6－BA与IBA双因子对杉木组培苗芽增殖的影响研究

苏家有

（福建省三明市沙县森林资源管理站，福建 三明365500）

1 引言

杉木是植物组织培养的模式植物。生长调节物质是杉木组织培养中不可缺少的一类物质，虽然用量极少，但它们对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。常用的生长素类有2，4－ D、NAA、IAA、IBA，而细胞分裂素类主要有KT、6－BA、ZT、2－iP、4－PU和TDZ。

本研究以杉木为材料，结合本小组和其他2组的实验结果，探讨IBA对愈伤组织形成与分化的作用，以及它和不同浓度6－BA共同使用的效果。

2 材料与方法

2.1 材料

杉木，取自于福建省三明市水南国有林场母树林。

2.2 方法

（1）配制MS培养基母液和植物生长调节物质母液［1］。

（2）配制培养基和灭菌［1］。培养基的配方为：①MS＋6－BA0.5mg／L＋IBA 0.5mg／L（笔者所在的第2实验小组所做），②MS＋IBA 0.5mg／L（由第1实验小组所做），③MS＋6－BA2.0mg／L＋IBA 0.5mg／L（由第3实验小组所做）。

（3）外植体的消毒与接种［1］。观察记录各组的愈伤组织生长情况和污染情况。

（4）愈伤组织的继代培养。将愈伤组织转入配方为MS＋6－BA1.0mg／L＋IBA 0.5mg／L的培养基上进行继代培养，观察记录生长情况。

3 结果分析

3.1 愈伤组织的形成

培养开始的3d内，外植体在形态上并无明显变化，只是其体积比接种时稍微大了一些。5d后，外植体从切口处开始膨大并出现黄色小颗粒，形成愈伤组织，外植体隆起且边缘有卷曲现象。而污染方面，第2组一共接种16瓶培养基，有5瓶出现了霉菌污染，污染率为31.25%。

对比3个实验组的愈伤组织，可以发现，第2组的愈伤组织生长情况与第3组的差不多，而第1组则较差一些（见图1、图2）。

图1 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS＋6－BA0.5mg／L＋IBA 0.5mg／L）

图2 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS＋IBA 0.5mg／L）

3.2 愈伤组织的分化

第2组进行继代培养的愈伤组织在继代培养1周后愈伤组织变紧，有芽形成，但在培养的3周内没有形成根（见图3）。

图3 愈伤组织的分化（培养基配方为MS＋6－BA0.5mg／L＋IBA 0.5mg／L）

而第1组的愈伤组织形成了根，但未形成芽（见图4）；第3组的情况与第2组类似，但出芽率比第2组要高（见图5）。

图4 愈伤组织的分化（培养基配方为MS＋IBA 0.5mg／L）

图5 愈伤组织的分化（培养基配方为MS＋6－BA2.0mg／L＋IBA 0.5mg／L）

3.3 生根率结果

根据观察记录，并进行列表统计，从表1可知，不同处理之间组培苗的生根率差异比较大，处理3的生根率最高为81.0%，处理1生根率最低，为27.9%；不同处理之间的生根时间、平均根数和平均根长存在一定的差异，生根时间基本都在30d左右，平均根条数都在2根左右，平均根长1.9cm左右。

表1 三种方案试验设计统计表

4 讨论

通过实验，可以得出，6－BA与IBA配合使用，可以更有效地诱导愈伤组织的形成。单独使用IBA可促进愈伤组织根的分化，而6－BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6－BA浓度为2.0mg／L时的效果比浓度为0.5mg／L时要好。

IBA属于生长素类物质，其主要作用是诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根。6－BA（6－苄基腺嘌呤）属于细胞分裂素类物质，它可以促进细胞分裂，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长，抑制器官衰老，延缓叶片老化，还能显著改变生长调节物的作用［2］。IBA虽然提高了愈伤组织诱导率，但是可能由于较高浓度的IBA对种胚具有一定的毒害作用，因此会抑制植物的形态发生［3］。而附加低浓度的6－BA是不能有效诱导愈伤组织的分化［4］，加入过高浓度的6－BA则会增进多酚氧化酶活性的作用，从而在培养基内产生并积累了酚、醌类深褐色色素物质，这类物质常因抑制愈伤组织的生长而导致毒害，严重时愈伤组织完全褐化而死亡［5］。

通过对不同无性系在同一培养条件下的生根实验研究表明：不同无性系的生根率在同一培养条件下存在较大的差异，变化范围为16.9%～90.3%。不同重复之间的差异没有达到显著水平，生根能力强的无性系在不同重复试验中生根率都很高，说明各无性系的生根能力受本身基因型的影响。生根率最高的无性系为YL243，达90.3%，而 YL020的生根率也达到了90.2%，这2个无性系在生根率指标方面已达到了进行规模化生产的要求。由此可见，杉木组培苗生根受本身遗传因素即基因型的制约，在杉木组织培养过程中应尽量筛选生根比较容易的基因型，配合以上的培养基配方进行研究，建立杉木优良无性系组培快繁技术体系。

当然，愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量、细胞分裂素和生长素的比例有关，而且还和培养温度、光照强度等有关。在笔者进行培养时，温度都较低，这对于愈伤组织的形成以及根茎的分化都是有影响的。

［1］潘瑞炽.植物细胞工程［M］.广州：广东高等教育出版社，2008.

［2］吴丽芳，陆伟东，丁 伟，等.不同激素配比对红掌叶片愈伤组织诱导的影响［J］.贵州农业科学，2010，38（8）：17～18.

［3］杜雪玲，张振霞，刘 萍，等.2，4－D和6－BA对多年生黑麦草愈伤组织诱导影响的研究［J］.草原与草坪，2005（3）：49～51.

［4］张同庆，姚根怀，吴中心.激素对烟草愈伤组织分化影响的研究［J］.烟草科技，1992（6）：33～36.

［5］王 荔，杨艳琼，杨 德，等.不同激素浓度及培养基对烟草愈伤组织分化的影响［J］.云南农业大学学报，1999，14（4）：372～375.