台潜伏期和进入盲端次数显著增加(P＜0.01);灯盏花素高、中、低剂量组显著抑制戊巴比妥钠引起的小鼠记忆获得障碍，均能降低戊巴比妥钠引起的小鼠到达终点平台的潜伏期和进入盲端的次数(P＜0.01或0.05)。

3.2 灯盏花素对亚硝酸钠引起小鼠记忆保持障碍的改善作用

结果见表3。在小鼠水迷宫测试中，与空白对照组相比，亚硝酸钠明显增加训练达标小鼠到达终点平台的时间(1.97倍)和进入盲端的次数(1.71倍)，灯盏花素高、中、低剂量组均显著翻转亚硝酸钠引起小鼠记忆保持障碍，到达终点平台的时间分别降低了24.5%，105.2% 和237.0%;进入盲端的次数分别降低了7.1%，231.9%和150.0%。

表1 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的作用(n=8，±s)

表1 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的作用(n=8，±s)

与空白对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2 P＜0.05，3 P＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg)潜伏期/s第1天第2天第3天第4天第5天空白对照组 － 50.9±3.6 43.8±5.5 28.5±5.3 22.6±5.9 12.4±1.7模型组 － 57.5±1.71 48.6±4.21 44.8±3.61 34.1±5.01 29.4±6.91灯盏花素组 5 54.4±3.92 47.0±4.12 28.7±4.42 19.6±4.32 18.5±3.42 10 51.5±5.63 42.2±4.63 36.9±5.73 14.2±1.73 20.6±4.53 20 44.5±5.53 28.0±5.73 26.1±7.03 13.2±1.53 15.1±3.33

表2 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的作用(n=8，±s)

表2 灯盏花素对戊巴比妥钠引起小鼠记忆获得障碍的作用(n=8，±s)

与空白对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2 P＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg)进入盲端次数/次第1天第2天第3天第4天第5天空白对照组 － 4.19±0.79 3.25±0.77 1.69±0.47 1.25±0.37 0.62±0.23模型组 － 6.63±0.611 5.94±0.501 4.00±0.741 3.19±0.711 1.88±0.741灯盏花素组 5 3.50±0.602 2.94±0.442 1.44±0.272 0.87±0.352 0.50±0.192 10 4.06±0.492 3.31±0.392 2.31±0.522 0.81±0.212 0.75±0.212 20 3.31±0.412 1.75±0.402 1.44±0.632 0.94±0.562 0.62±0.302

表3 灯盏花素对亚硝酸钠引起小鼠记忆保持障碍的作用(n=8，±s)

表3 灯盏花素对亚硝酸钠引起小鼠记忆保持障碍的作用(n=8，±s)

与空白对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2 P＜0.05，3P＜0.01

组 别 剂量/(mg/kg) 潜伏期/s 进入盲端次数/次空白对照组 － 19.4±4.9 2.28±0.49模型组 － 38.7±8.21 3.75±0.531灯盏花素组 5 31.1±4.32 3.50±0.652 10 18.9±5.03 1.13±0.353 20 11.5±1.33 1.50±0.573

4 讨论

老年性痴呆是一种多病因参与的神经减退性疾病，临床以大脑皮质获得性高级功能受损即痴呆为主要特征［4］。脑内老年斑的形成、神经纤维缠结、神经元丢失以及脑内自由基系统、神经递质失衡等都与老年性痴呆的发生密切相关。中枢神经系统兴奋性也直接影响学习、记忆，中枢兴奋剂有利于促进学习、记忆;中枢抑制剂阻抑学习、记忆的获得。戊巴比妥钠是神经系统抑制剂，能够引起动物记忆获得障碍［5］。神经缺氧也是引起学习、记忆障碍的重要因素，亚硝酸钠是一种致缺氧剂，进入机体后引起高铁血红蛋白血症，高铁血红蛋白与羟基牢固结合，不能与氧结合，造成脑和全身性缺氧，抑制ATP的生成，而神经系统对ATP有极强依赖性，因而亚硝酸钠也能够引起学习、记忆障碍。

本实验采用小鼠连续5 d腹腔注射15mg/kg戊巴比妥钠和单剂量腹腔注射120mg/kg亚硝酸钠分别制备小鼠记忆获得和记忆保持障碍模型来研究灯盏花素抗痴呆改善记忆障碍的活性。结果发现，灯盏花素对戊巴比妥钠和亚硝酸钠引起的小鼠记忆获得和记忆保持障碍都有明显的改善作用。灯盏花素是黄酮类化合物灯盏花乙素和灯盏花甲素的混合物，对心脑血管损伤具有较强的保护作用，特别是对自由基系统调节和炎症的对抗作用［6-7］，都有利于对学习、记忆功能障碍的改善。本实验结果结合我室以前的研究［8］表明灯盏花素极有可能对老年性痴呆的治疗作出贡献。

［1］沈丽霞，王继峰.益智方对急性衰老模型小鼠记忆障碍的作用［J］.中国老年学杂志，2007，27(3):206-207.

［2］宁 炼，戴向东，毛 平.心智合剂对痴呆及记忆障碍模型动物模型的实验研究［J］.中成药，1996，18(1):32-33.

［3］缪 红，程建军，石艳华，等.老年性痴呆病的疾病信号及常用动物模型［J］.承德医学院，1996，24(1):79-82.

［4］李 潇，孙永福，王凤山.低分子多糖在阿尔茨海默病防治中的研究进展［J］.中国生化药物杂志，2009，30(5):344-347.

［5］竺心影，王敏伟，刘国卿，等.药理学［M］.北京:人民卫生出版社，1999:180.

［6］万海同，王 玉.灯盏花素治疗脑缺血作用的研究进展［J］.浙江中医学报，2006，30(1):101-103.

［7］王望东，宋慧琴，李 玲.灯盏花素对急性心肌梗死患者血清超敏C-反应蛋白的影响［J］.中国生化药物杂志，2010，31(6):412-413.

［8］石艳华，缪 红，苏丙凡，等.灯盏花素对D-半乳糖引起小鼠记忆障碍的改善作用［J］.时珍国医国药，2008，19(6):1445-1446.