红魔芋块茎组培培养基筛选试验

蒋晓云，陈燕萍，常梅仙，杨红梅，马继琼，尹桂芳

（1.西双版纳州农业科学研究所，云南景洪666100；2.云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，云南昆明650223）

魔芋 （Amorphophalms konjac）为天南星科魔芋属多年生草本植物，具有较发达的地下块茎，是目前人类认识的唯一大量含有葡甘聚糖的植物，被广泛应用于食品、医药、化工等方面。红魔芋 [Amorphophallus bulbifer （Roxb.）Blume]是近年来在西双版纳州发现的一个魔芋新种，因其地下块茎的肉质颜色为红色至浅红色而得名。红魔芋植株健壮，球茎形态好，葡甘聚糖含量高，且有较强的抗病性。魔芋无性繁殖使种芋带病严重，品质退化，优良种芋的奇缺已成为魔芋产业发展的一个瓶颈问题。通过开展红魔芋块茎组培培养基筛选试验，选择最适宜的培养基配方，为红魔芋组织快繁技术提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

选择健康红魔芋块茎 （块茎直径10～15 cm）。

1.2 试验设计

1.2.1 愈伤组织诱导、不定芽分化培养基

选用8种不同激素配方 （表1），每个处理接种100瓶，每瓶接种1块外植体，通过观察记录外植体生长情况，找出适合于红魔芋愈伤组织诱导、不定芽分化的培养基。培养基pH=5.8～6.0。

1.2.2 生根培养基

选用4种不同激素配方 （表2）对根进行诱导试验，每个处理接种20瓶，通过观察记录找出最适合诱导红魔芋生根的培养基。

表1 不同激素配比的培养基

表2 不同激素配比的生根培养基

1.3 试验方法

1.3.1 外植体消毒

将红魔芋的块茎用自来水冲洗干净，放入1%洗衣粉水中冲洗5 min，并搅拌，后用清水冲洗干净。置于阴凉通风处晾干，将晾干的块茎外皮削净，在75%酒精中浸泡30 s，无菌水冲洗1次；0.1%升汞水浸泡20min，无菌水冲洗4次；在无菌条件下削掉因灭菌损坏的表面，切成1 cm3左右的小块待用。

1.3.2 愈伤培养

在25±2℃暗培养室内进行培养。

1.3.3 继代培养

置于温度25±2℃，光照8 h，光强1 500 lx的培养室培养。

1.4 数据统计

不定芽分化率 （%）=不定芽诱导材料/接种外植体未污染数×100

生根率 （%）=生根苗数/未污染苗数×100

愈伤组织诱导率 （%）=愈伤组织诱导数/接种外植体未污染数×100

2 结果与分析

2.1 不同培养基对愈伤组织诱导的影响

将处理好的红魔芋块茎外植体接种在A1～A8培养基上，试验发现，外植体培养10 d左右开始膨大，继续培养20 d后，其表面有白色或粉红色的愈伤组织。从表3可看出，诱导率随培养基的不同表现出一定的差异，A2培养基诱导率明显高于其它培养基，说明MS＋6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L为最适合红魔芋愈伤组织诱导的培养基。

表3 不同培养基对愈伤组织的诱导效果

2.2 不同培养基对不定芽分化的影响

将在同一种培养条件下获得的愈伤组织切割成0.5 cm左右的小块，接种在A1～A8培养基上，培养30 d左右，愈伤组织在不同激素的培养基上继续生长，表面形成淡绿色、粉红色的不定芽。从表4可以看出，不同激素配比的培养基对不定芽分化有较大的影响， 在 A8 （MS＋6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）培养基上分化率达87.1%，说明此培养基可作为红魔芋不定芽分化的最适培养基。

表4 不同培养基对不定芽的分化效果

2.3 根诱导培养基的筛选

将切去愈伤组织的有效芽苗植入不同配比的生根培养基中，在温度25±2℃、光强1 500 lx、每天光照8 h的条件下培养，10 d后观察生根情况。试验结果表明 （表5），B1培养基 （1/2MS+NAA 1.0mg/L+活性炭1 g/L）中红魔芋组培苗的生根率最大，达100%，其诱导的根长度约为1 cm，且较粗壮，为最适合根诱导的培养基。

表5 不同配比培养基的生根效果

3 讨论

（1）红魔芋块茎中含有多种多酚类物质，在多酚氧化酶的作用下极易发生褐变，是制约红魔芋组培成功的瓶颈问题。为有效防止离体组织褐变，张兴围等在培养基中添加0.1%Vc和0.1%PVP，对防褐化有一定作用。王玲等从外源激素、培养基浓度、培养条件及培养材料的生理状态等方面对魔芋组培过程中出现褐变的成因进行了探讨。应用同行的研究成果，可有效防止红魔芋块茎组培中的褐变问题。

（2）本试验是分别在MS基本培养基中添加不同浓度水平的6-BA和NAA，以观察红魔芋愈伤组织形成、不定芽分化和生根情况，最终选择对愈伤组织形成快、不定芽长势好、增殖系数大的培养基配方作为最佳配方。试验结果表明，MS＋6-BA 0.5mg/L＋NAA0.1 mg/L为适宜愈伤组织诱导的培养基；MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA 1.0mg/L为适宜不定芽分化的培养基；1/2MS＋NAA 1.0mg/L＋活性炭1 g/L为适宜生根的培养基。