当归多糖对地塞米松所致肝损伤的干预作用

2012-11-17刘娟

中国生化药物杂志 2012年1期

刘娟

(武汉科技大学医学院，湖北武汉 430065)

当归是我国的一味传统中药，具有活血补血、润肠调经、扶正固本之功效，素有“十方九归”之说。从当归中提取的当归多糖(Angelica Sinensis polysaccharides，ASP)具有丰富的生物学活性，包括影响造血系统、调节免疫、促进胃溃疡愈合等［1-4］。在我们的前期研究中发现，ASP对酒精所致的肝损伤具有明显的保护作用［5］。在此基础上，我们从甘肃岷县新鲜当归中提取分离出了多糖含量较高的ASP，进一步观察其对临床常用的糖皮质激素类药物地塞米松(dexamethasone，DEX)所致肝损伤是否亦具有干预作用，并初步探讨其可能的机制。

1 材料

当归购于甘肃岷县康达有限责任公司，经水煮-醇沉法得当归粗多糖，经Sevag法去蛋白，醇沉，冷冻干燥10 h，得ASP，为浅米灰色疏松状粉末，测得其总糖含量为96.8%［6］。

地塞米松磷酸钠注射液，武汉滨湖双鹤药业公司;异柠檬酸、异柠檬酸脱氢酶、氧化型辅酶Ⅱ(NADP)、还原型谷胱甘肽(GSH)、二硫双硝基苯甲酸(DTNB)，Sigma公司;血清谷丙转氨酶(sALT)、血清谷草转氨酶(sAST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所;酶法葡萄糖测定试剂盒，上海科欣生物技术研究所;胰岛素放免测定试剂盒，北方生物技术研究所。

Himar CF15R低温高速离心机，日本HITACH;UV-1601紫外可见分光光度计，日本岛津公司。

昆明种小鼠，雄性，SPF级，体重20～22 g，湖北省医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号:2003-0005。

2 方法

2.1 动物分组

动物随机分为4组，每组8只:空白对照组、DEX模型组、ASP小剂量组(100mg/kg)及大剂量组(200mg/kg)，灌胃给药，ASP组给予相应剂量的ASP，另两组给予等体积生理盐水，1次/d，共10 d。从第4天起，各组均皮下注射 DEX 12mg/kg，1次/d，共7d。末次给药6 h后，断头处死动物。

2.2 标本制备

小鼠摘眼球取血，制备血清，置于－20℃保存。迅速剖腹取肝脏，置于冰冷生理盐水中反复漂洗，滤纸吸干，称重。采用pH 7.4，50 mmol/L Tris-HCl缓冲液制备肝匀浆。9 000 r/min离心20 min，取上清液，为小鼠肝脏S9组分，－80℃冻存。

2.3 检测指标

按照试剂盒说明书检测sALT、sAST及肝组织SOD、MDA含量。DTNB比色法测定肝组织GSH含量。GOD-PAP葡萄糖氧化酶法测定血糖。蒽酮法测定肝糖原含量。放射免疫法测定血清胰岛素。Lowry法测定蛋白含量。以苯胺为底物，测定小鼠肝脏S9组分的苯胺羟化酶(ANH)以反映CYP2E1活性。

2.4 统计方法

3 结果

3.1 ASP对小鼠sALT、sAST及肝脏指数的影响

结果见表1。DEX模型组小鼠sALT、sAST较空白对照组上升 270.4%及83.2%(P＜0.01)，肝脏指数明显增大(P＜0.01)，反映了短期超大剂量使用DEX可产生明显肝脏毒性。与模型组相比，ASP两剂量组均可显著抑制DEX所致小鼠sALT(分别降低23.1%和27.6%)及sAST水平(分别降低18.7%和30.1%)的上升幅度(P＜0.01);且肝脏指数的下降亦具有统计学意义(P＜0.05或0.01)。这些结果表明，ASP对DEX所致肝毒有明显的预防、保护作用，虽然大剂量(200mg/kg)比小剂量(100mg/kg)的干预能力似乎更突出，但两者之间并未见显著性差异(P＞0.05)。

表1 ASP对小鼠sALT、sAST及肝脏指数的影响(n=8，±s)Tab.1 Effects of ASP on activities of sALT，sAST and liver index in mice intoxicated with dexamethasone(n=8，±s)

与对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2P＜0.05，3 P＜0.01Compared with control group:1 P＜0.01;Compared with modle group:2P＜0.05，3P＜0.01

组别剂量/(mg/kg) sALT/(u/L) sAST/(u/L) 肝脏指数/%空白对照组－8.41±2.40 13.56±3.42 4.90±0.21 DEX模型组－ 31.32±9.101 24.84±4.041 5.63±0.401小剂量 ASP 组 100 24.09±3.822 20.19±3.383 5.05±0.302大剂量 ASP 组 200 22.68±3.163 17.37±3.033 4.78±0.193

3.2 ASP对小鼠肝 S9组分 SOD、GSH及MDA活性的影响

结果见表2。ASP两剂量组分别使明显降低的SOD含量升高了17.8% 和20.1%(P＜0.05)。GSH水平亦较模型组有较大程度的恢复，其增幅分别高达10.9%和14.9%(P＜0.05)。同时，模型组小鼠MDA含量有较为显著的增高，而两种剂量ASP均使其有不同程度的下调，以大剂量的下调幅度更为明显。这些结果表明，ASP对DEX导致的抗氧化能力的减弱有较为确切的拮抗作用，且并未呈现出一定的剂量关系。

3.3 ASP对小鼠血糖、血清胰岛素及肝糖原活性的影响

结果见表3。对于DEX引起的血糖水平显著降低，应用ASP进行干预后则出现明显的升高趋势，尤其是大剂量组增幅达17.2%(P＜0.05)。与之相对应的是ASP导致上升的胰岛素水平呈下降趋势，但同样只是大剂量组才具有统计学差异。虽然ASP两剂量组对DEX引起的糖原含量的降低有轻度恢复的现象，但影响并不明显。

表2 ASP对肝S9组分SOD、GSH及MDA活性的影响(n=8，±s)Tab.2 Effects of ASP on activities of SOD，GSH and MDA in mice intoxicated with dexamethasone(n=8，±s)

与对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2 P＜0.05，3 P＜0.01Compared with control group:1 P＜0.01;Compared with modle group:2 P＜0.05，3 P＜0.01

组别剂量/(mg/kg) SOD/(u/mg) GSH/(μmol/g) MDA/(nmol/mg)空白对照组－5.44±0.34 9.69±0.93 0.65±0.05 DEX模型组－ 4.22±0.141 7.81±0.581 0.81±0.091小剂量 ASP 组 100 4.97±0.232 8.66±0.882 0.72±0.032大剂量 ASP 组 200 5.07±0.542 8.97±1.022 0.69±0.043

表3 ASP对小鼠血糖、血清胰岛素及肝糖原活性的影响(n=8，±s)Tab.3 Effects of ASP on ADH activity and levels of blood sugar，hepatin in mice intoxicated with dexamethasone(n=8，±s)

与对照组比较:1 P＜0.01;与模型组比较:2 P＜0.05Compared with control group:1 P＜0.01;Compared with modle group:2 P＜0.05

3.4 ASP对小鼠CYP2E1活性的影响

结果见表4。模型组经DEX处理后，CYP2E1未出现明显改变;预先给予两种剂量ASP，对该指标亦未见明显影响。

表4 ASP对小鼠CYP2E1活性的影响(n=8，±s)Tab.4 Effects of ASPon hepatic CYP2E1 activities in mice intoxicated with dexamethasone( n= 8，±s)

SP/kg)CYP2E1/(nmol/mg·60 min)－105.12±10.29－ 108.20±11.52小剂量 ASP 组 100 115.16±13.05大剂量ASP组200 107.32±12.68

4 讨论

在以往的研究中我们曾发现，ASP能有效干预酒精所致的肝损［5］。本实验结果则进一步显示，ASP对糖皮质激素类药物DEX引起的肝脏毒性同样具有一定的拮抗作用，给予ASP预处理能明显降低小鼠血清转氨酶sALT、sAST的漏出，说明其能稳定生物膜，降低膜的通透性，从而保护肝细胞，且大剂量组的作用似乎更为显著。该结果提示，ASP可能在糖皮质激素所致的药物性肝损伤方面有较好的开发潜力，具有进一步研究的意义。

在探讨其可能的保护机制时我们发现，ASP能使肝脏内SOD、GSH水平增加，而MDA含量降低，提示ASP对DEX所致的肝脂质过氧化反应具有较为确切的抑制作用，这可能是其发挥疗效的重要原因之一。我们前期的研究还显示，短期、超大剂量摄入DEX后血糖水平会有一个暂时的显著下降，同时胰岛素升高、糖原减少，且相关性分析表明，低血糖和高胰岛素与肝脏损害之间存在着高度相关性，提示低血糖及高胰岛素均可能介导了DEX的肝毒作用。而大剂量ASP对于这种糖代谢改变均有不同程度的恢复，说明ASP对血糖的调节可能也是其对抗肝毒性的原因之一。此外，实验结果还显示，介导多种药物肝毒性的CYP2E1似未直接参与DEX的肝毒效应，而ASP对CYP2E1活性亦无明显影响，说明其对肝脏的保护作用可能与CYP2E1的介导并无密切关系。

综上所述，ASP对DEX性肝损伤有较为显著的干预作用，其机制与部分恢复肝脏抗氧化功能、一定程度上改善糖代谢紊乱有关。

［1］华自森，王建伟，宋姝丹，等.当归多糖对K562白血病细胞JAK2、STAT3 表达和活化的影响［J］.解剖学杂志，2009，32(1):8-11.

［2］孙文平，罗红，杨光，等.当归多糖激发免疫反应的特征研究［J］.大连医科大学学报，2009，31(2):262-264.

［3］杨铁虹，贾敏，梅其炳，等.当归多糖组分AP-3对不同淋巴细胞亚群的作用［J］.中国生化药物杂志，2005，26(6):344-346.

［4］Ye Y N，So H L.Effect of polysaccharides from Angelica sinensis on gastric ulcer healing［J］.Life Sci，2003，72(8):925-932.

［5］刘娟，彭仁琇.纯化当归多糖有效干预急性酒精性肝毒作用及其机制［J］.中国医学研究与临床，2006，4(10):7-9.

［6］刘娟，彭仁琇，乐江，等.当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究［J］.华西药学杂志，2004，19(6):412-414.