大肠癌中NDRG-1及P53的表达及其与肿瘤浸润转移的关系

张云昌 赵卫强 王凤安

1.邢台矿业集团总医院消化外科，河北邢台 054000；2.邢台威县章台中心卫生院，河北威县 054702；3.河北医科大学第二医院胃肠外科，河北石家庄 050000

大肠癌中NDRG-1及P53的表达及其与肿瘤浸润转移的关系

张云昌1赵卫强2王凤安3

1.邢台矿业集团总医院消化外科，河北邢台 054000；2.邢台威县章台中心卫生院，河北威县 054702；3.河北医科大学第二医院胃肠外科，河北石家庄 050000

目的探讨抑癌基因NDRG-1及P53在大肠癌组织中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系。方法用免疫组化法检测NDRG-1及P53蛋白在大肠癌组织及正常大肠组织中的表达情况。结果NDRG-1在大肠癌组织中的表达明显降低，与肿瘤浸润、淋巴转移情况密切相关（P＜0.05）。P53（突变型）基因在大肠癌组织中的表达明显增高，与肿瘤浸润密切相关（P＜0.05），而与肿瘤转移无关（P＞0.05）。结论抑癌基因NDRG-1与P53（野生型）在大肠癌浸润过程中具有较为明显的协同或调控作用，在淋巴结转移过程中两者无明显的协同作用，NDRG-1与P53在大肠癌组织中的表达具有相关性。检测两基因对临床的大肠癌手术治疗及预后具有一定的参考意义。

大肠癌；NDRG-1；P53

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国近20年来发病率逐年递增，但肿瘤的病因尚未明确。目前的研究表明抑癌基因在大肠癌的发展转移中起着非常的重要作用，NDRG-1和P53均为抑癌基因，且NDRG-1抑制大肠癌发展转移的过程与P53基因相关。本研究采用免疫组化（S-P）法，检测正常大肠组织及大肠癌中NDRG-1及P53的表达，观察两者在大肠癌组织中的表达情况及相关性，探讨这两种抑癌基因与肿瘤浸润及转移的关系，以期对临床大肠癌治疗及预后的判断提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2007～2008年河北医科大学第二医院手术切除并经病理组织学证实的大肠癌标本38例（肿瘤组），其中，男21例，女17例，平均年龄58岁，入选病例皆未进行任何化疗或放疗。15例正常大肠组织取自经病理证实的外伤或良性疾病患者（正常组），其中，男9例，女6例，平均年龄56岁。两组一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 试剂

NDRG-1兔抗人多克隆抗体和P53鼠抗人单克隆抗体分别购自英国Abcam公司和美国Santa Cruz公司；免疫组化染色SP试剂盒购自北京中杉公司。

1.3 方法

标本切片厚4μm，采用免疫组化法，按试剂盒使用说明书操作，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断

P53蛋白定位于细胞核，连续观察10个高倍视野，出现黄或褐色细胞数≥25%为阳性。NDRG-1蛋白定位于细胞浆内，连续观察10个高倍视野，每个视野记数100个细胞，阳性为出现黄至棕褐色颗粒，结果判断采用半定量积分法。①据阳性细胞所占百分比：≤5%计为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3分；②据着色强弱：无显色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项乘积为最终结果：0分为阴性，1～2分为弱阳性（±），3～6分为阳性（+），＞6分为强阳性（++），其中，≥3分统计为阳性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；采用Spearman秩相关分析两种蛋白表达的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NDRG-1及P53蛋白在肿瘤组及正常组中的表达情况

肿瘤组中NDRG-1蛋白表达阳性率为21.05%（8/38），正常组中其表达阳性率为66.67%（10/15）；两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。肿瘤组中P53蛋白表达阳性率为81.58%（31/38），正常组中其表达阳性率为6.67%（1/15）；两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 NDRG-1及P53在肿瘤组及正常组中的表达情况（例）

2.2 NDRG-1及P53与肿瘤浸润、转移的关系

NDRG-1在大肠癌组织中的表达与肿瘤浸润程度及淋巴结转移密切相关（P＜0.05），P53的表达与肿瘤浸润程度有关（P＜0.05），与淋巴结转移无关（P＞0.05）。见表2。

表2 NDRG-1及P53在大肠癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系

2.3 NDRG-1与P53（突变型）基因在大肠癌组织中表达的相关性

Spearman秩相关分析发现，NDRG-1与P53（突变型）基因在大肠癌组织中表达呈负相关，相关系数（r）为-0.402（P= 0.01）。见表3。

表3 NDRG-1与P53（突变型）在大肠癌组织中表达的相关性

3 讨论

肿瘤发生发展及转移是个非常复杂的过程，到目前还不确切清楚其原因。抑癌基因具有抑制肿瘤生长的作用，NDRG-1基因为新发现的抑癌基因，是由Van等[1]通过观察结肠癌细胞株HT29-D4体外诱导分化过程中基因表达的变化发现并首先命名的。NDRG-1基因在结肠上皮细胞分化过程中高表达，而在结肠肿瘤细胞中呈现低表达。研究发现，NDRG-1对肿瘤有比较明显的抑制作用，可能是通过参与P53和PTEN基因的调控，抑制VEGF基因表达，抑制肿瘤形成新生血管，达到抑制肿瘤浸润和转移的目的[2]。Stein等[3]也发现，NDRG-1是P53的一个靶基因，通过P53基因的调控作用来抑制肿瘤的发展。Kurdistani等[4]通过检测多种瘤株和瘤组织中NDRG-1基因的表达情况，发现瘤株和瘤组织中NDRG-1基因均为低表达，而在NDRG-1基因高表达时则明显可以抑制肿瘤细胞的生长。在体外试验中已经证明，NDRG-1可以抑制肿瘤生长。马薇等[5]研究发现，在乳腺癌淋巴结转移中NDRG-1低表达，表明与肿瘤转移有关。

野生型P53基因是重要的抑癌基因，在细胞增殖、凋亡过程中起重要的作用，但P53基因不稳定，易突变，突变后的P53基因失去对细胞增殖、凋亡的调控作用，易导致肿瘤发生。人类几乎所有肿瘤中都有不同程度的P53基因突变，包括乳腺癌、肝癌、直肠癌、胃癌等许多肿瘤中突变型P53表达均明显增高[6]。

本研究发现，NDRG-1在大肠癌组织中的表达明显降低。NDRG-1的表达情况与大肠癌浸润程度、淋巴结转移情况密切相关，表明其在大肠癌的浸润转移中起着抑制作用。刘瑛瑛等[7]研究也发现，NDRG-1对HT-29人结肠癌细胞株侵袭和迁移有抑制作用。本研究显示，P53（突变型）基因在大肠癌组织中的表达明显增高，与肿瘤浸润程度密切相关，与淋巴结转移无关，表明P53基因突变可能参与调控大肠癌的发展过程，且两种基因在大肠癌组织中的表达呈负相关。说明野生型P53与NDRG-1同为抑癌基因，在大肠癌的发展、浸润过程中起着协同作用，且可能P53基因对NDRG-1在大肠癌浸润及转移的作用起着控制作用。Wang等[2]的研究也说明了NDRG-1通过P53调控参与抑制肿瘤浸润、转移。因此，检测该两种基因在大肠癌组织中的表达情况及其与肿瘤浸润、转移的关系对肿瘤诊断治疗有较大的帮助。

[1]Van BN，Dinjens WN，Diesveld MP，et al.A novel gene which is upregulated during colon epithelial cell differentiation and down-regulated in colorectal neoplasms[J].Lab Invest，1997，77（1）：85-92.

[2]Wang Z，Liu Q，Chen Q，etal.Over expression of NDRG-1：relation ship with pro-liferative activity and invasiveness of breast cancer cell line and breast cancermeta stasis[J].Chin JPathol，2006，35：333-338.

[3]Stein S，Thomas EK，Herzog B，et al.NDGR-1 is necessary for p53-dependent apoptosis[J].JBiochem，2004，11（19）：48930-48940.

[4]Kurdistani SK，Arizti P，Reimer C，et al.Inhibition of tumor cell growth by RTP/rit42 and its responsiveness to p53 and DNA damage[J].Cancer Res，1998，58（19）：4439-4444.

[5]马薇，吴云飞.NDRG-1在乳腺癌中的表达及意义[J].现代肿瘤医学，2011，19（5）：919-921.

[6]于新明，林国乐，肖毅，等.早期直肠癌中p53和hMLH1的表达[J].中国普外基础与临床杂志，2010，17（9）：889-893.

[7]刘瑛瑛，王芳，邹英鹰，等.NDRG-1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响[J].实用肿瘤杂志，2011，26（2）：139-143.

The relationship between P53,NDRG-1 expression in colorectal carcinoma tissue and tumor invasion and metastasis

ZHANG Yunchang1 ZHAOWeiqiang2 WANG Fengan3
1.Department of Digestive Surgery,XingtaiMining General Hospital,Heibei Province,Xingtai 054000,China;2.Zhangtai Center Hospital ofWei County in Xingtai City,Heibei Province,Weixian 054702,China;3.Department of Gastrointestinal Surgery,the Second Hospital of HebeiMedical University,Heibei Province,Shijiazhuang 050000,China

ObjectiveTo investigate the expression of NDRG-1,P53 tumor suppressor genes in colorectal carcinoma tissue and its relationship with tumor invasion and metastasis.MethodsImmunohistochemistrymethod was used to detect the expression of NDRG-1 and P53 in colorectal carcinoma tissue and normal colorectal tissue.ResultsThe expression of NDRG-1 in colorectal cancer tissue decreased significantly,and its closely related to the invasion and lymph nodemetastasis of tumor(P＜0.05).The expression of P53(mutant)in colorectal cancer tissue significantly increased,its closely related to tumor-infiltrating(P＜0.05),but unrelated with tumormetastasis(P＞0.05).ConclusionTumor suppressor gene P53 and NDRG-1(wild-type)have obvious synergy or regulation effect in the process of colorectal carcinoma invasion,but they have no obvious synergy in lymph node metastasis.The expression of NDRG-1 and P53 is relevant in colorectal cancer tissue.Therearecertain referencesignificancein colorectalcancersurgicaltreatmentand prognosisbydetectionof the twogenes.

Colorectal carcinoma;NDRG-1;P53

R735.3+4

A

1673-7210（2012）11（b）-0054-02

张云昌（1966-），外科副主任医师，主要从事胃肠外科的研究。

2012-06-26 本文编辑：程铭）