Clusterin、Livin、和P53在胃癌中的表达及意义

王国利 李景武

1.河北省唐山市人民医院药剂科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民医院胃肠外科，河北唐山 063001

Clusterin、Livin、和P53在胃癌中的表达及意义

王国利1李景武2

1.河北省唐山市人民医院药剂科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民医院胃肠外科，河北唐山 063001

目的研究Clusterin（簇集蛋白）、Livin（凋亡抑制蛋白）和野生型P53在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测42例胃癌组织和30例正常胃组织中Clusterin、Livin和P53蛋白的表达情况。结果Clusterin、Livin和P53在胃癌组织中的阳性表达率分别为71.4%、85.7%和76.2%，均为高表达；Clusterin、Livin和P53蛋白的表达与与有无淋巴结转移、分化程度、浸润深度和TNM分期相关（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的表达在生存时间分别＜3年及≥3年时差异有统计学意义（P＜0.05）。结论Clusterin、Livin、和P53在肿瘤侵袭转移中发挥了重要作用，检测Clusterin、Livin和P53的表达可作为预测胃癌的转移趋势指标，为胃癌的诊治提供临床参考。

胃癌；簇集蛋白；凋亡抑制蛋白；P53；免疫组化

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，在肿瘤患者中，其死亡率排在第二位，极大地危害着人类的健康。尽管胃癌通过手术、放化疗等取得了一定疗效，但远期效果仍不能令人很满意，最终多死于复发和转移，因此探索新的治疗方法意义重大。肿瘤的发生发展是多因素、多阶段共同作用的结果，大量的研究表明，Clusterin、Livin、P53蛋白与肿瘤的生长和转移关系密切[1-2]。本研究旨在探讨Clusterin、Livin和P53蛋白在胃癌的表达情况以及其临床意义，为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2008年7月～2009年7月收治的行手术治疗的42例胃癌患者的临床资料。所有患者术前均未进行过化疗、放射治疗，病理诊断均为胃腺癌。其中男30例，女12例，年龄43～74岁，平均（55.3±6.8）岁，组织学分型：高中分化者16例，低分化者占26例。临床分期：Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期25例。淋巴结转移22例。选取30例正常胃黏膜组织标本（距癌旁5 cm以上的胃黏膜组织）作为对照组。

1.2 试剂和方法

兔抗人Clusterin及Livin单克隆抗体，兔抗人P53多克隆抗体（购自美国SANTA CRUZ公司），SP9001试剂盒和DAB显色试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。免疫组织化学染色采用链酶卵白素-生物素过氧化物酶法（SP法）。Clusterin、Livin和P53抗体稀释倍数均为1∶100，DAB显色，苏木素复染，染色步骤严格按说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，细胞质或细胞核中呈现棕黄色染色颗粒为阳性细胞。

1.3 判定标准

采用Olympus BX51型光学显微镜观察并摄片。光学显微镜下，计算出每10个高倍视野中染色为阳性的肿瘤细胞百分率，具体如下，显色细胞数（染色阳性百分比）：＜5%定为0分；6%～20%定为1分（弱+）；21%～50%定为2分（+）；＞50%定为3分（++），本实验数据统一采用总积分＞1，即阳性表达作为统计分析的标准。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行统计分析。计数资料采用χ2比较（即：四格表或R×C表的χ2检验），以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常胃黏膜组织和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表达

Clusterin、Livin和P53的表达情况如表1所示，Clusterin、Livin、P53阳性表达主要定位于癌细胞的胞质，呈棕黄色或棕褐色，阳性表达率分别为71.4%、85.7%和76.2%，三者在正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为20.0%、33.3%、26.7%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 Clusterin、Livin和P53的表达与胃癌临床病因素的关系

如表2所示，Clusterin、Livin和P53的阳性表达与有无淋巴结转移、分化程度、浸润深度和TNM分期有关（P＜0.05）；与年龄、性别、肿瘤的部位、肿瘤的大小及大体分型差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 Clusterin、Livin和P53的表达与患者3年生存率的关系

如表3所示，对42例胃癌患者进行跟踪随访，3年内患者的死亡例数为14例，Clusterin、Livin蛋白的表达在生存时间分别＜3年及≥3年时差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

细胞凋亡是由基因控制的细胞主动地程序性死亡过程。凋亡障碍使细胞生存延长，突变的细胞积累而导致肿瘤的形成。大量的研究表明，肿瘤发生发展的重要原因之一可能是由于凋亡的抑制作用所致。细胞凋亡的调控因子包括诱导因子和抑制因子。抑制因子包括Clusterin、IAP家族、Bcl-2、BclxL、Mcl-l等，诱导因子包括P53、Caspases家族、Fas/FasL和Bax等[3]。

Clusterin是一种新发现的凋亡抑制因子，是一种硫酸化糖蛋白的异构二聚体，在多种组织中发现这种蛋白的表达，Clusterin可能是在细胞外发挥抗凋亡作用的[4]。Livin基因是最新发现的细胞凋亡抑制蛋白家族成员之一，近年来，以Livin为靶点的肿瘤基因治疗策略备受关注。Livin编码双重底物特异性磷酸酶，具有脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性，Livin可能通过脂质磷酸酶的活性调节细胞生长，其可在G1期阻断细胞周期进程，Livin基因作为一种抑癌基因，多数正常成人组织中不表达，而在一些肿瘤组织细胞中高表达，其异常高表达常引起组织细胞凋亡受阻，与肿瘤的发生密切相关[5-6]。p53基因分为野生型和突变型两种。野生型p53基因为抑癌基因，野生型p53基因发生突变后，转变为突变型p53基因，成为癌基因。野生型p53基因是细胞生长周期中的负调节因子，突变型p53基因丧失了对细胞增殖的监控作用，可以促进细胞增殖、转化及癌变[7-8]。

表1 正常胃组织和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表达[n（%）]

表2 Clusterin、Livin和P53的表达与胃癌临床病因素的关系（例）

表3 胃癌中Clusterin、Livin和P53的表达与患者3年生存率的关系[n（%）]

本研究结果显示，Clusterin、Livin和P53的阳性表达均为高表达，且与有无淋巴结转移、分化程度、浸润深度和TNM分期有关（P＜0.05）；提示三者可能抑制了胃癌细胞的凋亡，促进肿瘤细胞分裂，与胃癌发生和生长关系密切。预示着随着胃癌的生长、分化程度的降低其侵袭和转移能力逐渐增强。本研究结果还显示，Clusterin、Livin蛋白的表达在生存时间分别＜3年及≥3年时差异有统计学意义（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的高表达可能预示肿瘤有较高的侵袭性和预后不良。与国内外相关研究结果一致[9-11]。

综上所述，笔者认为Clusterin、Livin和P53蛋白的表达水平与胃癌的发生、发展、侵袭和转移有密切的关系，可以作为评估胃癌的生物学行为、预测转移趋势的重要指标之一，为胃癌的诊治制定更加积极、合理、有效的治疗方案提供依据和参考。

[1]LiML，Li SG，Wu WG，et al.Differential gene expression profiles of gastric cancer[J].Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2012，92（18）：1249-1252.

[2]Zhang MS，Mao WZ，Zhou YB，et al.Analysis of prognostic factors for gastric stump cancer[J].Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2012，34（3）：236-239.

[3]赵桂梅.凋亡抑制蛋白Livin在胃癌治疗中的研究进展[J].肿瘤防治研究，2011，38（10）：1201-1203.

[4]Bi J，Guo AL，Lai YR，et al.Overexpression of clusterin correlates with tumor progression，metastasis in gastric cancer：A study on tissue microarrays[J].Neoplasma，2010，57（3）：191-197.

[5]李梅，姚乐，惠起源，等.Livin、Ki-67蛋白在胃癌中的表达及意义[J].现代肿瘤医学，2011，19（2）：302-304.

[6]Liu P，Wang TS，You SH，et al.Expression of livin in gastric cancer and effectofsilencing of the livin gene on apoptosis in gastric cancer cells[J]. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2007，29（8）：570-574.

[7]赵文江，张锐锋，秦红，等.Livin与Caspase-9、p53与胃癌关系的研究进展[J].中国现代医学杂志，2009，19（6）：872-876，882.

[8]何均辉，邹秀玲，李忠楚，等.P53蛋白在胃癌中的表达分析[J].中国医药导报，2012，9（5）：86，88.

[9]Zhu Y，Qiu M，Zhou J，et al.Analysis of the p53 transcriptional activity in gastric cancer[J].Zhonghua YiXue YiChuan Xue Za Zhi，2010，27（1）：60-65.

[10]李月锋，曲宏岩，张东欣，等.Pokemon、Ki-67及Livin蛋白在胃癌中的表达及意义[J].中国现代普通外科进展，2012，15（3）：179-182.

[11]何永龙，叶丽红，张春，等.Livin、Survivin在胃癌发生发展中的作用[J].放射免疫学杂志，2012，25（2）：225-227.

Expression and clinical significance of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer

WANGGuoli1 LIJingwu2
1.Department of Pharmacy,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China;2.Department of Gastrointestinal surgery,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China

ObjectiveTo study the expression of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer,and to investigate the clinical significance of Clusterin,Livin and P53 proteins expression.MethodsExpression of Clusterin,Livin and P53 in 42 specimens and 30 normal tissue specimens of gastric cancer was determined by immunohistochemical staining.ResultsThe positive rate of Clusterin,Livin and P53 was 71.4%,85.7%and 76.2%.The expression of Clusterin,Livin and P53 in the tissue of gastric cancer was significantly higher than that in normal gastric tissue,the expression of Clusterin,Livin and P53 protein was associated with lymphaticmetastasis,infiltration depth,degrees of differentiation and TNM staging(P＜0.05). Clusterin,Livin protein expression compared in survival time＜3 and≥3 had statistical significance(P＜0.05).ConclusionClusterin,Livin and P53 protein play a critical role in tumormetastasis.Co-detection of the expression of Clusterin, Livin and P53 protein can be used to predict themetastatic potential of gastric cancer,and it provides clinical reference for the diagnosis and treatment of gastric cancer.

Gastric cancer;Clusterin;Livin;P53;Immunohistochemistry

R735.2

A

1673-7210（2012）11（b）-0020-03

2012-09-11 本文编辑：郝明明）