气质联用分析眼斑芫菁挥发性成分

李晓飞，晏 容，刘 云，娄方明

(遵义医学院， 贵州 遵义 563099)

气质联用分析眼斑芫菁挥发性成分

李晓飞，晏 容，刘 云，娄方明

(遵义医学院， 贵州 遵义 563099)

目的研究眼斑芫菁的挥发油性成分,确定挥发性成分的化学成分组成。方法采用水蒸气蒸馏法提取眼斑芫菁的挥发性成分,并采用气相色谱-质谱联用技术对其进行分析鉴定。结果从眼斑芫菁中共检出64种挥发性成分，其中40种物质结构得以鉴定，以酸类物质含量最多。其中相对百分含量较高的有(E)-9-十八碳烯酸(9.69%)、硬脂酸(5.01%)、1,13-十四碳(3.00%)、亚油酸(1.69%)等。结论眼斑芫菁中含有大量挥发性成分，采用气相色谱-质谱联用技术能够很好的对其分离和鉴定。

眼斑芫菁；挥发性成分；气相色谱-质谱联用

眼斑芫菁MylabriscichoriiLinnaeus，属昆虫纲鞘翅目芫菁科(Mylabris)昆虫，俗称斑蝥、黄黑小斑蝥，是一种重要的抗癌昆虫药物。长江流域及以南各省区均有眼斑芫菁的生长地，贵州省罗甸县盛产芫菁【1,2】，包括眼斑芫菁和大斑芫菁。两种芫菁均性辛，热；有大毒；归肝、胃、肾经；具有破结攻毒，除血积、利尿的功能【3】，已经成为抗肿瘤的重要中药材，可治疗原发性肝癌、贲门癌、喉癌、胃癌、食道癌、消化道肿瘤等癌症【4 -7】。芫菁有特殊的气味，含有大量挥发性物质，闻之过久就会使人产生窒息之感，因此，其挥发性物质的组成和结构也有必要进行深入的研究。而且从民间的应用中，我们发现斑蝥的挥发性成分可能具有一定的药用价值。基于此，我们对贵州产眼斑芫菁的挥发性物质进行了气相色谱-质谱联用分析和鉴定,期望可以更好地利用眼斑芫菁这一特色药用昆虫。

1 材料与仪器

1.1 材料 眼斑芫菁于2009年7月购自贵州罗甸，经笔者鉴定为眼斑芫菁MylabriscichoriiLinnaeus；分析纯无水硫酸钠；分析纯正己烷。

1.2 仪器 美国Agilent公司生产6890-5973N气相色谱-质谱联用仪；梅特勒-托利多公司生产AL204型电子天平(1/10000)；上海精宏实验设备有限公司生产DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱；挥发油测定器。

2 挥发油提取

将眼斑芫菁在50℃下烘干，粉碎机粉碎，过60目筛。取过筛后的样品100 g于500 mL圆底烧瓶中，加入蒸馏水至漫过样品并超出2～3 cm，接上挥发油测定器，参照2010版药典一部附录XD对挥发油进行提取，时间为3～4 h，在提取过程中预先在测定器中加入正己烷5 mL，以收集挥发性物质从而减少挥发性物质溶于水造成的损失。4 h后正己烷呈淡橙色，具特殊气味。将正己烷与水分离并经无水Na2SO4脱水干燥，得纯净的富含挥发油的正己烷提取物，转入具塞小三角瓶中，4℃下密封保存待测。在采用GC-MS分析前以0.45 μm微孔滤膜对样品进行过滤。

3 GC-MS分析

采用气相色谱-质谱联用技术分析所提取的挥发性成分，所得结果用峰面积归一化法计算样品中各组分的相对百分含量，每种物质的结构通过质谱图进行解析，并与美国Wiley7Nist05、NIST05两种质谱数据库的质谱数据进行计算机检索比对,从而鉴定出结构。

色谱条件：HP-5MS(5%苯取代甲基硅酮)色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升温：50 ℃保持5 min,以3 ℃·min- 1升至150 ℃，以4 ℃·min- 1升至230 ℃,保持5 min；汽化室温度：260℃；载气：高纯 He，流速：1 mL·min- 1；进样量：3 μl；分流比20∶1。

质谱条件：离子源温度∶230 ℃；四极杆温度∶150℃；电离方式∶EI，电子能量∶70 eV；溶剂延迟∶4 min；质量扫描范围m/ z ∶30～500。

谱图积分参数：初始面积截出：15；初始峰宽：0.064；初始阀值：14.0；积分时间5～60 min。

4 实验结果

结果经GC-MS分析，从挥发性成分所形成的总离子流图中共发现有64个化合物，总离子流图见图1；其中对质谱图相似度大于85%的物质进行分析鉴定，则有40个成分得到确认，鉴定结果(见表1)。

图1 眼斑芫菁挥发性成分总离子流图

表1 眼斑芫菁挥发性成分的GC-MS 分析结果

5 讨论

本研究发现，眼斑芫菁的挥发性成分组成还是非常丰富，其总离子流图谱组成复杂，有众多微量小峰还无法得以确证。鉴定的40种化合物的相对百分含量总和仅占检出成33.53%，鉴定个数也只占62.5%，表明仍有大量的微量成分仅仅通过质谱还无法分析出来。在所鉴定成分中，以酸类物质含量最多。其中相对百分含量较高的(E)-9-十八碳烯酸(9.69%)、硬脂酸(5.01%)、1,13-十四碳(3.00%)、二烯亚油酸(1.69%)等。在下一步研究中，我们将考察从眼斑芫菁中提取的挥发性物质是否具有抗癌活性，并寻找出相应的活性物质。GC-MS联用技术广泛用于动、植物挥发油、精油及低极性化合物的分析，用本法分析眼斑芫菁的挥发性成分，快速且全面，非常有效。通过对眼斑芫菁挥发性成分的分析鉴定及含量测定,为综合开发利用该药用资源提供了科学的依据。

【1】 孙国祥，雒翠霞，王真.斑蝥HPLC数字化指纹图谱研究【J】.药物分析杂志,2008,28(7):1031-1036.

【2】 高阳,于治国,毕开顺.斑蝥药材指纹图谱分析方法研究【J】.中成药,2005,27(1):4-6.

【3】 中国药典委员会.中华人民共和国药典一部【S】.2005年版.北京：化学工业出版社，2005.233.

【4】 金伟,王亚威,周宗祥,等.斑蝥素对HL260 细胞和QGY7703 细胞的作用研究【J】.中医药学报,2001,29(4):42-43

【5】 李晓飞,侯晓晖,陈祥盛.芫菁斑蝥素对喉癌细胞和胃癌细胞的抑制作用【J】.昆虫学报,2009,52(9):946-951.

【6】 安中原,王正,赵越.斑蝥素及其衍生物的抗肿瘤研究进展【J】.亚太传统医药,2009，5(1)：128-130.

【7】 李丽娜,南克俊,张茜.复方斑蝥注射液联合奥沙利铂对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响【J】.现代肿瘤医学,2011,19(3):438-440.

AnalysisofvolatilecomponentsfromMylabriscichoriiLinnaeusby GC-MS

Lixiaofei,Yanrong,Liuyun,Loufangming

(Zunyi Medical College,Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo study the volatile components fromMylabriscichoriiLinnaeusand further determine the chemical structure of these components.MethodsVolatile components were extracted by steam distillation and the chemical structure was analyzed by GC-MS.ResultsSixty-four volatile components were detected by GC-MS,in which 40 components were identified.The main constituents of 40 components were (E)-9-Octadecenoic acid (9.69%),Octadecanoic acid (5.01%),1,13-Tetradecadiene (3.00%) and 9,12-Octadecadienoic acid (1.69%).ConclusionMylabriscichoriiLinnaeuscontains plenty of volatile components and GC-MS could be well used to isolate and identify the volatile components.

MylabriscichoriiLinnaeus;volatile components;GC-MS

国家自然科学基金项目(NO：81260488)；贵州省优秀科技教育人才省长资金项目(NO：黔省专合字【2010】48)；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目(NO：黔科合社字【2009】5042)；贵州省科技厅项目(NO：黔科合J字LKZ【2011】01)；贵州省中药现代化项目(NO:黔科合ZY字【2012】3009)。

娄方明，男，副教授，研究方向：中药成分分析，E-mail:Lousen1977@126.com。

S899.9

A

1000-2715(2012)05-0375-04

【收稿2012-07-27；修回2012-09-29】

(编辑：谭秀荣)