宫颈上皮内瘤变累腺组织中MMP-7的表达及意义

周晓景 王芳 牛吉峰

宫颈上皮内瘤变累腺组织中MMP-7的表达及意义

周晓景①王芳①牛吉峰①

目的：检测基质降解素(MMP-7)在宫颈上皮内瘤变(CIN)累腺组织中的表达，探讨其对CIN发生、发展以及对CIN预后的影响。方法：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化分别检测30例CIN累腺组织、40例CIN非累腺组织、15例正常宫颈组织中MMP-7 mRNA和蛋白表达。结果：累腺CIN组MMP-7 mRNA和蛋白的表达均显著高于未累腺CIN组和正常组(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白无论在CIN累腺组还是非累腺组Ⅲ期中的表达显著高于Ⅱ期中的表达，比较差异有统计学意义(P<0.05)，在CINⅡ期和正常宫颈组织中的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：累腺CIN中MMP-7高表达可能与宫颈锥切术后复发及发展为浸润性宫颈癌倾向密切相关；MMP-7可作为预测CIN预后的指标。

宫颈上皮内瘤变累腺； MMP-7； 预后

宫颈上皮内瘤变(CIN)是与宫颈癌密切相关的一组癌前病变，对于CINⅡ~Ⅲ期，目前主要治疗方法是宫颈锥切术，而CIN累腺与宫颈锥切术后复发及预后相关[1]。MMP-7在许多上皮性肿瘤中高表达，并且与生存率密切相关。本研究通过检测MMP-7在CIN累腺组织中核酸和蛋白表达情况，探讨MMP-7对CIN累腺预后的影响和意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集CIN组织标本70例，均为Ⅱ~Ⅲ期。CIN累腺组30例，Ⅱ期12例，Ⅲ期18例，年龄26~56岁，平均年龄(36.52±3.81)岁。CIN非累腺组40例，Ⅱ期24例，Ⅲ期16例，年龄25~58岁，平均年龄(37.16±4.20)岁。取标本前未经冷冻、激光及药物治疗，标本在阴道镜下活检取材、病理学确诊。取15例正常宫颈组织作对照，对照组年龄30~52岁，平均年龄(36.90±3.45)岁。新鲜组织离体后迅速放入RNAguard中，-80 ℃保存备用。

1.2 RT-PCR法 总RNA提取及逆转录成cDNA、扩增，操作按试剂盒说明书进行。以GAPDH为内参照。MMP-7引 物 序 列：上 游 5’GTGGTCACCTACAGGATCGT3’， 下游 5’ACCATCCGTCCAGCGTTCAT3’(282 bp)；GAPDH引物序列：上游5’TGGGTGTGAACCACGAGAA3’，下游5’GGAATGGACTGTGGTCATGA3’(143 bp)。MMP-7 和GAPDH的PCR反应条件：94 ℃热变性5 min，以94 ℃变性30 s，59 ℃复性30 s，72 ℃延伸1 min顺序共循环38次，72 ℃延伸5 min。反应产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳(90 V，30 min)，EB染色。用Bandscan 5.0生物电泳分析软件进行分析。所测指标均与GAPDH灰度值比值作为基因水平相对值进行比较。

1.3 免疫组化S-P法 鼠抗人MMP-7单克隆抗体，S-P免疫组化试剂盒，实验步骤按试剂说明书进行，石蜡切片标本厚度小于4 μm，切片脱蜡染色后，于光学显微镜下观察切片显色反应。结果判定：以细胞膜或(和)胞浆呈棕黄色染色为阳性着色。

1.4 统计学处理 应用SPSS 10.0统计软件进行分析，计数资料采取字检验，计量资料以(±s)表示，采取t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MMP-7在CIN累腺组、CIN非累腺组及正常宫颈组中检测结果 MMP-7mRNA在CIN累腺组中的表达显著高于未累腺CIN组及正常组(P<0.05)；MMP-7蛋白主要定位于上皮细胞及腺细胞胞浆，间质细胞中无表达，在CIN累腺组中的阳性表达率显著高于未累腺CIN组及正常组(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白在未累腺CIN组及正常组中的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 MMP-7在CIN不同分期中的表达 无论累腺组还是非累腺组，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表达显著高于Ⅱ期，比较差异有统计学意义(P<0.05)，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期和正常宫颈组织中的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 MMP-7mRNA及蛋白在不同宫颈组织中的表达

3 讨论

宫颈癌的癌前病变CINⅡ~Ⅲ期患者，若不及时有效治疗，约66%可发展为宫颈原位癌，2%进展为浸润癌[2]。宫颈锥切术是目前治疗CINⅡ~Ⅲ期的主要手段，尤其适用于生育期患者。但即使有效治疗，CIN宫颈锥切术后复发率为3.03%~47.30%[3]。而宫颈管腺体受累是术后复发的独立危险因素[4]。MMP-7即基质溶素，具有强大的基质降解活性和广泛的底物特异性，在肿瘤血管的生成和肿瘤的免疫逃避中发挥重要作用[5]。MMP-7在肿瘤中的高表达及其生物学的特异性使其可能成为预测、判断肿瘤生物学行为的新指标。

本研究中，MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN组织中表达显著高于非累腺CIN组织及正常宫颈组织，正常宫颈上皮细胞有弱表达或不表达；MMP-7蛋白在CIN上皮细胞及腺细胞胞浆表达，基质不表达，表明MMP-7在核酸和蛋白水平表达一致，提示MMP-7在CIN累腺组织中的高表达，使不典型上皮细胞具有浸润的倾向。MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN组织中的高表达也证明了MMP-7在CIN细胞表达具有相对特异性，因此推断，MMP-7阳性的累腺CIN是锥切术后易于复发的原因之一，且进展为浸润性宫颈癌的几率也相对升高。本研究中，无论累腺组还是非累腺组，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表达显著高于Ⅱ期中的表达，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期中的表达显著高于正常宫颈组织中的表达，提示MMP-7可能为CIN发生、发展以及进展为宫颈癌的始动原因之一。MMP-7可作为预测CIN预后的指标。临床上通过应用蛋白酶抑制剂阻断MMP-7活性，可能在一定程度上改善累腺CIN患者的预后。

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Expression and Clinic Significance of MMP-7 in Cervical Intraepithelial Neoplasia Glandular Involvement

ZHOU Xiao-jing，WANG Fang，NIU Ji-feng.

Objective:To investigate the expression and the significance of MMP-7 in cervical intraepithelial neoplasia(CIN)glandular involvement.Method:MMP-7 was examined by immunohistochemical SP method and semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) in 70 cases of CIN and 15 cases of normal cervical tissue.Result:The mRNA and protein level of MMP-7 were all significantly higher in CIN glandular involvement group than that in CIN without glandular involvement group and normal group(P<0.05).Either in CIN glandular involvement group or in CIN without glandular involvement group，MMP-7 mRNA and protein level were all notedly higher in CIN Ⅲ group than that in CIN Ⅱgroup(P<0.05).Conclusion:MMP-7 is highly expressed in CIN glandular involvement and it may be relate to cervical squamous cell carcinoma，and may be served as a new marker in predicting the prognosis in CIN.

Cervical intraepithelial neoplasia glandular involvement; MMP-7; Prognosis

Affiliated Luoyang Central Hospital of Zhengzhou University，Luoyang 471000，China

Medical Innovation of China，2012，9(22):014-015

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.22.007

①郑州大学附属洛阳中心医院 河南 洛阳 471000

周晓景

2012-05-21) (本文编辑：李静)