RP－HPLC－ELSD法测定野生白花丹药材1～12月份根、茎、叶中β－谷甾醇的含量＊

戴先芝，丁 玲，黄艳菲，李艳丹，张吉仲，刘 圆△

（1.阿坝师范高等专科学校，四川 汶川623002；2.西南民族大学民族医药研究院，四川 成都610041）

白花丹是双子叶植物蓝雪科植物白雪花（Pl umbago zeyl anica L.）的全草［1］。为多民族医常用药材，民间应用广泛，具有散瘀消肿、祛风止痛等功效［1］。收载于1996年版《广西中药材标准》第二册和1998年版国家卫生部部颁维药标准。文献资料及本课题组前期的研究表明，白花丹具有抗肿瘤、抗炎、抗肝损伤等药理作用［2～8］。目前国内外日益重视白花丹药材的应用和开发，除有效成分白花丹醌外，对其有效成分β－谷甾醇的研究报道较少。本实验拟对野生白花丹药材1～12月份的根、茎、叶中的β－谷甾醇含量进行测定，以期为白花丹野生变家种提供有用的实验数据。

1 实验材料

1.1 仪器 Waters 2695系列高效液相色谱仪（Waters公司），Empower色谱工作站，浙江大学N2000色谱工作站，Sedex－75型蒸发光散射检测器（奥泰公司）；色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）。RE－52A型旋转蒸发器。METTLER AE 240双量程分析天平。

1.2 试药 β－谷甾醇对照品（成都市药检所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；所用提取试剂均为分析纯。

1.3 药材 实验所用药材样品采自于白花丹最适产地云南西双版纳（中国医学科学院药用植物研究所南药园），经西南民族大学刘圆教授鉴定。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为纯甲醇；流速为1.0 mL／min；柱温25℃；蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度65℃，N2流速为2.5 L·min－1。色谱图见图1～图2。

图1 β－谷甾醇对照品HPLC色谱图（A）

图2 样品HPLC色谱图（B）

2.2 对照品溶液的制备 精密称取β－谷甾醇对照品10.3 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，制成0.103 mg／mL的溶液作为对照品。

2.3 样品溶液的制备 精密称取白花丹药材样品约3 g，置于索氏提取器中，精密加入150 mL的甲醇溶液，索氏提取3 h，取出放冷，挥去溶剂，用甲醇溶解于25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线的制备 分别精密吸取β－谷甾醇对照品溶液，依选定色谱条件，测定不同进样量下β－谷甾醇的峰面积值，得回归方程为：Y＝1.500 5 X＋5.683 6，r＝0.998（n＝6）。表明β－谷甾醇在0.103～2.575μg范围内与峰面积值线性关系良好。

2.4.2 精密度试验 分别精密吸取β－谷甾醇10μL，各重复进样6次，得RSD为0.015%，结果表明精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取同一样品根溶液20μL，按选定色谱条件下于0、2、4、6、8 h测定样品溶液中β－谷甾醇峰面积值，得RSD为0.029%，表明样品稳定性良好。

2.4.4 重复性试验 分别精密取同一白花丹根药材6份，各约3 g，按样品溶液制备项下方法制备样品，按照选定的色谱条件测定6份样品溶液中β－谷甾醇的含量，得RSD为1.284%。

2.4.5 加样回收率试验 精确称取已知含量的白花丹药材9份，各约3.0 g，分别加入浓度为0.131 mg／mLβ－谷甾醇对照品溶液，按样品溶液制备方法制备并测定，结果见表1。

表1 β－谷甾醇加样回收率试验结果（n＝9）

2.5 样品含量测定 取白花丹野生1～12月份药材根、茎、叶按2.3项下样品溶液的制备方法制备，进样量为10μL，测定β－谷甾醇的含量，结果见表2。

表2 1～12月份根、茎、叶中β－谷甾醇的含量（n＝3）

3 小结与讨论

野生白花丹1～12月份药材根中β－谷甾醇含量变化范围为0%～0.0681%，茎中β－谷甾醇含量变化范围为0%～0.0874%，叶中β－谷甾醇含量变化范围为0.0424%～0.1367%。白花丹药材中β－谷甾醇含量在叶中含量最高，根中含量最低或未检出，说明有些少数民族地区采用叶来抗炎、消肿是有科学依据的。野生白花丹叶可作为再生资源。由含量变化可看出β－谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高，冬季含量最低。

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